Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties / Identificação bacteriana, contagem de células somáticas, perfil antimicrobiano e pesquisa de linhagens toxigênicas de Staphylococcus em amostras de leite bovino de pequenas propriedades rurais

Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.(AU)

A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao "California mastitis test" (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.(AU)

Análise bacteriológica e físico-química de leite cru resfriado, proveniente de posto de refrigeração, sob inspeção federal, em Rio Bonito, RJ

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica e fisico-química do leite cru de propriedades rurais do município de Rio Bonito-RJ e arredores, foram analisadas 20 amostras de leite provenientes de Posto de Refrigeração, subsidiado à Indústria Nestlé, coletadas de latões e de tanque de refrigeração. Realizaram-se análises microbiológicas como Contagem Total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Mesófilas (B.H.A.M), Contagem total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Psicotrófilas (B.H.A.P) seguindo as análises fisico-químicas, tais como: temperatura, acidez titulável, prova alizarol, lactofermentação, prova da redução e contagem de células somáticas. Para as variáveis da prova do alizarol houve reprovação em 20% das amostras, já para acidez 95% estavam dentro dos padrões normais. A temperatura das amostras, no ato da coleta, apresentou grandes variações em decorrência da distância e transporte inadequados. No teste da redutase apenas 15% foram consideradas boas ou ótimas e na lactofermentação 100% das amostras formaram algum tipo de coágulo. Em relação à contagem de bactérias, as B.H.A.M foram encontradas fora dos padrões em 65% das amostras e nas B.H.A.P em 80% dos resultados encontrados. Quanto à contagem de células somáticas apenas uma amostra apresentou-se fora do padrão. Conclui-se que a qualidade do leite pode ser melhorada por meio de assistência técnica e instrucional aos produtores, considerando os aspectos da legislação vigente associados à higienização adequada dos latões e utensílios de ordenha. O leite deve ser resfriado na fazenda e transportado sem delongas até a cooperativa.

With the objective of evaluating the microbiology and physicochemical quality of raw milk from rural properties in the city of Rio Bonito-RJ and surrounding areas, were analyzed 20 samples of raw milk from Refrigeration Station, subsidized by Nestlé, collected from bulk milk collectors and cooling tank. Microbiological analyzes were performed as Total Counting of Mesophilic Aerobic Heterotrophic Bacteria (MA.H.B), Total Counting of Heterotrophic Aerobic Psychophotrophic Bacteria (H.A.P.B) and physicochemical analyzes: temperature, titratable acidity, alizarol test, lactofermentation, reduction test and cell count somatic cells. For the variables of the alizarol test there was reprobation in 20% of the samples, already for acidity 95% were within normal standards. The temperature of the samples, at the time of collection, presented great variations due to inadequate distance and transport. In the reductase test only 15% were considered good or optimal and in the lactofermentation 100% of the samples formed some type of clot. Regarding bacterial counts, M.A.H.B. were found out of standards in 65% of samples and in H.A.P.B in 80% of the results found. As for somatic cell count, only one sample was out of standard. It is concluded that the quality of milk can be improved by providing technical and instructional assistance to producers and by appropriate hygiene of brass and milking utensils. The milk should be cooled on the farm and transported without delay to the Milk Collection Centers.

Análise bacteriológica e físico-química de leite cru resfriado, proveniente de posto de refrigeração, sob inspeção federal, em Rio Bonito, RJ

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica e físico-química do leite cru de propriedades rurais do município de Rio Bonito-RJ e arredores, foram analisadas 20 amostras de leite provenientes de Posto de Refrigeração, subsidiado à Indústria Nestlé, coletadas de latões e de tanque de refrigeração. Realizaram-se análises microbiológicas como Contagem Total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Mesófilas (B.H.A.M), Contagem total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Psicotrófilas (B.H.A.P) seguindo as análises físico-químicas, tais como: temperatura, acidez titulável, prova alizarol, lactofermentação, prova da redução e contagem de células somáticas. Para as variáveis da prova do alizarol houve reprovação em 20% das amostras, já para acidez 95% estavam dentro dos padrões normais. A temperatura das amostras, no ato da coleta, apresentou grandes variações em decorrência da distância e transporte inadequados. No teste da redutase apenas 15% foram consideradas boas ou ótimas e na lactofermentação 100% das amostras formaram algum tipo de coágulo. Em relação à contagem de bactérias, as B.H.A.M foram encontradas fora dos padrões em 65% das amostras e nas B.H.A.P em 80% dos resultados encontrados. Quanto à contagem de células somáticas apenas uma amostra apresentou-se fora do padrão. Conclui-se que a qualidade do leite pode ser melhorada por meio de assistência técnica e instrucional aos produtores, considerando os aspectos da legislação vigente associados à higienização adequada dos latões e utensílios de ordenha. O leite deve ser resfriado na fazenda e transportado sem delongas até a cooperativa.

With the objective of evaluating the microbiology and physicochemical quality of raw milk from rural properties in the city of Rio Bonito-RJ and surrounding areas, were analyzed 20 samples of raw milk from Refrigeration Station, subsidized by Nestlé, collected from bulk milk collectors and cooling tank. Microbiological analyzes were performed as Total Counting of Mesophilic Aerobic Heterotrophic Bacteria (M.A.H.B), Total Counting of Heterotrophic Aerobic Psychophotrophic Bacteria (H.A.P.B) and physicochemical analyzes: temperature, titratable acidity, alizarol test, lactofermentation, reduction test and cell count somatic cells. For the variables of the alizarol test there was reprobation in 20% of the samples, already for acidity 95% were within normal standards. The temperature of the samples, at the time of collection, presented great variations due to inadequate distance and transport. In the reductase test only 15% were considered good or optimal and in the lactofermentation 100% of the samples formed some type of clot. Regarding bacterial counts, M.A.H.B were found out of standards in 65% of samples and in H.A.P.B in 80% of the results found. As for somatic cell count, only one sample was out of standard. It is concluded that the quality of milk can be improved by providing technical and instructional assistance to producers and by appropriate hygiene of brass and milking utensils. The milk should be cooled on the farm and transported without delay to the Milk Collection Centers.

Caracterização de Staphylococcus coagulase-positiva utilizando plasmas de diferentes espécies animais / Characterization of coagulase-positive Staphylococcus by using plasmas from different animal species

No presente estudo foi avaliada a eficiência de plasmas de origens leporina, bovina, equina, canina e humana na execução do teste de coagulase em cepas de Staphylococcus spp. isoladas de bovinos (n=174),de seres humanos (n=71) e de cães (n=70). As leituras dos testes foram realizadas após diferentes tempos de incubação. O plasma leporino apresentou os melhores resultados, exceto nos isolados bacterianos de cão, para os quais o plasma de equíno foi o que demonstrou os melhores resultados entre 4 e 12 horas de incubação. Nenhum isolado que tenha apresentado resultado negativo frente ao plasma leporino reagiu positivamente aos demais plasmas. Os plasmas de coelho e de cavalo foram os que revelaram os melhores resultados para os isolados bacterianos de origem humana e bovina. Verificou-se que os plasmas, quando utilizados para isolados da espécie homóloga, mostraram baixa eficiência. A coagulação do plasma leporino ocorreu em até duas horas de incubação em 92 por cento das amostras de Staphylococcus de origem bovina. De acordo com os resultados obtidos, o plasma de equino pode ser utilizado para a realização de testes de coagulase em cepas de Staphylococcus isoladas de cães, bovinos e seres humanos, com resultados semelhantes àqueles observados com o plasma leporino.

Caracterização molecular e fenotípica de amostras bacterianas pertencentes ao complexo Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii / Molecular and phenotypic characterization of Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii isolates

Nos últimos 30 anos, Acinetobacter tornou-se um dos patógenos de maior preocupação clínica pela falta de terapias eficazes em virtude do fenótipo de multirresistência frequentemente apresentado. Dentre as espécies do gênero Acinetobacter, A. baumannii, A. genoespécie 3 e A. genoespécie 13TU são as mais comumente encontradas a partir de amostras biológicas. Estas espécies ao lado de A. calcoaceticus constituem o complexo A. calcoaceticus-A. baumannii (ACB). Este estudo propõe um esquema composto de duas PCRs para a identificação das espécies de interesse médico que fazem parte do complexo ACB. O método é simples, rápido e, além de identificar as espécies, permite pesquisar a presença de genes de resistência. Foram identificadas 515 amostras do complexo ACB, isoladas de pacientes no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2010. A identificação das espécies do complexo ACB foi realizada por esquema composto de duas reações de PCR. Foram avaliados os perfis de sensibilidade por disco difusão e a pesquisa da presença dos genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaSPM e blaGIM foi realizada por PCR utilizando-se iniciadores específicos. No grupo de amostras estudas, 82,5% são A. baumannii (425), 11,5% A. genoespécie 13TU (59) e 6,0% A. genoespécie 3 (30), sendo A. baumannii mais isolado em pacientes internados em UTIs (p=0,0407) e A. genoespécie 13TU mais isolado em pacientes de outros ambientes hospitalares (p=0,0204). A. baumannii apresentou menor sensibilidade a todos os antimicrobianos quando comparado com A. genoespécie 13TU e A. genoespécie. 3 (p<0,05). Foi possível observar ao longo do período estudado o aumento significativo da resistência aos carbapenêmicos e da sensibilidade a gentamicina por A. baumannii entre os isolados de pacientes de UTIs (p<0.05). Nenhum dos genes codificadores para metalo-lactamases foi detectado nas amostras estudadas Dentre os cepas resistentes aos carbapenêmico...

The genus Acinetobacter has emerged as one of the most troublesome pathogens for health care institutions globally. Its clinical significance, especially over the last 15 years, has been driven by its remarkable ability to up regulate or acquire resistance determinants, making it one of the organisms threatening the current antibiotic era. A. baumannii, A. 3 and A. 13TU are the most commonly species found from biological samples. These species beside A. calcoaceticus are very closely related and difficult to distinguish from each other by phenotypic properties. Therefore, it has been proposed to refer to these species as the A.calcoaceticus-A. baumannii complex(ACB). In the period from 2005 to 2009, the most frequent bacterial isolates among the nosocomial infection at the HU-USP was ACB (18%). Due to the frequency with which species are involved in ACB outbreaks of infection in the HU-USP and the emergency clinic because of expression of the phenotype of resistance to several classes of antibiotics, this study aimed to identify and characterize the species of complex ACB by molecular methods, to study their mechanisms of resistance and to characterize the different clones from patients admitted to different hospital areas. Furthermore, the ability to characterize biofilm formation, adhesion to different cell lines as well as the mechanisms of cell-cell communication were analyzed. From the ACB complex, 515 samples were identified, isolated from patients from January 2005 to December 2010. The identification of clinical species of the ACB was performed by molecular methods that were developed and validated for identification of Acinetobacter sp. include two reactions of PCR. The profiles of sensibility were evaluated by disc diffusion and the detection of the presence of genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM, and blaSPM were performed using specific primers. Molecular typing was performed using...