Drug resistance and susceptibility testing of Gram negative bacterial isolates from healthy cattle with different β – Lactam resistance Phenotypes from Shandong province China / Teste de resistência a drogas e suscetibilidade de isolados bacterianos Gram negativos de bovinos saudáveis com diferentes fenótipos de resistência a β - lactâmicos da província de Shandong, China

The objective of this study was to evaluate the effectiveness of common antibiotics against different microorganisms in apparently healthy cattle in Shandong province and its suburb. A total of 220 nasal swab samples were collected and cultured for bacteriological evaluation. All the bacteria isolates after preliminary identification were subjected to antibiogram studies following disc diffusion method. It was found in the study that E. coli is the most commonly associated isolate (21%), followed by Klebsiella spp. (18%), Pseudomonas aeruginosa (13%), Salmonella spp. (15%), Shigella spp (12%), and Proteus spp (11%). While the antibiogram studies reveled that highest number of bacterial isolates showed resistance to Ampicillin (95%), followed by Augmentin (91%), Cefuroxime (85%) and Tetracycline (95%) of (Escherichia coli and Klebsiella spp). In the case of pseudomonas spp. and Salmonella the highest resistance was showed by Ampicillin (90%) followed by Amoxicillin + Clavulanic Acid (80%), Cefixime (90%), and Erythromycin (80%). In Shigella spp and Salmonella spp highest resistance was showed by Amoxicillin, Ceftazidime, Augmentin (60%), and Amoxicillin + Clavulanic Acid (50%). It is concluded that in vitro antibiogram studies of bacterial isolates revealed higher resistance for Ampicillin, Augmentin, Cefuroxime, Cefixime, Tetracycline, Erythromycin, and Amoxicillin + Clavulanic Acid. The high multiple Antibiotics resistance indexes (MARI) observed in all the isolates in this study ranging from 0.6 to 0.9. MARI value of >0.2 is suggests multiple antibiotic resistant bacteria and indicate presence of highly resistant bacteria.

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia dos antibióticos comuns contra diferentes microrganismos em bovinos aparentemente saudáveis na província de Shandong e seus subúrbios. Um total de 220 amostras de esfregaço nasal foi coletado e cultivado para avaliação bacteriológica. Todos os isolados de bactérias após identificação preliminar foram submetidos a estudos de antibiograma seguindo o método de difusão em disco. Verificou-se no estudo que E. coli é o isolado mais comumente associado (21%), seguido por Klebsiella spp. (18%), Pseudomonas aeruginosa (13%), Salmonella spp. (15%), Shigella spp (12%) e Proteus spp (11%). Enquanto os estudos de antibiograma revelaram que o maior número de isolados bacterianos apresentou resistência à Ampicilina (95%), seguido por Augmentin (91%), Cefuroxima (85%) e Tetraciclina (95%) de (Escherichia coli e Klebsiella spp). No caso de Pseudomonas spp. e Salmonella, a maior resistência foi apresentada pela Ampicilina (90%) seguida pela Amoxicilina + Ácido Clavulânico (80%), Cefixima (90%) e Eritromicina (80%). Em Shigella spp e Salmonella spp, a maior resistência foi demonstrada por Amoxicilina, Ceftazidima, Augmentina (60%) e Amoxicilina + Ácido Clavulânico (50%). Conclui-se que estudos de antibiograma in vitro de isolados bacterianos revelaram maior resistência para Ampicilina, Augmentina, Cefuroxima, Cefixima, Tetraciclina, Eritromicina e Amoxicilina + Ácido Clavulânico. Os altos índices de resistência a antibióticos múltiplos (MARI) observados em todos os isolados neste estudo variaram de 0,6 a 0,9. O valor MARI de > 0,2 sugere várias bactérias resistentes a antibióticos e indica a presença de bactérias altamente resistentes.

Drug resistance and susceptibility testing of Gram negative bacterial isolates from healthy cattle with different Lactam resistance Phenotypes from Shandong province China

Abstract The objective of this study was to evaluate the effectiveness of common antibiotics against different microorganisms in apparently healthy cattle in Shandong province and its suburb. A total of 220 nasal swab samples were collected and cultured for bacteriological evaluation. All the bacteria isolates after preliminary identification were subjected to antibiogram studies following disc diffusion method. It was found in the study that E. coli is the most commonly associated isolate (21%), followed by Klebsiella spp. (18%), Pseudomonas aeruginosa (13%), Salmonella spp. (15%), Shigella spp (12%), and Proteus spp (11%). While the antibiogram studies reveled that highest number of bacterial isolates showed resistance to Ampicillin (95%), followed by Augmentin (91%), Cefuroxime (85%) and Tetracycline (95%) of (Escherichia coli and Klebsiella spp). In the case of pseudomonas spp. and Salmonella the highest resistance was showed by Ampicillin (90%) followed by Amoxicillin + Clavulanic Acid (80%), Cefixime (90%), and Erythromycin (80%). In Shigella spp and Salmonella spp highest resistance was showed by Amoxicillin, Ceftazidime, Augmentin (60%), and Amoxicillin + Clavulanic Acid (50%). It is concluded that in vitro antibiogram studies of bacterial isolates revealed higher resistance for Ampicillin, Augmentin, Cefuroxime, Cefixime, Tetracycline, Erythromycin, and Amoxicillin + Clavulanic Acid. The high multiple Antibiotics resistance indexes (MARI) observed in all the isolates in this study ranging from 0.6 to 0.9. MARI value of >0.2 is suggests multiple antibiotic resistant bacteria and indicate presence of highly resistant bacteria.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia dos antibióticos comuns contra diferentes microrganismos em bovinos aparentemente saudáveis na província de Shandong e seus subúrbios. Um total de 220 amostras de esfregaço nasal foi coletado e cultivado para avaliação bacteriológica. Todos os isolados de bactérias após identificação preliminar foram submetidos a estudos de antibiograma seguindo o método de difusão em disco. Verificou-se no estudo que E. coli é o isolado mais comumente associado (21%), seguido por Klebsiella spp. (18%), Pseudomonas aeruginosa (13%), Salmonella spp. (15%), Shigella spp (12%) e Proteus spp (11%). Enquanto os estudos de antibiograma revelaram que o maior número de isolados bacterianos apresentou resistência à Ampicilina (95%), seguido por Augmentin (91%), Cefuroxima (85%) e Tetraciclina (95%) de (Escherichia coli e Klebsiella spp). No caso de Pseudomonas spp. e Salmonella, a maior resistência foi apresentada pela Ampicilina (90%) seguida pela Amoxicilina + Ácido Clavulânico (80%), Cefixima (90%) e Eritromicina (80%). Em Shigella spp e Salmonella spp, a maior resistência foi demonstrada por Amoxicilina, Ceftazidima, Augmentina (60%) e Amoxicilina + Ácido Clavulânico (50%). Conclui-se que estudos de antibiograma in vitro de isolados bacterianos revelaram maior resistência para Ampicilina, Augmentina, Cefuroxima, Cefixima, Tetraciclina, Eritromicina e Amoxicilina + Ácido Clavulânico. Os altos índices de resistência a antibióticos múltiplos (MARI) observados em todos os isolados neste estudo variaram de 0,6 a 0,9. O valor MARI de > 0,2 sugere várias bactérias resistentes a antibióticos e indica a presença de bactérias altamente resistentes.

Tuberculosis farmacorresistente en provincia Guantánamo, 2010-2019 / Drug-resistant tuberculosis in Guantánamo province, 2010-2019 / Tuberculose resistente a medicamentos na província de Guantánamo, 2010-2019

RESUMEN Introducción: En los últimos 10 años en Cuba y, especialmente, en provincia Guantánamo se ha observado incremento del número de pacientes tuberculosos farmacorresistentes; esta es la provincia de mayor incidencia en el país. Objetivo: Identificar las características epidemiológicas y el patrón de resistencia de la tuberculosis farmacorresistente en provincia Guantánamo. Método: Se diseñó un estudio descriptivo y transversal que incluyó la totalidad de casos (n=6) con tuberculosis farmacorresistentes diagnosticados entre diciembre de 2010 y diciembre de 2019. Se estudiaron las variables: edad, sexo, régimen terapéutico, situación económica, categorías de casos, clasificación epidemiológica de la resistencia y resistencia de la cepa aislada según el grado y perfil. Resultados: Predominó el sexo masculino (66, 6 %) y el grupo de edades de menores de 45 años (83,3 %), la mayor cantidad de resistencia estuvo propiciada por violaciones en los tratamientos anteriores (66,6 %), categorizados mayormente como crónicos y reingresos por abandono. Predominó el nivel educacional de secundaria básica terminada (66,7 %), con situación económica regular (50,0 %) y alto nivel de alcoholismo (66,7 %). La multidrogorresistencia prevaleció en cepas de pacientes con tratamiento previo (66,6 %). Conclusiones: Existe coincidencia del patrón epidemiológico y el patrón de resistencia mostrado en la investigación actual con los resultados de estudios previos nacionales e internacionales, estos resultados sugieren fallas en la aplicación local del Programa Nacional de Control y Tratamiento de la tuberculosis. Se recomienda investigar y resolver estas fallas lo que produciría un impacto inmediato en la disminución de la incidencia de tuberculosis farmacorresistentes.

ABSTRACT Introduction: An increase in the number of drug-resistant tuberculosis patients has been observed in the last 10 years in Cuba and, especially, in Guantánamo province. This is the province with the highest incidence in the country. Objective: To identify the epidemiological characteristics and the resistance pattern of drug-resistant tuberculosis in Guantánamo province. Method: A descriptive, cross-sectional study was designed that included all cases (n=6) with drug-resistant tuberculosis, diagnosed between December 2010 and December 2019. The variables studied were: age, gender, therapeutic regimen, economic situation, categories of cases, epidemiological classification of resistance, and resistance of the isolated strain according to the grade and profile. Results: Males predominated (66.6%), and also the age group under 45 years (83.3%), the greatest resistance was caused by not abiding the previous treatments (66.6%), categorized mostly as chronic, and readmitted due to treatment abandonment. Highschool degree (66.7%) predominated, with a moderate economic situation (50.0%) and high levels of alcoholism (66.7%). Multi-drug resistance prevailed in the strains in patients with previous treatment (66.6%). Conclusions: There is a coincidence of the epidemiological pattern and the resistance pattern shown in the current research with the results of previous national and international studies; these results suggest flaws in the local application of the Programa Nacional de Control y Tratamiento de la tuberculosis. It is recommended to investigate and resolve these flaws, which would have an immediate impact on reducing the incidence of drug-resistant tuberculosis.

RESUMO Introdução: Nos últimos 10 anos, em Cuba e, principalmente, na província de Guantánamo, observou-se um aumento no número de pacientes com tuberculose resistente aos medicamentos; esta é a província com maior incidência no país. Objetivo: Identificar as características epidemiológicas e o padrão de resistência da tuberculose resistente a medicamentos na província de Guantánamo. Método: Foi elaborado um estudo descritivo e transversal que incluiu todos os casos (n=6) com tuberculose resistente a medicamentos diagnosticados entre dezembro de 2010 e dezembro de 2019. Foram estudadas as variáveis: idade, sexo, regime terapêutico, situação econômica, categorias de casos, classificação epidemiológica de resistência e resistência da cepa isolada de acordo com o grau e perfil. Resultados: Houve predomínio do sexo masculino (66,6%) e na faixa etária abaixo de 45 anos (83,3%), a maior quantidade de resistência foi causada por violações nos tratamentos anteriores (66,6%), categorizados principalmente como crônicos e reinternações por abandono. Predominou situação econômica regular (50,0%) e alto nível de alcoolismo (66,7%). A multirresistência prevaleceu em cepas de pacientes com tratamento anterior (66,6%). Conclusões: Há coincidência do padrão epidemiológico e do padrão de resistência mostrado na pesquisa atual com os resultados de estudos nacionais e internacionais anteriores, esses resultados sugerem falhas na aplicação local do Programa Nacional de Controle e Tratamento da Tuberculose. Recomenda-se investigar e resolver essas falhas, que teriam um impacto imediato na redução da incidência de tuberculose resistente aos medicamentos.

Antimicrobial susceptibility and diarrheagenic diagnosis of Escherichia coli and Salmonella enterica isolated from feral pigeons (Columba livia) captured in Fortaleza, Brazil / Isolamento, sensibilidade antimicrobiana e diagnóstico de cepas diarreiogênicas de Escherichia coli e Salmonella enterica isoladas de pombos urbanos (Columba livia) capturados em Fortaleza, Brasil

This study aimed to isolate Escherichia coli and Salmonella enterica from captured feral pigeons in Fortaleza, Brazil, and, in addition to evaluate the antimicrobial susceptibility profiles and diagnose diarrheagenic E. coli strains. Pigeons were captured in four public locations in Fortaleza with three techniques. Individual cloacal swab samples were collected and submitted to bacterial isolation, biochemical identification and antimicrobial susceptibility test. Disk diffusion technique was used with twelve antibiotics. E. coli strains were submitted to DNA extraction followed by PCR to diagnose five diarrheagenic pathotypes. A total of 124 birds were captured. One bird was positive for Salmonella enterica (0.81%) and 121 (97.58%) were positive for E. coli. Among these, 110 isolates were submitted to antimicrobial susceptibility test and 28.18% (31/110) presented resistance to at least one antibiotic. Resistance to azithromycin was the most frequent (21.82%), followed by tetracycline (10.91%) and sulfamethoxazole with trimethoprim (8.9%). Multidrug resistance, calculated as a resistance to at least 3 antimicrobial classes, was identified in 3.64% (4/110) of strains. The maximum number of antimicrobial classes to which one strain was resistant was seven. Results demonstrated nine different resistance profiles and the most frequent was tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (4 strains), followed by chloramphenicol, azithromycin, tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim (3 strains). Amoxicillin with clavulanic acid and tobramycin presented lowest levels of antimicrobial resistance, to which none of the tested strains were resistant. A single strain was positive for the eltB gene, which is a diagnostic tool to identify the Enterotoxigenic E. coli (ETEC) pathotype. None of the other investigated genes (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA and aaiC) were identified. The single isolate of S. enterica was a rough strain of Salmonella enterica subsp. enterica, but serotype identification was not possible. However, this isolate presented resistance to amoxicillin, amoxicillin with clavulanic acid, tetracycline and sulfamethoxazole with trimethoprim. Therefore, captured feral pigeons of Fortaleza presented a low prevalence of S. enterica and diarrheagenic E. coli. Considering the investigated pathogens, our results suggest a good health status and a low public health risk. However, important antimicrobial resistance profiles were identified.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar cepas de Escherichia coli e Salmonella enterica de pombos urbanos capturados em Fortaleza, Brasil, e avaliar os perfis de resistência antimicrobiana dos isolados, bem como diagnosticar patotipos diarreiogênicos de E. coli. Pombos foram capturados em quatro locais públicos de Fortaleza utilizando três técnicas. Amostras individuais de suabes cloacais foram coletadas e submetidas a isolamento bacteriano, seguido de identificação bioquímica e teste de susceptibilidade a antimicrobianos. A técnica de disco difusão foi utilizada para avaliar resistência antimicrobiana a doze antibióticos. Cepas de E. coli foram submetidas à extração de DNA seguido de PCR para o diagnóstico de cinco patotipos diarreiogênicos. Um total de 124 aves foram capturadas, a partir das quais em uma houve isolamento de Salmonella enterica (0,81%) e em 121 (97,58%) houve isolamento de E. coli. Destas, 110 isolados foram submetidos a teste de suscetibilidade a antimicrobianos e 28,18% (31/110) apresentaram resistência a pelo menos um antibiótico. Resistência a azitromicina foi a mais frequente (21,82%), seguida por tetraciclina (10,91%) e sulfametoxazol com trimetoprim (8,9%). Resistência a múltiplas drogas foi identificada em 3,64% (4/110) dos isolados e o número máximo de antibióticos aos quais uma única cepa foi resistente foi sete. Resultados demonstraram nove diferentes perfis de resistência e o mais frequente foi tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (4 cepas), seguido por cloranfenicol, azitromicina, tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim (3 cepas). Amoxicilina com ácido clavulânico e tobramicina foram os antibióticos com menor resistência antimicrobiana, aos quais nenhuma cepa apresentou resistência. Uma única cepa foi positiva para o gene eltB que é usado para diagnóstico do patotipo E. coli enterotoxigênica (ETEC), enquanto que os demais genes investigados (stx1, stx2, estA, eaeA, ipaH, aatA e aaiC) não foram identificados. A única cepa de S. enterica isolada foi identificada como uma cepa rugosa de Salmonella enterica subsp. enterica e, portanto, a identificação do sorotipo não foi possível. Entretanto, este isolado apresentou resistência a amoxicilina, amoxicilina com ácido clavulânico, tetraciclina e sulfametoxazol com trimetoprim. Portanto, pombos urbanos capturados em Fortaleza apresentaram baixa prevalência de cepas de S. enterica e E. coli diarreiogênicas. Considerando os patógenos investigados, os resultados encontrados sugerem um bom status sanitário destas aves e um baixo risco à saúde pública. Entretanto, importantes perfis de resistência antimicrobiana foram identificados.(AU)

Expressão da glicoproteína-P, proteína associada à múltiplas drogas, glutationa-S-transferase pi e p53 no tumor venéreo transmissível canino / Expression of P-glycoprotein, multidrug resistance-associated protein, glutathione-S-transferase pi and p53 in canine transmissible venereal tumor

The overexpression of proteins P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance-associated protein (MRP1), mutant p53, and the enzyme glutathione-S-transferase (GSTpi) are related to resistance to chemotherapy in neoplasms. This study evaluated the expression of these markers by immunohistochemistry in two groups of canine TVT, without history of prior chemotherapy (TVT1, n=9) and in TVTs presented unsatisfactory clinical response to vincristine sulfate (TVT2, n=5). The percentage of specimens positively stained for P-gp, MRP1, GSTpi and p53 were, respectively 88.8%, 0%, 44.5% and 22.2% in TVT1 and 80%, 0%, 80% and 0% in TVT2. In TVT1, one specimen presented positive expression for three markers and four specimens for two markers. In TVT2, three specimens expressed P-gp and GSTpi. In conclusion, the canine TVTs studied expressed the four markers evaluated, but just P-gp and GSTpi were significantly expressed, mainly at cytoplasm and cytoplasm and nuclei, respectively, either before chemotherapy as after vincristine sulfate exposure. Future studies are needed to demonstrate the function of these two markers in conferring multidrug resistance (MDR) or predict the response to chemotherapy in canine TVT.

A superexpressão das proteínas glicoproteína-P (Gp-P), proteína associada à resistência à múltiplas drogas 1 (MRP1) e p53 mutante e a enzima glutationa-S-transferase pi (GSTpi) está relacionada com resistência à quimioterapia em neoplasias humanas e caninas. Este estudo avaliou a expressão, por meio da imuno-histoquímica desses marcadores em espécimes de TVT caninos sem histórico de quimioterapia prévia (TVT1, n=9) e em TVT caninos que apresentaram resposta clínica insatisfatória ao sulfato de vincristina (TVT2, n=5). A porcentagem de espécimes positivos para Gp-P, MRP1, GSTpi e p53 foram, respectivamente 88,8%, 0%, 44,5% e 22,2% no grupo TVT1 e 80%, 0%, 80% e 0% no grupo TVT2. No TVT1, um espécime apresentou expressão positiva para três marcadores e quatro para dois marcadores. No TVT2, três espécimes expressaram a Gp-P e GSTpi. Em conclusão, os TVTs caninos estudados expressaram os quatro marcadores avaliados, no entanto apenas a Gp-P e GSTpi foram significativamente expressas, principalmente no citoplasmas e no citoplasma e no núcleo, respectivamente, tanto antes da quimioterapia quanto após à exposição ao sulfato de vincristina. Estudos futuros são necessários para demonstrar a função desses dois marcadores em conferir resistência à multiplas drogas (RMD) ou predizer a resposta a quimioterapia no TVT canino.

Overview of P-glycoprotein inhibitors: a rational outlook

P-glycoprotein (P-gp), a transmembrane permeability glycoprotein, is a member of ATP binding cassette (ABC) super family that functions specifically as a carrier mediated primary active efflux transporter. It is widely distributed throughout the body and has a diverse range of substrates. Several vital therapeutic agents are substrates to P-gp and their bioavailability is lowered or a resistance is induced because of the protein efflux. Hence P-gp inhibitors were explored for overcoming multidrug resistance and poor bioavailability problems of the therapeutic P-gp substrates. The sensitivity of drug moieties to P-gp and vice versa can be established by various experimental models in silico, in vitro and in vivo. Ever since the discovery of P-gp, the research plethora identified several chemical structures as P-gp inhibitors. The aim of this review was to emphasize on the discovery and development of newer, inert, non-toxic, and more efficient, specifically targeting P-gp inhibitors, like those among the natural herb extracts, pharmaceutical excipients and formulations, and other rational drug moieties. The applications of cellular and molecular biology knowledge, in silico designed structural databases, molecular modeling studies and quantitative structure-activity relationship (QSAR) analyses in the development of novel rational P-gp inhibitors have also been mentioned.

Glicoproteína-p (P-gp), uma glicoproteína de transmembrana permeável, é um membro da superfamília (ABC) de cassete de gene de ligação de ATP que funciona especificamente como um carreador mediado pelo transportador de efluxo ativo primário. É amplamente distribuído por todo o corpo e apresenta uma gama diversificada de substratos. Diversos agentes terapêuticos vitais são substratos para P-gp e sua biodisponibilidade é reduzida ou a resistência é induzida devido ao efluxo de proteínas. Portanto, os inibidores da P-gp foram explorados para a superação da resistência a múltiplas drogas e problemas de biodisponibilidade deficiente dos substratos terapêuticos da P-gp. A sensibilidade das moléculas da droga à P-gp e vice-versa, pode ser estabelecida por vários modelos experimentais in silico, in vitro e in vivo. Desde a descoberta da P-gp, diversas pesquisas identificaram várias estruturas químicas como inibidores da P-gp. O objetivo deste presente estudo foi o de enfatizar a descoberta e desenvolvimento de inibidores mais novos, inertes, atóxicos e mais eficazes, visando especificamente os da P-gp, como aqueles entre os extratos vegetais, excipientes e formulações farmacêuticas, e outras moléculas racionais de droga. As aplicações do conhecimento de biologia celular e molecular, bancos de dados estruturais in silico, estudos de modelagem molecular e análises da relação quantitativa estrutura-atividade (QSAR) no desenvolvimento de novos inibidores racionais da P-gp também foram mencionados.

Resistência à mupirocina entre isolados de Staphylococcus aureus de profissionais de enfermagem / Resistencia al mupirocin en cepas aisladas de Staphylococcus aureus de profesionales de enfermería / Mupirocin-resistant Staphylococcus aureus in samples belonging to professional nurses

OBJETIVOS: Avaliar a colonização por Staphylococcus aureus sensíveis e resistentes à meticilina na saliva de profissionais de enfermagem e o perfil de resistência à mupirocina. MÉTODOS: Foram coletadas três amostras da saliva de 356 (94,2 por cento) profissionais participantes da pesquisa, totalizando 1.068 amostras processadas. Todos os aspectos éticos foram contemplados. A análise microbiológica compreendeu a identificação fenotípica, segundo normas do Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: Foram obtidos 73 indivíduos colonizados por Staphylococcus aureus na primeira coleta, 48 na segunda e 37 na terceira, somando 158 isolados de Staphylococcus aureus. Desses, 24 (15,2 por cento) eram resistentes à oxacilina e 30 resistentes à mupirocina (18,9 por cento). A resistência à mupirocina foi observada de forma pronunciada nos Staphylococcus aureus metacilina resistente (MRSA); dos 24 MRSA, 17 (70,8 por cento) apresentaram-se resistentes a este antimicrobiano. CONCLUSÃO: Os resultados indicaram que a resistência à mupirocina é um importante problema, pois esse antibiótico é um excelente aliado nas medidas de controle das infecções de serviços de saúde.

OBJECTIVES: To assess colonization by Staphylococcus aureus sensitive and resistant to methicillin found in the saliva of nurses and, to recognize the mupirocin profile of resistance. METHODS: It was collected three saliva samples of 356 (94.2 percent) professional research participants, totaling 1068 samples processed. All ethical aspects were covered. Microbiological analysis included the phenotypic identification, according to the standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTS: In the first collection were obtained 73 individuals colonized by Staphylococcus aureus, 48 in the second and 37 in the third, totaling 158 samples of Staphylococcus aureus. Of these, 24 (15.2 percent) were resistant to oxacillin and 30 resistant to mupirocin (18.9 percent). Mupirocin resistance was observed sharply in the Staphylococcus aureus resistant to methicillin (MRSA); of 24 MRSA, 17 (70.8 percent) were resistant to this antibiotic. CONCLUSION: The results indicated that mupirocin resistance is a major problem since this antibiotic is an excellent ally in the measures taken to control infection in health services.

OBJETIVOS: Evaluar la colonización por Staphylococcus aureus sensibles y resistentes al meticilín en la saliva de profesionales de enfermería y, reconocer el perfil de resistencia a la mupirocina. MÉTODOS: Fueron recolectadas tres muestras de saliva de 356 (94,2 por ciento) profesionales participantes de la investigación, totalizando 1.068 muestras procesadas. Todos los aspectos éticos fueron contemplados. El análisis microbiológico comprendió la identificación fenotípica, según normas del Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: Fueron obtenidos 73 individuos colonizados por Staphylococcus aureus en la primera recolección, 48 en la segunda y 37 en la tercera, sumando 158 muestras aisladas de Staphylococcus aureus. De esas, 24 (15,2 por ciento) eran resistentes a la oxacilina y 30 resistentes a al mupirocina (18,9 por ciento). La resistencia al mupirocina fue observada de forma pronunciada en los Staphylococcus aureus resistentes a la metacilina (MRSA); de los 24 MRSA, 17 (70,8 por ciento) se presentaron resistentes a este antimicrobiano. CONCLUSIÓN: Los resultados indicaron que la resistencia a la mupirocina es un importante problema, ya que ese antibiótico es un excelente aliado en las medidas de control de las infecciones de servicios de salud.

Analysis of Escherichia coli isolated from bovine mastitic milk / Análise de Escherichia coli isolada de leite de vacas com mastite

Mastitis has been recognized for some time as the most costly disease in dairy herds. From February to November 2004, 670 samples of bovine mastitic milk from which 231 Escherichia coli strains were isolated, were collected from two Brazilian states. The strains were screened for the presence of Shiga toxin-producing (stx 1 and stx 2) and intimin (eae) genes. Twenty (8.6 percent) strains were detected by PCR to harbor the Shiga toxin genes (8 the stx 1 gene, 12 the stx 2 gene and none both of them). Two (0.8 percent) of the Escherichia coli strains studied were eae positive non Shiga toxin-producing. The strains were also examined for resistance to 12 antimicrobial agents. The predominantly observed resistance was to tetracycline (92.2 percent), streptomycin (90.4 percent), nalidixic acid (88.3 percent), amikacin (86.5 percent) and cephalothin (84.8 percent). Multidrug resistance was found among 152 isolates (65.8 percent).

A um longo tempo a mastite tem sido reconhecida como a doença que provoca as maiores perdas econômicas nos rebanhos leiteiros. De fevereiro a novembro de 2004, foram coletadas 670 amostras de leite mastítico de vacas, provenientes de dois estados brasileiros, das quais foram isoladas 231 cepas de Escherichia coli. Estas cepas foram analisadas para a detecção dos genes de produção de Shiga toxina (stx 1 e stx 2) e do gene da intimina (eae). Vinte cepas (8,6 por cento) foram detectadas através de PCR como contendo os genes da Shiga toxina (8 stx 1, 12 stx 2 e nenhuma delas ambos os genes). Duas cepas (0,8 por cento) de E. coli eram eae positivo não produtoras de Shiga toxina. As cepas de E. coli foram também examinadas para detectar a resistência a 12 agentes antimicrobianos. As resistências mais freqüentes foram para tetraciclina (92,2 por cento), estreptomicina (90,4 por cento), ácido nalidixico (88,3 por cento), amicacina (86,5 por cento) e cefalotina (84,8 por cento). A resistência a múltiplas drogas foi encontrada em 152 cepas (65,8 por cento).

Multidrug-resistant Shiga toxin-producing Escherichia coli in dogs with diarrhea / Escherichia coli Shiga toxigênica resistente a múltiplas drogas isoladas de cães com diarreia

Noventa e duas amostras de Escherichia coli, isoladas de 25 cães diarreicos, em Ituverava, SP, foramexaminadas para a detecção dos genes codificadores de Shiga toxinas (stx 1 e stx 2). Por meio dareação em cadeia da polimerase, foram identificadas sete amostras positivas para o gene stx 1 e cincopara o gene stx 2, não foi detectada nenhuma amostra com os dois genes. As 12 amostras queapresentavam genes codificadores de Shiga toxinas (stx 1 e stx), foram testadas frente a 11 agentesantimicrobianos, sendo que sete delas (58,0%) apresentaram resistência a múltiplas drogas, o querepresenta um motivo de preocupação.

Diagnóstico de infecção por Candida: avaliação de testes de identificação de espécies e caracterização do perfil de suscetibilidade / Candida infection diagnosis: evaluation of Candida species identification and characterization of susceptibility profile

INTRODUÇÃO: Infecções invasivas provocadas por Candida são importantes causas de morbidade e mortalidade. O sucesso do tratamento dessas infecções depende da identificação da espécie e do padrão de sensibilidade aos antifúngicos. Portanto, diagnóstico rápido e específico é fundamental para a precoce introdução de terapêutica adequada. OBJETIVOS: Avaliar diferentes métodos diagnósticos de determinação de espécies de Candida e caracterizar, entre as espécies identificadas, o padrão de sensibilidade aos diferentes antifúngicos. MATERIAL E MÉTODOS: A identificação das espécies de Candida presentes em amostras de diferentes materiais biológicos foi realizada pelo cultivo em CHROMagar® Candida e pela técnica de reação em cadeia da polimerase tipo Nested (N-PCR). O padrão de sensibilidade das amostras foi avaliado pela utilização de Etest®. RESULTADO: CHROMagar® caracterizou 50 por cento das amostras como Candida albicans; 20,8 por cento, Candida tropicalis; 2,4 por cento, Candida krusei e 26,9 por cento, outras espécies (não determinadas). As cepas de C. albicans e C. tropicalis foram caracterizadas por CHROMagar® e N-PCR. Porém cepas de outras espécies, indeterminadas em CHROMagar®, caracterizaram-se como C. parapsilosis em N-PCR. Cepas de C. krusei e C. tropicalis apresentaram perfil de resistência a, respectivamente, fluconazol e 5-fluocitosina. Quanto ao itraconazol, observou-se padrão de resistência em cepas de C. albicans e C. tropicalis. DISCUSSÃO: As técnicas metodológicas utilizadas são de fácil reprodutibilidade e alta especificidade, fornecendo diagnóstico complementar, e o emprego do Etest® viabiliza a precoce introdução de tratamento específico. CONCLUSÃO: O crescente aparecimento de espécies de Candida resistentes aos azólicos confirma a importância de monitorar possíveis mudanças na distribuição das espécies patogênicas e dos padrões de sensibilidade.

BACKGROUND: Invasive infections by Candida are an important cause of morbidity and mortality. The successful treatment of these infections depends on the identification of the species and on the sensitivity pattern to antifungal agents. A quick and specific diagnosis is essential to introduce appropriate therapy. OBJECTIVES: Assess different diagnostic methods to determine Candida species and evaluate the sensitivity pattern to different antifungal agents among the identified ones. MATERIAL AND METHODS: The identification of Candida species present in samples of different biological materials was conducted through CHROMagar® Candida culture and Nested-PCR. The sensitivity pattern was assessed using Etest®. RESULTS: The culture of samples on CHROMagar® revealed 50 percent Candida albicans, 20.8 percent Candida tropicalis, 2.4 percent Candida krusei, and 26.9 percent other undetermined species. Samples of Candida albicans and Candida tropicalis were identified through CHROMagar® and N-PCR. Species that were not determined through CHROMagar® were characterized as Candida parapsilosis by N-PCR. Resistance to fluconazole, 5-fluocytosine was detected, respectively, in Candida krusei and Candida tropicalis samples. Both Candida albicans and Candida tropicalis samples showed resistance to itraconazole. DISCUSSION: The methods applied are easily reproducible and highly specific, which allows complementary diagnosis. The determination of the susceptibility profile by Etest® enables the early introduction of specific treatment. CONCLUSION: The growing appearance of Candida species resistant to azole confirms the importance of monitoring possible changes in the distribution of pathogenic species and in the sensitivity pattern.

Coexpressão da proteína p53 e proteínas relacionadas a resistência a múltiplas drogas em diferentes tipos de leucemias: associação predominante nos estágios avançados da doença / Coexpression of p53 protein and multidrug resistance proteins in diferents types of leukemias: the predominant association in advanced status of disease

Um dos mais bem caracterizados mecanismos de resistência às drogas (MDR) nas leucemias são os mediados pela glicoproteína P (PGP) e proteína relacionada a múltiplas drogas (MRP). Diversos relatos têm demonstrado que a superexpressão dessas proteínas podem ser medianas pela superexpressão da proteína p53 inativada. O objetivo deste estudo foi investigar a co-expressão da p53, PGP e MRP em diferentes tipos de leucemias pela citometria de fluxo. Analisou-se amostras de 223 pacientes leucêmicos: 64 leucemia linfocítica crônica (LLC), 43 leucemia mielóide aguda (LMA), 44 leucemia linfoblástica aguda (LLA), e 72 leucemia mielóide crônica (LMC). A p53 foi observada em 23,6% na LMC, 21,8% na LLC, 44,2% na LMA e 29,4% na LLA. A Pgp em 46,4% na LMC, 47,5% LLC, 62,8% LMA e 20% LLA e a MRP em 31,9% na LMC, 40,6% na LLC, 44,2% na LMA e 40,1% na LLA. Observou-s co-expressão estatisticamente significativa entre p53 e Pgp na LMC (p=0,0066) e na LMA (p=0,0013) e p53 e MRP na LMC (p=0,000066), na LLC (p=0,0079) e LMA (0,00044), sendo observado predomínio dessas associações nos estágios avançados dessas doenças. Estes resultados demonstraram que as pesquisas desses marcadores possam servir como indicadores de evolução clínica e prognóstico para estas leucemias.

Expression of MRP1 gene in acute leukemia / Expressão do gene MRP1 em leucemias agudas

CONTEXT AND OBJECTIVE: Overexpression of the multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) gene has been linked with resistance to chemotherapy in vitro, but little is known about its clinical impact on acute leukemia patients. Our aim was to investigate the possible association between MRP1 gene expression level and clinical outcomes among Iranian leukemia patients. DESIGN AND SETTING: This was an analytical cross-sectional study on patients referred to the Hematology, Oncology and Stem Cell Research Center, Sharyatee Public Hospital, whose diagnosis was acute myelogenous leukemia (AML) or acute lymphoblastic leukemia (ALL). All molecular work was performed at NIGEB (public institution). METHODS: To correlate with prognostic markers and the clinical outcome of acute leukemia, MRP1 gene expression was assessed in 35 AML cases and 17 ALL cases, using the quantitative real-time polymerase chain reaction and comparing this to the chemotherapy response type. RESULTS: Mean expression in AML patients in complete remission (0.032 ± 0.031) was significantly lower than in relapsed cases (0.422 ± 0.297). In contrast, no significant difference in MRP1 mRNA level was observed between complete remission and relapsed ALL patients. There was a difference in MRP1 expression between patients with unfavorable and favorable cytogenetic prognosis (0.670 ± 0.074 and 0.028 ± 0.013, respectively). MRP1 expression in M5 was significantly higher (p-value = 0.001) than in other subtypes. CONCLUSIONS: The findings suggest that high MRP1 expression was associated with poor clinical outcome and was correlated with the M5 subtype and poor cytogenetic subgroups among AML patients but not among ALL patients.

CONTEXTO E OBJETIVO: A superexpressão do gene de resistência a múltiplas drogas associado à proteína 1 (MRP1) tem sido ligada à resistência à quimioterapia in vitro, porém pouco é conhecido sobre seu impacto clínico nos pacientes com leucemia aguda. Nosso objetivo foi investigar a possível associação entre a expressão do gene MRP1 e os desfechos clínicos em pacientes iranianos com leucemia. DESENHO E LOCAL: Este foi um estudo analítico transversal em pacientes encaminhados ao Centro de Pesquisa em Hematologia, Oncologia e Células Tronco do Hospital Público de Sharyatee, com diagnóstico de leucemia mielóide aguda (LMA) ou leucemia linfoblástica aguda (LLA). Todo trabalho molecular foi realizado no NIGEB (instituição pública). MÉTODOS: Para correlação de marcadores prognósticos e desfechos clínicos da leucemia aguda, a expressão do MRP1 foi avaliada em 35 casos de LMA e 17 de LLA, usando a reação da cadeia de polimerase quantitativa em tempo real, e comparando este dado ao tipo de resposta à quimioterapia. RESULTADOS: A média da expressão em pacientes com LMA em remissão completa (0,032 ± 0,031) foi significativamente menor que aquela dos casos recidivantes (0,422 ± 0,297). Por outro lado, não foram observadas diferenças significativas nos níveis de mRNA para MRP1 entre os casos de LLA com remissão completa e os casos recidivantes. Houve uma diferença na expressão de MRP1 entre pacientes com prognóstico citogenético não-favorável e favorável (0,670 ± 0,074 e 0,028 ± 0,013, respectivamente). A expressão de MRP1 em M5 foi significativamente maior (valor de p = 0,001) do que em outros subtipos. CONCLUSÕES: Os achados sugerem que a alta expressão de MRP1 se associou com o pior desfecho clínico, estando correlacionada com o subtipo M5 e os subgrupos citogenéticos menos favoráveis para os pacientes com LMA, mas não para pacientes com LLA.

Effect of different extracts from the Brazilian Atlantic Forest on the Pdr5p ATPase activity / Efeito de extratos de plantas da Floresta Atlântica Brasileira sobre a atividade da Pdr5p ATPase

In the current study, we tested the effect of 27 plant extracts and fractions from different botanical families on the activity of Pdr5p from yeast plasma membrane, responsible for the multidrug resistance phenotype in yeast cells. Some of the extracts were able to produce a good inhibition in the fixed concentration (200 µg/mL) and were selected for a deeper investigation. Dose-response curves were obtained for the crude ethanol extracts of Bathysa australis (A. St.-Hill.) Benth. & Hook f., Mabea fistulifera Mart. and Virola oleifera (Schott) A. C. Sm. with concentrations ranging up to 400 µg/mL. The lower IC50 value was obtained for Virola oleifera, 22.8 µg/mL, followed by Bathysa australis, 35.3 µg/mL, and Mabea fistulifera, 42.5 µg/mL. After fractionation of the crude extracts by liquid-liquid partition with different organic solvents and each fraction was tested again, only some of the fractions retained the ability to inhibit the enzymatic activity. When analyzed by HPLC/DAD, the active fractions showed the presence of flavonoid derivatives, already reported for their ability to inhibit Pdr5p ATPase activity, as well as other classes of secondary metabolites such as lignans and alkaloids.

No presente estudo, testamos o efeito de 27 extratos e frações de plantas de diferentes famílias botânicas sobre a atividade da proteína Pdr5p de membranas plasmáticas de leveduras, responsável pelo fenótipo de resistência a múltiplas drogas em leveduras. Alguns dos extratos foram capazes de produzir uma boa inibição na concentração fixa de 200 µg/mL e foram selecionados para uma investigação mais aprofundada. Curvas de dose-resposta foram obtidas para os extratos brutos etanólicos de Bathysa australis (A. St.-Hill.) Benth. & Hook f., Mabea fistulifera Mart. e Virola oleifera (Schott) A. C. Sm., com concentrações até 400 µg/mL. O menor valor de IC50 foi obtido para Virola oleifera, 22,8 µg/mL, seguido por Bathysa australis, 35,3 µg/mL e Mabea fistulifera, 42,5 µg/mL. Após o fracionamento dos extratos brutos por partição líquido-líquido com diferentes solventes orgânicos, cada fração foi novamente testada, sendo que apenas algumas das frações mantiveram a habilidade de inibir a atividade enzimática. Quando analisadas por HPLC/DAD, as frações ativas demonstraram a presença de derivados de flavonóides, que já demonstraram ter a habilidade de inibir a atividade ATPasica da Pdr5p, assim como outras classes de metabólitos secundários, tais como lignanas e alcalóides.

Resistência a drogas em cepas de mycobacterium tuberculosis isoladas de amostras de escarro de pacientes ambulatoriais sintomáticos: Complexo de Manguinhos, Rio de Janeiro, Brasil / Drug resistance in mycobacterium tuberculosis strains isolated from sputum samples from symptomatic outpatients: Complexo de Manguinhos, Rio de Janeiro, Brazil

Para descrever a resistência a drogas em cepas de Mycobacterium tuberculosis isoladas de amostras de escarro de 263 pacientes suspeitos de tuberculose moradores do Complexo de Manguinhos, Rio de Janeiro, Brasil, as culturas positivas entre outubro de 2000 e dezembro de 2002 foram submetidas a teste de sensibilidade para isoniazida, rifampicina, estreptomicina, etionamida e etambutol. Resistência a qualquer das drogas foi encontrada em 21,4 por cento (16/75) dos pacientes diagnosticados com tuberculose. Destes, 50 por cento (8/16) eram casos novos e 50 por cento (8/16) eram casos com tratamento anterior. A tuberculose multirresistente foi encontrada em 10,6 por cento (8/75) do total de pacientes, estando associada a tratamento anterior em 8 por cento (6/75) deles. Nossos resultados podem ter sido subestimados, pois M. tuberculosis não pôde ser isolado em todas as amostras positivas para bacilos álcool-ácido resistentes. Contudo, eles pelo menos revelam parte do problema.

This study aimed to assess drug resistance in Mycobacterium tuberculosis strains isolated from sputum samples. To that end, sputum samples were collected from 263 patients suspected of having tuberculosis. All subjects lived in the Complexo de Manguinhos, which is located in the city of Rio de Janeiro, Brazil. Cultures testing positive between October of 2000 and December of 2002 were tested to determine strain susceptibility to isoniazid, rifampicin, streptomycin, ETHionamide, and ETHambutol. Of the 75 patients diagnosed with tuberculosis, resistance to at least one of the drugs was found in 16 (21.4 percent). Of those 16 patients, 8 (50 percent) were new cases, and 8 (50 percent) had previously been treated. Multidrug-resistant tuberculosis was identified in 8 (10.6 percent) of the 75 patients, being associated with previous treatment in 6 (8 percent). The incidence of multidrug-resistant tuberculosis might have been underestimated, since M. tuberculosis was not isolated from all of the samples testing positive for acid-fast bacilli. However, at least, our findings shed some light on the problem.

Mecanismos de ação e de resistência aos cetolídeos / Machanisms of action and resistence to ketolides

O aumento da resistência a múltiplas drogas em algumas linhagens de microorganismos tem sido registrado em todo o mundo. Consequentemente, os corriqueiros antibióticos orais estão perdendo sua eficácia no tratamento de infecções causadas por esses organismos. Nesse cenário, novos antimicrobianos, como os cetolídeos, estão emergindo. Eles representam uma nova geração da família dos macrolídeos, na qual o grupo 3-ceto substitui L-cladinose no anel de lactona. Cetolídeos mostraram-se mais ativos que outros macrolídeos contra várias bactérias gram-positivas, como Enterococcus sp. e Streptococcus sp. No entanto, algumas linhagens de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina e à eritromicina parecem ser resistentes aos cetolídeos, como mutações estruturais no local de união do cetolídeos ao ribossomo, a existência de bombas de expulsão ativa, e a presença de enzimas inativantes. Algumas linhagens que apresentam o gene erm B ativo, como Streptococcus pyogenes, apresentam resistência aos cetolídeos.

The increase of multidrug resistance in some strains of microorganisms has beendocumented all over the world. Consequently, the current oral antibiotics arelosing their efficacy in the treatment of infections caused by these organisms. Inthis scenario, new antimicrobials, like ketolides, have emerged. They represent anew generation of the macrolides family, in which the 3-keto group replaces theL-cladinose in the lactone ring. Ketolides have shown to be more active thanother macrolides against many Gram-positive bacteria, like Enterococcus sp. andStreptococcus sp. However, some methicilin and erythromycin resistant strains ofStaphylococcus aureus seem to be resistant to ketolides. Some resistancemechanisms to ketolides have been identified, such as: the structural mutationsin binding sites of ketolides to ribosome; the existence of active efflux pump; andthe presence of inactivating enzymes. Some strains with the active gene erm B,such as the Streptococcus pyogenes, also present resistance to ketolides.

Efeito de moduladores da diferenciação celular no processo de resistência a múltiplas drogas

A resistência às drogas quimioterapêuticas é um dos maiores problemas no tratamentode câncer. Um tipo de resistência às drogas, resistência a múltiplas drogas (MOR), está associado com a superexpressão de uma glicoproteína de membrana denominada glicoproteína P(Pgp), a qual usa energia de ATP para bombear drogas anticancerígenas para fora das células. A resistência MDR pode ser revertida por uma série de agentes, incluindo-se agentes de diferenciação celular, mas o mecanismo exato de ação. Ainda não foi estabelecido. O propósito deste estudo foi comparar a linhagem celular resistente a múltiplas drogas, originada da linhagem celular K562 e selecionada por sua resistência à vincristina (LUCENA-K562), com outras duas linhagens celulares sesíveis: a linhagem parental K562 (eritroleucemia) e HCT 116 (adenocarcinoma de cólon), a fim de analisar a relação entre a expressão de glicoproteína P e a modulação da diferenciação celular. A resistência às drogas e a modulação da diferenciação celular foram medidas usando-se testes in vitro. O aspecto básico foi a medida de mudanças na expressão de Pgp, do antígeno carcinoembriônico (CEA) (imunocitoquímica), conteúdo de hemoglobina (coloração de benzidina) e afluxo de rodamina 123 ( análises de citometria de fluxo e de microscopia de fluorecência). O efeito de TPA (12-Otetradecanoilforbol 13-acetato), RA ácido retinóico), DIMSO (dimetilsulfóxido), OUA (ouabaína), HMBA (hexametileno bisacetamida) e 5-fluorouracil (5-FU) foi testado. A exposição à 5-FU produziu modificações morfológicas, aumento de células benzidina positiva e atividade Pgp em linhagens eritroleucêumicas. TPA induziu modificações morfológicas, indução de CEA e atividade Pgp em linhagens de adenocarcinoma, enquanto as drogas RA, DIMSO, OUA e HMBA não induziram os mesmos efeitos. O tratamento in vivo com moduladores de dierenciação celular requer cautela, visto poder levar à indução de resistência celular como verificada em nossos resultados.

Clinical resistance to chemotherapeutic drugs is a major problem in the treatment of cancer. One type of drug resistance - multidrug resistance (MDR) is associated with the over-expression of a membrane glycoprotein termed P-glycoprotein (Pgp), which uses the energy of ATP to pump anti-cancer drugs out of multidrug-resistant cell. MDR resistance can be reversed by a number of agents, including differentiation agents, but the exact mechanism of action have not yet been established. The aim of this study was to compare a multidrug resistant cell line, derived from the cell line K562 and selected as resistant to vincristine (LUCENA-K562), with two other sensitive cell lines: the parental K562 (erythroleukemia) and HCT 116 (colon adenocarcinoma) in order to analyze the relationship between Pglycoprotein expression and cell differentiation. The drug resistance and the modulation of cell differentiation were measured using in vitro tests. The basic features were the changes in measurement of Pgp and carcinoembryonic antigen (CEA) expression by immunocytochemistry, hemoglobin contents (benzidine staining) and rhodamine-123 eftlux (flow cytometric analysis and fluorescence microscopy). The effect of TPA (12-O-tetradecanoilphorbol 13-acetato), RA (retinoic acid), DMSQ (dimethyl sulfoxide), OUA (ouabain), 5-FU (5-fluorouracil) and HMBA (hexamethylene-bis-acetamide) was tested on the three cell lines. The 5-FU exposure produced morphological changes, increase of benzidine-positive cells and Pgp activity on erithroleukemia cell lines. TPA produced morphological changes, CEA induction and Pgp activity on adenocarcinoma cell line, while the other drugs (RA, DMSO, OUA and HMBA) did not induce the same effects. The clinical treatment with modulators of cell differentiation requires caution, as it might lead to the induction of cell resistance as verified on our results.