Your browser doesn't support javascript.
loading
Mostrar: 20 | 50 | 100
Resultados 1 - 20 de 55
Filtrar
1.
Nutr Hosp ; 39(3): 644-651, 2022 Jun 24.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-35485386

RESUMO

Introduction: Introduction: osteoporosis is the most prevalent bone disease and one of the main causes of chronic disability in middle and advanced ages. Conventional pharmacological treatments are still limited, and their prolonged use can cause adverse effects that motivate poor adherence to treatment. Nutritional strategies are traditionally based on supplementing the diet with calcium and vitamin D. Recent studies confirm that the results of this supplementation are significantly improved if it is accompanied by the intake of oral hydrolyzed collagen. Objective: to evaluate the possible in vitro osteogenic activity of a peptide-mineral complex formed by bovine hydrolyzed collagen and bovine hydroxyapatite (Phoscollagen®, PHC®). Methods: the digestion and absorption of PHC® were simulated using the dynamic gastrointestinal digester of AINIA and Caco-2 cell model, respectively. Primary cultures of human osteoblasts were treated with the resulting fraction of PHC® and changes were evaluated in the proliferation of preosteoblasts and in the mRNA expression of osteogenic biomarkers at different stages of osteoblast maturation: Runt-related transcription factor 2 (Runx2), alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC) and type I collagen (ColA1). Results: an increase in preosteoblastic proliferation was observed (p ≤ 0,05). No changes were detected in the biomarkers of osteoblasts with 5 days of differentiation, but were with 14 days, registering an increase in Runx2 (p = 0.0008), ColA1 (p = 0.035), OC (p = 0.027) and ALP (without significance). Conclusion: these results show that the PHC® peptide-mineral complex stimulates the activity of mature osteoblasts, being capable of promoting bone formation.


Introducción: Introducción: la osteoporosis es la enfermedad ósea más prevalente y una de las principales causas de discapacidad crónica en las edades medias y avanzadas. Los tratamientos farmacológicos convencionales aún son limitados y su uso prolongado puede provocar efectos adversos que motiven baja adherencia al tratamiento. Las estrategias nutricionales se basan tradicionalmente en suplementar la dieta con calcio y vitamina D. Estudios recientes confirman que los resultados de esta suplementación mejoran significativamente si se acompaña de la ingesta de colágeno hidrolizado oral. Objetivo: evaluar la posible actividad osteogénica in vitro de un complejo péptido-mineral formado por colágeno hidrolizado e hidroxiapatita bovinos (Phoscollagen®, PHC®). Métodos: se simuló la digestión y absorción de PHC® utilizando el digestor dinámico gastrointestinal de AINIA y el modelo celular Caco-2, respectivamente. Cultivos primarios de osteoblastos humanos se trataron con la fracción resultante de PHC® y se evaluaron los cambios en la proliferación de los preosteoblastos y en la expresión del ARNm de los biomarcadores osteogénicos en diferentes etapas de maduración de los osteoblastos: factor de transcripción 2 relacionado con Runt (Runx2), fosfatasa alcalina (ALP), osteocalcina (OC) y colágeno tipo I (ColA1). Resultados: se observó un incremento de la proliferación preosteoblástica (p ≤ 0,05). No se detectaron cambios en los biomarcadores de osteoblastos con 5 días de diferenciación, pero sí con 14 días, registrándose un aumento de Runx2 (p = 0,0008), ColA1 (p = 0,035), OC (p = 0,027) y ALP (sin significancia). Conclusión: estos resultados muestran que el complejo péptido-mineral PHC® estimula la actividad de los osteoblastos maduros, siendo susceptible de promover la formación ósea.


Assuntos
Subunidade alfa 1 de Fator de Ligação ao Core , Durapatita , Fosfatase Alcalina/genética , Fosfatase Alcalina/metabolismo , Animais , Biomarcadores/metabolismo , Células CACO-2 , Bovinos , Diferenciação Celular , Colágeno/farmacologia , Subunidade alfa 1 de Fator de Ligação ao Core/genética , Subunidade alfa 1 de Fator de Ligação ao Core/metabolismo , Subunidade alfa 1 de Fator de Ligação ao Core/farmacologia , Digestão , Durapatita/metabolismo , Durapatita/farmacologia , Humanos , Osteoblastos/metabolismo , Osteocalcina/metabolismo , Osteocalcina/farmacologia , Osteogênese , Peptídeos/farmacologia
2.
Braz. dent. sci ; 25(1): 1-9, 2022. ilus
Artigo em Inglês | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-1353788

RESUMO

Objective: The objective of this study was to evaluate in vitro the influence of the anodized surface of Ti35Nb7Zr alloy on the behavior of osteogenic cells, for future application in biomedical implants. Material and Methods: For the development of this research, samples of commercially pure titanium (TiCp) and samples of Ti35Nb7Zr alloy were anodized, both were characterized by scanning electron microscopy (SEM) and were plated afterwards with human osteoblast-like cells (MG63 line) (2 x 104). Cell adhesion, cytotoxicity test, formation of mineralization nodules and a comet assay were also performed in different periods. The bottom of the plate was used as a control, without a sample. Results: SEM analysis showed that the topography of both samples presented surfaces covered by nanotubes. Cellular morphology exhibited spreading in both samples proposing an intimate cell- material liaison. After 3 days, the Ti35Nb7Zr group exhibited greater cell viability than the TiCp group (p<0.01). Regarding calcium content, there was no statistical difference between the anodized groups, but there was a difference between the experimental groups and the control group (p<0.01). In the comet assay, the percentage of DNA in the comet tail did not exhibit any significant difference (p>0.05) among the groups in the evaluated periods. Conclusion: It was concluded that this process of anodization was efficient to form nanotubes, as well as promote a positive influence on the behavior of osteogenic cells without promoting cell damage. (AU)


Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a influência da superfície anodizada da liga Ti35Nb7Zr no comportamento de células osteogênicas, para futura aplicação em implantes biomédicos. Material e Métodos: Para o desenvolvimento desta pesquisa, amostras de titânio comercialmente puro (TiCp) e amostras da liga Ti35Nb7Zr foram anodizadas, ambas foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e posteriormente plaqueadas com células semelhantes a osteoblastos humanos (linha MG63) (2 x 104). Foram realizados em diferentes períodos a adesão celular, teste de citotoxicidade, formação de nódulos de mineralização e ensaio do cometa. O fundo da placa foi usado como controle, sem amostra. Resultados: A análise em MEV mostrou que a topografia de ambas as amostras apresentava superfícies cobertas por nanotubos. A morfologia celular exibiu espalhamento em ambas as amostras, propondo uma ligação íntima célula-material. Após 3 dias, o grupo Ti35Nb7Zr exibiu maior viabilidade celular do que o grupo TiCp (p<0.01). Em relação ao teor de cálcio, não houve diferença estatística entre os grupos anodizados, mas houve diferença entre os grupos experimentais e o grupo controle (p<0.01). No ensaio do cometa, a porcentagem de DNA na cauda do cometa não apresentou diferença significativa (p> 0.05) entre os grupos nos períodos avaliados. Conclusão:Concluiu-se que esse processo de anodização foi eficiente para formar nanotubos, além de promover uma influência positiva no comportamento das células osteogênicas sem promover dano celular. (AU)


Assuntos
Osteoblastos , Titânio
3.
Araçatuba; s.n; 2021. 52 p. ilus, graf.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-1381565

RESUMO

A perda óssea dentária e a formação de lesões periapicais surgem como uma consequênc ia do desequilíbrio da homeostase óssea. Os osteoblastos, juntamente com os osteoclastos e osteócitos, atuam na formação e na reabsorção óssea. Vários marcadores de formação óssea são produzidos por osteoblastos ativos e refletem diferentes aspectos da dif erenciação osteoblástica e da remodelação óssea. Com isso, muitos autores têm explorado o uso de fitoterápicos, visando obter novos compostos que apresentem propriedades terapêuticas, como os flavonoides, e que estimulem a neoformação óssea e o reparo da r egião periapical. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a citotoxicidade e efeito indutor de mineralização de flavonoides sobre células osteoblásticas humanas. Para isso, células osteoblásticas da linhagem Saos expostas aos seguintes flavono2 foram ides: quercetina, miricetina e seus derivados taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG, além de pinocembrina, crisina e canferol, de forma isolada e combinada. Foi avaliado o efeito citotóxico, a atividade de fosfatase alcalina e indução de n mé todo de Shapiroódulos de mineralização. Os resultados foram analisados p elo Wilk, e as variáveis foram submetidas à análise de ANOVA seguida pelo teste de Tukey para comparar entre os grupos e/ou concentrações ou teste de Dunnett para comparar entre cada grupo e o controle, com nível de significância de 5%. A viabilidade da cultura de osteoblastos não teve uma redução estatisticamente significativa na presença da maioria dos compostos, exceto crisina a 100µM. Taxifolina, isoquercitrina, rutina, ampelopsina e EGCG foram os compostos que estimularam significativamente a atividade da fosfatase alcalina, juntamente com as combinações taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina a 25/25 µM. Quanto a formação de nódulos de mine ralização, ampelopsina, isoquercitrina, rutina, pinocembrina e miricetina isolados e taxifolina+isoquercitrina, taxifolina+ampelopsina e taxifolina+rutina combinados obtiveram os melhores resultados, variando de acordo com as concentrações. Concluise que a taxifolina, isoquercitrina, rutina e ampelopsina e combinações de taxifolina com esses flavonoides são citocompatíveis e apresentam efeito indutor de mineralização em osteoblastos Saos-2(AU)


Dental bone loss and the formation of periapical lesions arise as a consequence of imbalance of bone homeostasis. Osteoblasts, together with osteoclasts and osteocytes, act in bone formation and resorption. Several markers of bone formation are produced by active osteoblasts and reflect different aspects of osteoblastic differentiation and bone remodeling. Thus, many authors have explored the use of phytotherapics in order to obtain new compounds with therapeutic properties, such as flavonoids, and also stimulate bone neoformation and periapical region repair. The objective of this study was to evaluate in vitro the cytotoxicity and inducing effect of flavonoid mineralization on human osteoblastic cells. For this, osteoblastic cells of the Saos-2 lineage were exposed to the following flavonoids: quercetin, myricetin and its derivatives taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG, in addition to pinocembrin, chrysin and kaempferol, in an isolated and combined manner. The cytotoxic effect, the activity of alkaline phosphatase and the induction of mineralization nodules were evaluated. The results were analyzed using the Shapiro-Wilk method, and the variables were submitted to ANOVA analysis followed by the Tukey test to compare between groups and/or concentrations or Dunnett's test to compare between each group and the control, with a level of 5% significance. The viability of the osteoblast culture did not have a statistically significant reduction in the presence of most compounds, except 100 µM chrysin. Taxifoline, isoquercitrin, rutin, ampelopsin and EGCG were the compounds that significantly stimulated the activity of alkaline phosphatase, together with the combinations taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin at 25/25 µM. As for the formation of mineralization nodules, ampelopsin, isoquercitrin, rutin, pinocembrin and myricetin alone and taxifoline+isoquercitrin, taxifoline+ampelopsin and taxifoline+rutin combined obtained the best results, varying according to the concentrations. It is concluded that taxifoline, isoquercitrin, rutin and ampelopsin and combinations of taxifolin with these flavonoids are cytocompatible and have a mineralization-inducing effect on Saos-2 osteoblasts(AU)


Assuntos
Osteoblastos , Periodontite Periapical , Flavonoides , Reabsorção Óssea , Osteoclastos , Osteócitos , Quercetina , Rutina , Flavonoides/toxicidade , Flavonoides/uso terapêutico , Osso e Ossos , Calcificação Fisiológica , Remodelação Óssea , Flavanonas , Homeostase
4.
Actual. osteol ; 16(2): 140-153, mayo.-ago. 2020. ilus, graf
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: biblio-1129814

RESUMO

La osteoporosis y las enfermedades cardiovasculares son patologías prevalentes en mujeres posmenopáusicas. La calcificación vascular es un proceso en el que se produce una distorsión de la arquitectura natural del tejido arterial con una transformación símil osteogénica. La fisiología vascular y la osteogénesis (formación y remodelación ósea) comparten una complejidad metabólica y funcional crítica, que ha sido poco explorada en forma conjunta, lo que ha impulsado la concepción del Eje Óseo-Vascular como nueva área de investigación, con una visión de estudio integradora con la finalidad de identificar vínculos entre ambos sistemas. En virtud de la controversia planteada sobre los riesgos/beneficios de la terapia de reemplazo hormonal para prevenir enfermedades asociadas a la menopausia, se ha incentivado la búsqueda de nuevas opciones de tratamiento. Los fitoestrógenos, como compuestos nutracéuticos, surgen como una potencial alternativa terapéutica. En particular, las isoflavonas presentan gran analogía estructural con el estrógeno humano 17ß-estradiol, lo que les permite unirse al receptor de estrógenos e inducir acciones estrogénicas tanto en células animales como humanas. Basado en la experiencia propia como en lo reportado en la bibliografía, este artículo analiza la información disponible sobre las acciones vasculares y óseas de los fitoestrógenos (específicamente la isoflavona genisteína), con una visión de ciencia traslacional. Es de esperar que los avances en el conocimiento derivado de la ciencia básica, en un futuro cercano, pueda contribuir a decisiones clínicas a favor de promover terapias naturales de potencial acción dual, para la prevención de enfermedades de alta prevalencia y significativo costo social y económico para la población. (AU)


Osteoporosis and cardiovascular diseases are prevalent diseases in postmenopausal women. Vascular calcification is a cellmediated process that leads to the loss of the natural architecture of the arterial vessels due to osteogenic transdifferentiation of smooth muscle cells, and matrix mineralization. Vascular physiology and osteogenesis (bone formation and remodeling) share a critical metabolic and functional complexity. Given the emerging integrative nature of the bonevascular axis, links between both systems are a matter of ongoing interest. In view of the controversy stated about the risks/benefits of hormone replacement therapy to prevent diseases associated with menopause, phytoestrogens arise as a potential natural therapeutic alternative. In particular, isoflavones have a strong structural analogy with the human estrogen 17ß-estradiol, that allows them to bind to the estrogen receptor and induce estrogenic actions in animal and human cells. Based in on our own experience and the information available in the literature, in this paper we provide an overview of the role of phytoestrogens on vascular and bone tissues, with focus on Genistein actions. We wish that the basic knowledge acquired may contribute to guide clinical decisions for the promotion of natural therapies for the treatment of diseases that conspire against human health. (AU)


Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Osteogênese/efeitos dos fármacos , Fitoestrógenos/uso terapêutico , Aterosclerose/tratamento farmacológico , Calcificação Vascular/tratamento farmacológico , Osteogênese/fisiologia , Menopausa , Doenças Cardiovasculares/complicações , Osteoporose Pós-Menopausa , Remodelação Óssea , Genisteína/uso terapêutico , Fitoestrógenos/classificação , Fitoestrógenos/farmacologia , Aterosclerose/fisiopatologia , Estrogênios/biossíntese , Calcificação Vascular/fisiopatologia , Calcificação Vascular/metabolismo
5.
Int. j. odontostomatol. (Print) ; 13(1): 64-68, mar. 2019. tab
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: biblio-990066

RESUMO

RESUMEN: El correcto sellado apical es un paso importante durante el tratamiento de conductos, para esto, se utilizan puntas de gutapercha y cemento sellador, de este último existen diversas formulaciones químicas en el mercado, por lo cual es importante tomar en cuenta los efectos que estas pueden tener en el proceso de cicatrización periapical. El propósito de este estudio fue evaluar la biocompatibilidad de cuatro cementos selladores con diferente composición química con osteoblastos humanos. Se prepararon extractos de cementos selladores a con dos concentraciones (10 mg/mL y 40 mg/mL) y dos tiempos de exposición (10 min y 8 h), estos fueron colocados en contacto con osteoblastos humanos para evaluar la proliferación y citotoxicidad a 24, 72 y 96 h con sus respectivos controles y blancos. Se realizó un análisis estadístico con ANOVA de un factor y la prueba de comparaciones múltiple de Bonferroni. Los resultados obtenidos, tanto en el ensayo de citotoxicidad como en el de proliferación, indicaron que el cemento a base de resina no es biocompatible con osteoblastos. El cemento a base de poli-dimetilxilosano fue el único que no mostró citotoxicidad a ningún de tiempo de exposición y concentración examinadas en este estudio.


ABSTRACT: Correct apical sealing is an important step during root canal treatment, hence, gutta-percha points and sealant are used. There are several chemical compositions on the market, so it is important to evaluate the effects of these in the periapical healing process. The aim of this study was to evaluate the biocompatibility of four sealer cements with different chemical composition placed in contact with human osteoblast. Different extracts were prepared at two concentrations (10 mg/mL and 40 mg/mL) and two exposure times (10 min and 8 h) these were placed in contact with human osteoblast to evaluate cytotoxicity and proliferation at 24, 48 and 72 h with their respective controls and blanks. A statistical analysis was performed with ANOVA of one factor and Bonferroni post hoc. Results obtained in cytotoxicity and proliferation assays, indicated that the resinbased cement is not biocompatible with osteoblast. The poly-dimethylxilosanbased cement was the only that did not show cytotoxicity at any time of exposure and concentration examined in this study.


Assuntos
Humanos , Osteoblastos , Teste de Materiais/métodos , Cimentos Dentários/química , Técnicas In Vitro , Análise de Variância
6.
Belo Horizonte; s.n; 2019. 130 p. ilus, tab.
Tese em Inglês, Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-1016561

RESUMO

Os objetivos deste trabalho foram 1) avaliar o impacto da terapia anticoagulante oral no sangramento associado à exodontias durante os períodos intraoperatório e pósoperatório; 2) investigar os efeitos do etexilato de dabigatrana, um inibidor direto da trombina, sobre as células ósseas. Para atender o objetivo 1, foram recrutados indivíduos em uso de anticoagulantes orais do tipo antagonista de vitamina K (AVK) e alvo-específico (DOAC, do inglês direct oral anticoagulant) e indivíduos sem terapia anticoagulante com indicação de exodontia. As exodontias foram realizadas sem a suspensão da terapia anticoagulante e parâmetros associados a desfechos hemorrágicos foram avaliados. A avaliação quantitativa do sangramento intraoperatório foi realizada por meio da mensuração do volume e análise dos fluidos aspirados durante o procedimento e normalizada por um escore. Obtivemos como resultados que as complicações hemorrágicas pós-operatórias bem como o escore de sangramento intraoperatório foi similar entre os grupos, sendo que nenhum evento hemorrágico foi observado no grupo DOAC. A história prévia de complicações hemorrágicas em procedimentos odontológicos (p=0,001) e uso de medidas hemostáticas locais (p=0,017) foram estatisticamente maiores no grupo AVK. Para atender o objetivo 2, experimentos foram conduzidos a partir de modelo in vitro, no qual o efeito da terapia anticoagulante foi avaliado diretamente sobre as células ósseas e em modelo animal ex-vivo. Neste modelo ex-vivo, células de animais previamente tratados com etexilato de dabigatrana foram diferenciadas em osteoclastos. Culturas primárias de células-tronco de camundongos e ratos foram diferenciadas em osteoclastos e osteoblastos e tratadas com o fármaco disponível comercialmente, etexilato de dabigatrana (Pradaxa® 1-6 µg/mL) bem como seu princípio ativo, dabigatrana (0,1, 0,3, 3 e 6 µg/mL). Células não expostas aos medicamentos foram utilizadas como controle. A diferenciação de osteoclastos foi inibida pelo tratamento em ambos os modelos, in vitro e ex-vivo. Paralelamente, observou-se a redução da expressão gênica e proteica do marcador Catepsina K e da atividade reabsortiva destas células. Nas culturas de osteoblastos, o tratamento inibiu a expressão gênica dos marcadores fosfatase alcalina (ALP) e osteocalcina, reduziu a atividade in situ de ALP e a deposição de matriz extracelular, indicando um efeito negativo na diferenciação dos osteoblastos. Concluiu-se que o uso de anticoagulantes orais não aumentou a ocorrência de desfechos hemorrágicos na população estudada, o que reforça a manutenção da terapia para a realização de exodontias. O tratamento sobre culturas celulares utilizando etexilato de dabigatrana impactou negativamente a diferenciação e atividade de osteoclastos e osteoblastos.(AU)


The objectives of this study were 1) to evaluate the impact of oral anticoagulant therapy on the pattern of intraoperative and postoperative bleeding in dental surgery; 2) to investigate the effects of dabigatran etexilate, a direct thrombin inhibitor, on bone cells. To fulfill objective 1, individuals undergoing oral anticoagulant therapy with vitamin K antagonists (VKA) or direct oral anticoagulants (DOAC) and individuals without anticoagulant therapy, who had indication of dental extraction were included. Dental surgery procedures were performed without interruption of anticoagulant therapy and parameters associated with hemorrhagic outcomes were evaluated. Intraoperative bleeding was evaluated by means of the measurement of the total amount of blood collected during the procedure corrected by absorbance reading and normalized by score. The results showed that the occurrence of bleeding events and the intraoperative blood loss were similar among groups and hemorrhagic episodes were not observed amongst the individuals taking DOACs. The previous history of complications in dental procedures (p=0.001) and the use of additional hemostatic measures (p=0.017) were significantly higher in the VKA group. To fulfill objective 2, experiments were conducted by means of an in vitro model in which the direct effect of anticoagulant therapy on bone cells was evaluated. An ex-vivo animal model in which cells of animals previously treated with dabigatran etexilate were differentiated was also carried out into osteoclasts. Primary cultures of mice and rats cells were differentiated into osteoclasts and osteoblasts and treated with dabigatran etexilate solution (Pradaxa® 1-6 µg/mL) and its active principle dabigatran (0.1, 0.3, 3 and 6 µg/mL). Untreated cells were used as controls and the effects of the treatment on cell viability and differentiation were evaluated. Both dabigatran etexilate and its active principle, dabigatran inhibited osteoclast differentiation and activity in vitro and in the ex-vivo model, as demonstrated by the reduction of resorption pits and cathepsin K gene and protein expression. In osteoblast cultures, dabigatran etexilate reduced the in situ alkaline phosphatase (ALP) activity, matrix mineralization and gene expression of ALP and osteocalcin. These findings indicated osteoblast inhibition. In conclusion, oral anticoagulant therapy did not result in increased bleeding outcomes in this sample, which strengthen the advocacy of the maintenance of the therapy during dental surgery. Dabigatran etexilate treatment impaired the activity and differentiation of osteoclasts and osteoblasts.(AU)


Assuntos
Humanos , Osteoblastos , Cirurgia Bucal , Extração Dentária , Varfarina , Hemorragia Pós-Operatória , Dabigatrana , Anticoagulantes/uso terapêutico , Estudos de Coortes
7.
Int. j. morphol ; 36(2): 391-394, jun. 2018. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: biblio-954126

RESUMO

Resveratrol in cell culture media increases osteoblastic markers. Also results from previous studies provide evidence for resveratrol positive effects on bone healing and bone production. In this preclinical study we investigated bone healing in rats by resveratrol systemic application. 30 Wistar male rats were divided into two groups (study group and control group). At first, maxillary second molars of rats were extracted. The rats were kept in laboratory for next 28 days. Study group received resveratrol 20 mg/kg by abdominal injection every day. The control group received placebo in the same manner that study group. Rats were sacrificed after 28 days and bone samples were collected from center of maxillary second molar socket. Samples were evaluated histologically for new bone formation, inflammation, necrosis, fibrosis and foreign body reaction. The mean difference of new bone formation in control group (28.30 %) and study group (45 %) were statistically significant (P=0.014). There were no significant differences in inflammation, fibrosis, necrosis and foreign body reaction (P>0.05). Resveratrol has positive effects on bone healing but more evidence needed from more clinical and animal studies.


El resveratrol en los medios de cultivo celular aumenta los marcadores osteoblásticos. Los resultados de estudios anteriores proporcionan evidencia de efectos positivos del resveratrol sobre la curación ósea y la producción ósea. En este estudio preclínico, investigamos la curación ósea en ratas mediante la aplicación sistémica de resveratrol. Se dividieron 30 ratas macho Wistar en dos grupos (estudio y control). Inicialmente se extrajeron los segundos molares maxilares de las ratas y los animales se mantuvieron en el laboratorio durante los siguientes 28 días. El grupo de estudio recibió todos los días resveratrol 20 mg/kg por inyección abdominal . El grupo control recibió placebo de la misma manera que el grupo estudio. Las ratas fueron sacrificadas después de 28 días y se recogieron muestras de hueso del centro del segundo molar maxilar. Las muestras se evaluaron histológicamente para la formación de hueso nuevo, inflamación, necrosis, fibrosis y reacción de cuerpo extraño. La media de formación de hueso nuevo en el grupo control (28,30 %) y en el grupo estudio (45 %) fueron estadísticamente significativas (P=0,014). No hubo diferencias significativas en la inflamación, fibrosis, necrosis y reacción al cuerpo extraño (P>0,05). El resveratrol tiene efectos positivos sobre la curación de los huesos, pero aún es necesario realizar más pruebas de estudios clínicos, como también en animales.


Assuntos
Animais , Ratos , Osteoblastos/efeitos dos fármacos , Osteoclastos/efeitos dos fármacos , Estilbenos/farmacologia , Desenvolvimento Ósseo/efeitos dos fármacos , Osteogênese/efeitos dos fármacos , Ratos Wistar , Suplementos Nutricionais
8.
Bauru; s.n; 2018. 98 p. ilus, graf, tab.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-885097

RESUMO

O osteossarcoma (OS) é o tumor maligno primário mais comum do tecido ósseo, caracterizado pela formação de osteócitos anormais. Apesar do avanço nas terapias convencionais (quimioterapia e retirada do tumor), essas não conseguem eliminar totalmente as células tumorais e impedir a progressão da doença. Recentemente, agentes derivados de fontes naturais ganharam considerável atenção por causa de sua segurança, eficácia e disponibilidade imediata. Nesse sentido, a apocinina, inibidor do complexo NADPH-oxidase, vem sendo estudada como agente antitumoral em alguns tipos de câncer como: pâncreas, próstata, pulmão e mama. Apocinina é um pró-fármaco e sua ação parece estar relacionada à sua conversão produzindo a diapocinina, a qual se mostrou mais efetiva do que a apocinina. Portanto, o objetivo desse estudo é avaliar, in vitro, o potencial antitumoral da apocinina e diapocinina em células de osteossarcoma humano. Para isso, foram utilizados osteoblastos humanos normais (HOb) e osteossarcoma humano imortalizadas (SaOS-2) tratados ou não com apocinina e diapocinina em diversas concentrações. Foram realizados os ensaios de viabilidade celular, alterações morfológicas, apoptose celular, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), formação de colônias, migração, invasão e expressão do fator indutor de hipóxia-1alfa (HIF-1). Também foram conduzidos ensaios para verificar a atividade de metaloproteinase de matriz (MMP) 2 e 9. Os resultados em SaOS-2 mostraram que o tratamento com apocinina nas concentrações de 1,5 e 3 mM; e diapocinina nas concentrações de 0,75 e 1,5 mM reduziram a viabilidade; aumentaram o número de células em apoptose e diminuíram a produção de EROs; sem causar danos às células HOb. Além disso, essas mesmas concentrações inibiram a migração e invasão celular; diminuíram a expressão de HIF-1; e reduziram a atividade de MMP-2 em SaOS-2. Considerando os resultados obtidos, concluímos que a apocinina e diapocinina podem atuar como possíveis moduladores de células tumorais, sendo que a diapocinina mostrou ser mais efetiva nos parâmetros testados.(AU)


Osteosarcoma (OS) is the most common primary malignant tumor of bone tissue, characterized by the formation of abnormal osteocytes. Despite advances in conventional therapies (chemotherapy and surgery) they cannot completely eliminate tumor cells and prevent the progression of the disease. Recently, agents derived from natural sources have achieved considerable attention because of their safety, efficacy and immediate availability of therapies. In this way, apocynin, an inhibitor of the NADPH-oxidase complex, has been studied as an antitumor agent in some types of cancer, such as pancreas, prostate, lung and breast. Apocynin is a prodrug and its action indicate to be related to its conversion to diapocynin, which has been shown to be more efficient than apocynin itself. Thus, the aim of this study is to evaluate, in vitro, the antitumor potential of apocynin and diapocynin in human osteosarcoma cells. For this, normal human osteoblasts (HOb) and immortalized human osteosarcoma cells (SaOS-2) were treated or no-treated with apocynin and diapocynin in various concentrations. Cell viability assay, morphological alterations, cellular apoptosis, reactive oxygen species (ROS) production, colony formation, migration, invasion and expression of hypoxia-inducible factor-1 alpha (HIF-1) were performed. We also performed assays to verify the activity of matrix metalloproteinase (MMP) 2 and 9. The results in SaOS-2 showed that treatment with apocynin at concentrations of 1,5 e 3 mM; and diapocynin at concentrations of 0,75 e 1,5 mM reduced cell viability; increased the number of cells in apoptosis and decreased the production of ROS; without damaging HOb cells. Moreover, these same concentrations inhibited cell migration and invasion; decreased HIF-1 expression; and reduced MMP 2 activity in SaOS-2. Considering the results, we suggest that apocynin and diapocynin may act as possible modulators of tumor cells, and diapocynin has been shown to be more effective.(AU)


Assuntos
Humanos , Acetofenonas/farmacologia , Antineoplásicos/farmacologia , Compostos de Bifenilo/farmacologia , Osteossarcoma/tratamento farmacológico , Apoptose/efeitos dos fármacos , Movimento Celular/efeitos dos fármacos , Sobrevivência Celular/efeitos dos fármacos , Metaloproteinase 2 da Matriz/efeitos dos fármacos , Metaloproteinase 9 da Matriz/efeitos dos fármacos , Osteoblastos/efeitos dos fármacos , Espécies Reativas de Oxigênio/análise , Reprodutibilidade dos Testes , Células Tumorais Cultivadas
9.
Rev. odontol. UNESP (Online) ; 46(6): 368-373, Nov.-Dec. 2017. tab, ilus
Artigo em Inglês | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-902687

RESUMO

Introduction: Alveolar corticotomy is a surgical procedure used to increase the velocity of tooth movement. Objective: Identify histological evidence of the effect of corticotomy on orthodontic movement in rats. Material and method: Forty-five Wistar rats (Rattusnorvegicus Albinus) were equally divided into three groups: Control Group (CG) - no tooth movement or corticotomy; Movement Group (MG) - tooth orthodontic movement only; and Corticotomy and Movement Group (CMG) - tooth orthodontic movement surgically assisted by corticotomy. In the CMG, surgical procedures consisted in an incision in the palatal, reaching from the mesial to the distal regions of the maxillary right first molar. Tooth movement in the MG and CMG was applied with coil spring force of 40 gF from the maxillary right first molar to the maxillary right incisor. The rats were sacrificed at days 1, 3, and 7, and histological sections were performed to evaluate the counting of osteoblasts and osteoclasts throughout the areas of tension and pressure. Result: Histological analysis showed that the CMG presented better cell response to bone neoformation compared with that of the other groups. Greater proliferation of osteoclasts was observed in areas of pressure on day 3, resulting in increased reabsorption, whereas greater proliferation of osteoblasts was observed in areas of tension on day 1, indicating increased bone formation. Conclusion: Differences between the treated groups occurred only in the initial period of tooth movement. Therefore, the changes caused by corticotomy are not significant in orthodontic movement to justify this invasive procedure.


Introdução: A corticotomia alveolar é um procedimento cirúrgico utilizado para aumentar a velocidade do movimento dentário. Objetivo: Identificar evidências histológicas do efeito da corticotomia no movimento ortodôntico no rato. Material e método: Quarenta e cinco ratos Wistar (Rattusnorvegicus Albinus) foram igualmente divididos em três grupos: Grupo de Controle (GC) - sem movimento dentário ou corticotomia; Grupo de movimento (GM) - apenas movimento ortodôntico do dente; e Corticotomia e Movimento Grupo (GCM) - movimento ortodôntico dentário cirurgicamente assistido por corticotomia. Os procedimentos cirúrgicos de GCM consistiram de uma incisão no palato, da mesial a distal do primeiro molar superior direito. O movimento do dente no GM e GCM foi aplicado com uma força da mola helicoidal de 40 gF do primeiro molar superior direito para o incisivo superior direito. Os ratos foram sacrificados no 1º, 3º e 7º dia e, após este período, foram realizadas seções histológicas para avaliar a contagem de osteoblastos e osteoclastos nas áreas de tensão e pressão. Resultado: A análise histológica mostrou que o GCM apresentou melhor resposta celular na neoformação óssea quando comparado aos outros grupos. Em áreas de pressão, no 3º dia, houve uma maior proliferação de osteoclastos, resultando em maior reabsorção. Em áreas de tensão, no 1º dia, houve uma maior proliferação de osteoblastos, indicando aumento da formação óssea. Conclusão: A diferença entre os grupos tratados ocorreu apenas no período inicial do movimento. Portanto, as alterações causadas pela corticotomia não são significativas no movimento ortodôntico para justificar o procedimento invasivo.


Assuntos
Ratos , Osteoclastos , Ratos , Procedimentos Cirúrgicos Operatórios , Técnicas de Movimentação Dentária , Incisivo , Dente Molar , Ortodontia , Osteoblastos
10.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 69(6): 1573-1580, nov.-dez. 2017. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-910772

RESUMO

The objective was to evaluate the in vitro effect of prolactin in osteogenic potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) in female rats. ADSCs were cultured in osteogenic medium with and without the addition of prolactin and distributed into three groups: 1) ADSCs (control), 2) ADSCs with addition of 100ng/mL of prolactin and 3) ADSCs with addition of 300ng/mL of prolactin. At 21 days of differentiation, the tests of MTT conversion into formazan crystals, percentage of mineralized nodules and cells per field and quantification of genic transcript for alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I by real-time RT-PCR were made. The addition of prolactin reduced the conversion of MTT in group 3 and increased the percentage of cells per field in the groups 2 and 3, however without significantly increasing the percentage of mineralized nodules and the expression of alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I. In conclusion, the addition of prolactin in concentrations of 100ng/mL and 300ng/mL does not change the osteogenic differentiation to the ADSCs of female rats despite increase in the cellularity of the culture.(AU)


O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito in vitro da prolactina sobre o potencial osteogênico de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) em ratas. CTM-TA foram cultivadas em meio osteogênico com e sem adição de prolactina e distribuídas em três grupos: 1) CTM-TA (controle), 2) CM-TA com adição de 100ng/mL de prolactina e 3) CTM-TA com adição de 300ng/mL de prolactina. Aos 21 dias de diferenciação, foram realizados os testes de conversão do MTT em cristais de formazan, porcentagem de nódulos mineralizados e células por campo e quantificação dos transcritos gênicos para fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. A adição de prolactina reduziu a conversão do MTT no grupo 3 e aumentou a porcentagem de células por campo nos grupos 2 e 3, sem alterar significativamente a porcentagem de nódulos mineralizados e a expressão de fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. Conclui-se que a adição de prolactina nas concentrações de 100ng/mL e 300ng/mL não altera a diferenciação osteogênica das CTM-TA de ratas, apesar do aumento de celularidade da cultura.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Ratos , Tecido Adiposo , Osteogênese , Prolactina/análise , Células-Tronco , Osteoblastos
11.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 69(6): 1573-1580, Nov.-Dez. 2017. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-735000

RESUMO

The objective was to evaluate the in vitro effect of prolactin in osteogenic potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) in female rats. ADSCs were cultured in osteogenic medium with and without the addition of prolactin and distributed into three groups: 1) ADSCs (control), 2) ADSCs with addition of 100ng/mL of prolactin and 3) ADSCs with addition of 300ng/mL of prolactin. At 21 days of differentiation, the tests of MTT conversion into formazan crystals, percentage of mineralized nodules and cells per field and quantification of genic transcript for alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I by real-time RT-PCR were made. The addition of prolactin reduced the conversion of MTT in group 3 and increased the percentage of cells per field in the groups 2 and 3, however without significantly increasing the percentage of mineralized nodules and the expression of alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I. In conclusion, the addition of prolactin in concentrations of 100ng/mL and 300ng/mL does not change the osteogenic differentiation to the ADSCs of female rats despite increase in the cellularity of the culture.(AU)


O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito in vitro da prolactina sobre o potencial osteogênico de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) em ratas. CTM-TA foram cultivadas em meio osteogênico com e sem adição de prolactina e distribuídas em três grupos: 1) CTM-TA (controle), 2) CM-TA com adição de 100ng/mL de prolactina e 3) CTM-TA com adição de 300ng/mL de prolactina. Aos 21 dias de diferenciação, foram realizados os testes de conversão do MTT em cristais de formazan, porcentagem de nódulos mineralizados e células por campo e quantificação dos transcritos gênicos para fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. A adição de prolactina reduziu a conversão do MTT no grupo 3 e aumentou a porcentagem de células por campo nos grupos 2 e 3, sem alterar significativamente a porcentagem de nódulos mineralizados e a expressão de fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. Conclui-se que a adição de prolactina nas concentrações de 100ng/mL e 300ng/mL não altera a diferenciação osteogênica das CTM-TA de ratas, apesar do aumento de celularidade da cultura.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Ratos , Tecido Adiposo , Osteogênese , Prolactina/análise , Células-Tronco , Osteoblastos
12.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206596

RESUMO

A cafeína é um alcaloide ativo que pode causar danos aos tecidos ósseo e cartilaginoso desde a formação do esqueleto na vida pré-natal até a vida adulta. Esse composto passa para a prole através da placenta e do leite, causando redução da formação e do crescimento ósseo. A hipótese deste estudo é que as células tronco mesenquimais (CTMs), os osteoblastos e os condrócitos, responsáveis por originar o esqueleto, possam ser alvos da cafeína. Para tentar elucidar os mecanismos celulares e moleculares pelos quais a cafeína atua sobre essas células, foram realizados quatro experimentos distintos. O objetivo foi avaliar o efeito da cafeína sobre a diferenciação osteogênica das CTMs da medula óssea (experimento 1), atividade de síntese de osteoblastos da calvária (experimento 2) e a atividade de síntese de condrócitos (experimento 3), extraídos da prole de ratas mães que receberam 25, 50 e 100mg/Kg de cafeína durante a gestação (experimento 2 e 3) ou durante a gestação e lactação (experimento 1). No quarto experimento, o objetivo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de cafeína, adicionadas ao meio de cultura, sobre a atividade de síntese de condrócitos extraídos de ratos neonatos. No primeiro e segundo experimentos, foram avaliados a viabilidade celular, a atividade da fosfatase alcalina, a síntese de colágeno e de nódulos mineralizados e a expressão dos transcritos gênicos para osteocalcina, osteopontina, sialoproteína óssea, fosfatase alcalina, colágeno tipo I e Runx-2 por qRT-PCR. No terceiro e quarto experimentos, foram avaliados a viabilidade celular e a atividade de síntese por meio de análises citoquímicas, morfométricas e da quantificação dos transcritos gênicos para Sox-9, Runx-2, agrecano, colágeno tipo II e fosfatase alcalina por qRT-PCR. Os dados dos quatro experimentos foram submetidos a ANOVA com comparação das médias pelo teste SNK. Diferenças foram consideradas significativas se p0,05. Nas CTMs, as doses de 50 e 100mg/Kg de cafeína reduziram a atividade da fosfatase alcalina em todos os períodos estudados e a expressão de colágeno tipo I aos 21 dias. A expressão dos transcritos gênicos para fosfatase alcalina, Runx-2 e sialoproteína óssea e a síntese dos nódulos mineralizados reduziu em todas as doses de cafeína (experimento 1). Os osteoblastos extraídos de filhos de ratas que receberam cafeína na dose de 50mg/Kg durante a gestação apresentaram aumento da síntese de transcritos gênicos para osteocalcina, osteopontina, sialoproteína óssea, fosfatase alcalina e colágeno tipo I, resultando em aumento da síntese de nódulos mineralizados (experimento 2). Nas culturas de condrócitos de todos os grupos tratados com cafeína os efeitos não foram lineares ou dose-dependentes. As culturas de condrócitos extraídos dos grupos tratados com a dose de 25 mg/Kg foram as que apresentaram os menores valores, com redução da viabilidade e da porcentagem de células, da atividade da fosfatase alcalina, da síntese de colágeno e de matriz condrogênica, bem como da expressão de Sox-9, fosfatase alcalina e colágeno tipo I. Culturas de condrócitos do grupo tratado com 50 mg/Kg de cafeína apresentaram redução da síntese de colágeno e da expressão de Sox-9. A dose de 100 mg/Kg reduziu a síntese de colágeno, bem como a expressão de Sox-9 e de fosfatase alcalina (experimento 3). In vitro, a cafeína reduziu significativamente e de forma dose-dependente a redução do MTT em cristais de formazan, a porcentagem de células/campo, a síntese de colágeno, a atividade da fosfatase alcalina e a síntese de matriz condrogênica PAS+, safranina O+, alcian blue+, bem como a expressão dos transcritos gênicos para agrecano, Sox-9 e colágeno tipo II (experimento 4). Conclui-se que os efeitos da cafeína são variáveis de acordo com sua ação in vivo ou in vitro, com sua concentração ou dose e com o tipo de célula sob a qual ela esteja atuando. De forma geral, os efeitos in vivo da cafeína sobre as células tronco e os condrócitos e o efeito in vitro sobre os condrócitos é negativo e danoso, enquanto que seus efeitos in vivo sobre os osteoblastos, nas mesmas doses testadas sobre as CTMs e os condrócitos, são contrários, aumentando a viabilidade e a atividade de síntese dessas células.


Caffeine is an active alkaloid that can cause damage to bone tissue and cartilage in formation during prenatal life and into adulthood. This compound is transfered to offspring through the placenta and milk, causing a reduction in the bone formation and growth. The hypothesis of present study is that mesenchymal stem cells (MSCs), osteoblasts and chondrocytes, responsible for originating the skeleton, can be targets of caffeine. To try to elucidate the cellular and molecular mechanisms by which caffeine acts on these cells, four separate experiments were performed. The objective was to evaluate the effect of caffeine on the osteogenic differentiation of MSCs from bone marrow (experiment 1), osteoblast synthesis activity of the calvaria (experiment 2), and chondrocyte synthesis activity (experiment 3), obtained from rat offspring of dams who received 25, 50 and 100mg/Kg of caffeine during pregnancy (experiment 2 and 3) or during pregnancy and lactation (experiment 1). In the fourth experiment, the objective was to evaluate the effect of different concentrations of caffeine, added to the culture medium on chondrocyte synthesis activity extracted from newborn rats. In the first and second experiments, we assessed cell viability, alkaline phosphatase activity, collagen synthesis and mineralized nodules and expression of gene transcripts for osteocalcin, osteopontin, sialoprotein, alkaline phosphatase, collagen I and Runx-2 by qRT-PCR. In the third and fourth experiments, we assessed cell viability and activity of synthesis by cytochemical analysis, morphometric and quantification of gene transcripts for Sox-9, Runx-2, aggrecan, collagen II and alkaline phosphatase by qRT-PCR. The data from the four experiments were analyzed by ANOVA to compare the means by SNK test. Differences were considered significant if p 0.05. In MSCs, doses of 50 and 100 mg/Kg of caffeine reduced the activity of alkaline phosphatase in all periods studied and the expression of collagen I at 21 days. The expression of gene transcripts for alkaline phosphatase, Runx-2 and bone sialoprotein and synthesis of mineralized nodules reduced in all doses of caffeine (experiment 1). Osteoblasts obtained from offspring of rats that received caffeine at a dose of 50mg/Kg during pregnancy showed an increase in gene transcripts synthesis for osteocalcin, osteopontin, sialoprotein, alkaline phosphatase and collagen type 1, resulting in increased synthesis of mineralized nodules (experiment 2). In chondrocyte cultures from all groups treated with caffeine, effects were non-linear or dose-dependent. The chondrocyte cultures obtained from groups treated with the dose of 25 mg/Kg showed the lower values, reducing viability and percentage of cells, alkaline phosphatase activity, collagen synthesis and chondrogenic matrix, as well as the expression of Sox-9, alkaline phosphatase and collagen I. Chondrocyte cultures of group treated with 50 mg/Kg of caffeine decreased collagen synthesis and expression of Sox-9. The dose of 100 mg/Kg reduced the collagen synthesis, as well as the expression of Sox-9 and alkaline phosphatase (experiment 3). In vitro, caffeine reduced significantly and dose-dependent manner the conversion of MTT into formazan, the percentage of cells/field, collagen synthesis, alkaline phosphatase activity and synthesis of chondrogenic matrix PAS +, safranin O +, alcian blue + as well as the expression of gene transcripts for aggrecan, Sox-9 and II collagen (experiment 4). It is concluded that the effects of caffeine vary according to their action in vivo or in vitro, with their concentration or dose and the type of cell in which it is acting. Overall, the in vivo effects of caffeine on stem cells and chondrocytes and the in vitro effect on chondrocytes is negative and harmful, while their in vivo effects on osteoblasts, the same doses tested on MSCs and chondrocytes, are contrary, increasing the viability and synthesis activity of these cells.

13.
Bauru; s.n; 2017. 123 p. graf, ilus.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-905371

RESUMO

O objetivo deste estudo foi investigar o papel do fator de crescimento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB) na concentração de 300ng/ml na taxa de proliferação e adesão de células derivadas da granulação óssea humana a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos. Na primeira etapa do estudo, foi estabelecida cultura primária de células da granulação óssea de dois pacientes adultos, sistemicamente saudáveis, não fumantes. Após a expansão celular, as células foram caracterizadas para determinação do fenótipo por meio de ensaios de viabilidade celular, MTT, ensaio de atividade de fosfatase alcalina, ensaio de mineralização e caracterização imunohistoquímica por meio de citometria de fluxo (segunda etapa). Na terceira etapa do estudo, os efeitos da adição de PDGF-BB recombinante humano na concentração de 300ng/ml na taxa de proliferação e adesão de células derivadas da granulação óssea a superfícies radiculares periodontalmente comprometidas foram investigados. A taxa de proliferação celular estimulada pelo PDGF-BB (grupo teste) ou pelo meio de cultura (grupo controle) foi investigada por meio de contagem de células viáveis nos frascos de cultura após 1, 3, 5 e 7 dias do cultivo celular. Foram obtidos 30 fragmentos dentários a partir de dentes extraídos por razões periodontais. Os fragmentos foram raspados com curetas Gracey e condicionados com solução em gel de EDTA a 24% durante 3 minutos, lavados com solução de soro fisiológico, secos e posicionados em placas de 24 poços. Foram incubadas sobre os fragmentos tratados 1x104 células GO por 24 horas, seguido por fixação e preparo para análise por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O número de células aderidas sobre os fragmentos foi analisado nas fotomicrografias. O padrão de crescimento das células GO foi compatível com células ósseas, com modificação do padrão do crescimento com o aumento do número de passagens. Houve atividade de fosfatase alcalina em meio osteogênico e convencional, com pico máximo aos 7 dias e atividade de mineralização estimulada ou não por meio osteogênico, com pico máximo aos 21 dias. A análise por meio de citometria de fluxo demonstrou que as células GO não expressaram CD105 e CD166 na 14a passagem, indicando sua diferenciação celular avançada nesse período. A adição de rhPDGF-BB resultou em mudança na taxa de proliferação celular, observando-se pico máximo de crescimento aos 7 dias, com diferenças estatisticamente significantes (p < 0.005; ANOVA post hoc Tukey) em relação aos períodos de 1, 3 e 5 dias. O ensaio de MTT demonstrou maior viabilidade celular no período de 48 hs, comparativamente aos períodos de 24 e 72 horas, quando a densidade óptica celular diminuiu de forma significativa (p< 0.05; Friedmann pósteste Dunn). No ensaio de adesão celular, pode-se observar que a adição de rhPDGFBB aumentou significativamente o número de células aderidas aos fragmentos dentários (p< 0.05; teste t não pareado com correção Welch), com alteração da morfologia celular. Esses resultados sugerem que as células GO tem características compatíveis com linhagem de células osteoblásticas, de fenótipo mais diferenciado após a 12a passagem. A adição de rhPDGF-BB (300ng/ml) resulta em aumento da taxa de proliferação das células GO e do número de células aderidas a fragmentos radiculares, indicando que, nesta concentração, o fator de crescimento é citocompatível, favorecendo a proliferação e adesão celular.(AU)


The goal of this study was to investigate the effects of recombinant human platelet derived growth factor (rhPDGF-BB) at the concentration of 300ng/ml in the proliferation and adhesion of human bone granulation cells to periodontally diseased root fragments. At the first stage of the study, the granulation tissue existent in healing sockets (21 days after its creation) was collected from two systemically healthy nonsmoking adults to the establishment of primary culture. The in vitro properties of bone granulation (BG) cell lineage were characterized by cell viability, MTT, alkaline phosphatase activity and mineralization assays. The effects of culture medium (control) and rhPGDF-BB 300ng/ml (test) in the proliferation and adhesion of BG cells were investigated. The rate of BG cells proliferation was investigated by the number of viable cells present at 1, 3, 5 and 7 days after platting. Thirty root fragments were obtained from teeth extracted for periodontal reasons. Root fragments were scaled and root planed, conditioned with EDTA 24% for 3 minutes, rinsed in saline solution, air-dryed and positioned in 24-well plates. Each fragment was seeded with 104 BG cells, fixated after 24 hours and prepared for analysis in SEM. The number of cells adhered to the fragments was analysed in photomicrographies. BG cells growth pattern was compatible with osteogenic cell lineage, showing modification with the increasing number of cell passage. GO cells expressed alkaline phosphatase activity in conventional and osteogenic culture medium, with maximum peak at 7 days, as well as mineralization activity stimulated or not by osteogenic or non-osteogenic culture medium, with maximum peak at 21 days. The analysis by flow cytometer showed that BG cells have not expressed CD105 and CD106 at the 14th passage, indicating its advanced cell differentiation. The addition of rhPDGF-BB resulted in modification of proliferation rate, with maximum peak observed at 7 days, significantly different from 1-, 3- and 5-day periods (p< 0.005; ANOVA post hoc Tukey). MTT assay showed greater cell viability after 48 hours than after 24 and 72 hours, when optical density has significantly diminished (p< 0.05; Friedmann post hoc Dunn). At cell adhesion assay, it could be observed that the adhesion of rhPDGF-BB has significantly increased the number of cells adhered to root fragments (p< 0.05; unpaired t test with Welchs correction), and alterations in cell morphology. These results suggest that BG cells present in vitro characteristics compatible with osteoblastic cell lineages, with a more differentiated phenotype after the 12th passage. The addition of rhPDGF-BB (300 ng/ml) results in increase of the rate of BG cell proliferation and in the number of cells adhered to root fragments, indicating that, at this concentration, the growth factor is compatible with BG cells and favors cells proliferation and adhesion.(AU)


Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adesão Celular/efeitos dos fármacos , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Tecido de Granulação/citologia , Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas/farmacologia , Raiz Dentária/citologia , Alvéolo Dental/citologia , Análise de Variância , Regeneração Óssea/efeitos dos fármacos , Contagem de Células , Células Cultivadas , Citometria de Fluxo , Imuno-Histoquímica , Microscopia Eletrônica de Varredura , Reprodutibilidade dos Testes , Estatísticas não Paramétricas
14.
Rev. Salusvita (Online) ; 36(4): 1169-1182, 2017.
Artigo em Português | LILACS | ID: biblio-1022172

RESUMO

Introdução: uma variedade de estudos vem demonstrando que o laser de baixa potência estimula a osteogênese. Os mecanismos propostos para o efeito bioestimulador do laser envolvem aumento da síntese de ATP e formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) pelas mitocôndrias. Estas EROs, incluindo peróxido de hidrogênio, atuam na sinalização celular e influenciam a regulação da expressão gênica, conduzindo a respostas celulares horas ou até mesmo dias após a irradiação. As Peroxirredoxinas (Prxs) constituem uma família de enzimas abundantes capazes de decompor peróxido de hidrogênio. Objetivo: foi realizada uma revisão de literatura acerca dos efeitos bioestimulantes do laser de baixa potência sobre o extresse oxidativo durante o processo de cicatrização. Material e Métodos: foi realizada uma busca nas bases de dados Pubmed e Scielo nos últimos anos, seguindo critérios de inclusão e exclusão pré-determinados, utilizando os termos peroxirredoxina, laser de baixa potência e osteoblastos. Resultados: foram identificados cinquenta artigos com texto completo que se enquadravam nos critérios de inclusão e exclusão. Quanto aos tipos de Peroxirredoxinas, se destacaram as Prxs I e IV. Conclusão: diante das informações colhidas na literatura, concluímos que o mecanismos de ação do laser, induz a formação de EROs, e ainda ressaltamos a importância do estabelecimento de parâmetros seguros na aplicação do laser para que os efeitos desejados, de bioestimulação, sejam alcançados e que sejam evitados os efeitos tóxicos.


Introduction: a variety of studies has shown that low-power laser stimulates osteogenesis. The mechanisms proposed for the biostimulating effect of the laser involve increased ATP synthesis and formation of reactive oxygen species (ROS) by mitochondria. These EROs, including hydrogen peroxide, act on cell signaling and influence the regulation of gene expression, leading to cellular responses at hours or even days after irradiation. Peroxiredoxins (Prxs) constitute a family of abundant enzymes capable of breaking down hydrogen peroxide. Objective: a literature review was carried out on the biostimulating effects of low power laser on oxidative stress during the cicatrization process. Material and Methods: a search of the PubMed and Scielo databases was carried out in recent years, following inclusion and exclusion criteria, using as descriptors peroxirredoxin, low power laser and osteoblasts. Results: fifty full-text articles were identified that fit the inclusion and exclusion criteria. As for the types of Peroxirredoxins, Prxs I and IV were highlighted. Conclusion: In light of the information gathered in the literature, we conclude that the mechanisms of action of the laser induce the formation of EROs, and we also stress the importance of establishing safe parameters in the laser application so that the desired effects of biostimulation are achieved and that toxic effects are avoided.


Assuntos
Peroxirredoxinas , Osteoblastos , Terapia com Luz de Baixa Intensidade
15.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-18682

RESUMO

ABSTRACT The objective was to evaluate the in vitro effect of prolactin in osteogenic potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) in female rats. ADSCs were cultured in osteogenic medium with and without the addition of prolactin and distributed into three groups: 1) ADSCs (control), 2) ADSCs with addition of 100ng/mL of prolactin and 3) ADSCs with addition of 300ng/mL of prolactin. At 21 days of differentiation, the tests of MTT conversion into formazan crystals, percentage of mineralized nodules and cells per field and quantification of genic transcript for alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I by real-time RT-PCR were made. The addition of prolactin reduced the conversion of MTT in group 3 and increased the percentage of cells per field in the groups 2 and 3, however without significantly increasing the percentage of mineralized nodules and the expression of alkaline phosphatase, osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, BMP-2 and collagen I. In conclusion, the addition of prolactin in concentrations of 100ng/mL and 300ng/mL does not change the osteogenic differentiation to the ADSCs of female rats despite increase in the cellularity of the culture.


RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito in vitro da prolactina sobre o potencial osteogênico de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) em ratas. CTM-TA foram cultivadas em meio osteogênico com e sem adição de prolactina e distribuídas em três grupos: 1) CTM-TA (controle), 2) CM-TA com adição de 100ng/mL de prolactina e 3) CTM-TA com adição de 300ng/mL de prolactina. Aos 21 dias de diferenciação, foram realizados os testes de conversão do MTT em cristais de formazan, porcentagem de nódulos mineralizados e células por campo e quantificação dos transcritos gênicos para fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. A adição de prolactina reduziu a conversão do MTT no grupo 3 e aumentou a porcentagem de células por campo nos grupos 2 e 3, sem alterar significativamente a porcentagem de nódulos mineralizados e a expressão de fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina, sialoproteína óssea, BMP-2 e colágeno I. Conclui-se que a adição de prolactina nas concentrações de 100ng/mL e 300ng/mL não altera a diferenciação osteogênica das CTM-TA de ratas, apesar do aumento de celularidade da cultura.

16.
Acta bioquím. clín. latinoam ; 50(3): 423-427, set. 2016.
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: biblio-837619

RESUMO

Por muchos años los osteocitos han sido las células óseas "olvidadas" y consideradas espectadores inactivos enterrados en la matriz ósea. Hoy en día se sabe que los osteocitos detectan y responden a estímulos mecánicos y hormonales para coordinar tanto la resorción como la formación ósea. Actualmente se considera que los osteocitos proveen la mayoría de las moléculas que regulan la actividad de los osteoclastos y de los osteoblastos, como RANKL y esclerostina, ya que manipulaciones genéticas y famacológicas de cualquiera de estas dos moléculas afectan marcadamente la homeostasis ósea. Este artículo resume hallazgos recientes que delinean los mecanismos por los cuales los osteocitos regulan el número y actividad de los osteoblastos afectando de esta manera la formación ósea.


For many years, osteocytes have been the forgotten bone cells and considered as inactive spectators buried in the bone matrix. We now know that osteocytes detect and respond to mechanical and hormonal stimuli to coordinate bone resorption and bone formation. Osteocytes are currently considered a major source of molecules that regulate the activity of osteoclasts and osteoblasts, such as RANKL and sclerostin; and genetic and pharmacological manipulations of either molecule markedly affect bone homeostasis. This article summarizes recent findings demonstrating the mechanisms by which osteocytes regulate the number and activity of osteoblasts and thus affect bone formation.


Durante muitos anos, os osteócitos têm sido células ósseas "esquecidas" e consideradas como espectadores inativos enterrados na matriz óssea. Hoje sabemos que os osteócitos são capazes de detectar e responder a estímulos mecânicos e hormonais para coordenar tanto a reabsorção quanto a formação óssea. Os osteócitos são considerados atualmente como aquelesque fornecema maioria das moléculas que regulam a atividade dos osteoclastos e dos osteoblastos, tais como RANKL e a esclerostina,visto que manipulações genéticas e farmacológicas de qualquer uma destas moléculas afetam consideravelmente a homeostase óssea. Este artigo resume as recentes descobertas que demarcam os mecanismos pelos quais os osteócitos regulam o número e atividade dos osteoblastos, afetando assim a formação óssea.


Assuntos
Camundongos , Remodelação Óssea , Osteoblastos , Osteócitos
17.
Araçatuba; s.n; 2016. 50 p. tab, graf, ilus.
Tese em Inglês, Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-881468

RESUMO

Proposição: Este estudo teve como objetivo avaliar a modulação dos miRNAs que afetam o potencial osteogênico de CTMs em diferentes topografias de superfície de discos de vidro. Material e Métodos: Células tronco mesenquimais humanas foram plaqueadas nas diferentes superfícies e comparadas após 3, 7 e 14 dias para atividade de fosfatase alcalina, expressão de genes (Osteocalcina, Osteopontina, Sialo Proteína Óssea, Osterix, Runx2, BMP2 e ALP) e expressão de miRNAs. Microscopia eletrônica de varredura das superfícies com células foram obtidas para avaliação de adesão celular. Resultados: Atividade de fosfatase alcalina nas diferentes superfícies foi significantemente maior na superfície com nanotopografia. Do mesmo modo, a expressão de genes relacionados com osteoblastos foi mais elevada na superfície nano. Com 14 dias foi observado um aumento de 3.5 e 9 vezes para os genes Runx2 e Osterix, respectivamente. O gene da BMP2 e ALP também apresentou um aumento de 4 e 7 vezes comparado ao controle. Utilizando a tecnologia de sequenciamento de RNA (RNA-Seq) onde todos os RNAs existentes foram sequenciados, um total de 123 miRNAs com diferença de expressão foram encontrados comparando a superfície controle (dia 7) com a superfície nano (dia 14). 48 miRNAs apresentaram uma redução na expressão e 75 apresentaram um aumento de expressão. Alguns destes apresentaram marcadores para genes osteogênicos já identificados, tais como hsa-miR-135b-5p marcador para OCN, BSP, Runx2, CO15A1 e OSX, hsa-miR-122-5p marcador para OPN, hsa-miR-196a-5p marcador para BMP4, hsa-miR-26b-5p marcador para BMP2 e hsa-miR-148b-3p marcador para OPN. Conclusão: As superfícies com nanotopografia tem o potencial de melhorar a resposta de osseointegração de maneira a reduzir o tempo de osseointegração e também aumentar a produção de tecido ósseo ao redor dos implantes favorecendo assim áreas de qualidade óssea baixa. A utilização de miRNAs para alterar a resposta de diferenciação pode também ajudar a controlar o processo de osseointegração(AU)


Purpose: This study aimed to evaluate the modulation of miRNAs that affect the osteogenic potential of MSCs in different surface topographies of glass disks. Material and Methods: Human mesenchymal stem cells (hMSCs) were plated on different surfaces of glass disks and compared at 3,7 and 14 days for alkaline phosphatase (ALP) activity, expression of genes (Osteocalcin, Osteopontin, Bone Sialo Protein, Osterix, Runx2, BMP2 and ALP) and expression of miRNAs. Scanning electron microscopy of surfaces with cells were obtained to analyse the attachment of cells. Results: ALP activity on different surfaces was significantly greater in the nanotopography surface. At day 14 there was a 3.5-fold and a 9-fold increase for Runx2 and Osterix gene, respectively. BMP2 and ALP also increased by 4- and 7-fold compared to control. Using RNA sequencing technology (RNA-Seq) a total of 123 miRNAs were found differently expressed comparing control (day 7) to nano surface (day 14). 48 miRNAs were downregulated and 75 were upregulated. Some of them regulated osteogenic genes such as hsa-miR-135b-5p that targets OCN, BSP, RUNX2, CO15A1 and OSX, hsamiR-122-5p wich targets OPN, hsa-miR-196a-5p targets BMP4, hsa-miR-26b-5p that targets BMP2 and hsa-miR-148b-3p that targets OPN. Conclusion: Surfaces with nanotopography have the potential to improve osseointegration response in order to reduce the time of osseointegration and also increase the production of bone tissue around the implants improving low bone quality areas. The use of miRNAs to affect differentiation response may also help control the osseointegration process(AU)


Assuntos
MicroRNAs , Osteoblastos , Materiais Biocompatíveis , Biologia Molecular , Osseointegração , Propriedades de Superfície
18.
Rev. bras. odontol ; 72(1/2): 92-95, Jan.-Jun. 2015. ilus
Artigo em Português | LILACS-Express | LILACS | ID: lil-792066

RESUMO

A evolução do projeto dos implantes osseointegráveis é resultado do desenvolvimento de diferentes tipos de estruturas em sua superfície. No entanto, ainda existe a necessidade de estudos para definir o tipo de superfície ideal. Esse trabalho discute métodos de avaliação da superfície de implantes que mostram o potencial de determinadas superfícies para induzir mineralização óssea in vitro, partir do uso de células mesenquimais progenitoras. Foram realizadas análises comparativas entre a topografia de implantes com e sem rugosidades nanométricas e o tipo de interação entre pré-osteoblastos semeados diretamente nesses implantes. Características distintas foram observadas em cada superfície.


Improvements in dental implants structure is the result of development of different types of geometrically intelligent surfaces, provided by the emergence of companies interested in innovation of these materials, however, there is still a need for studies to define the type of ideal surface. This work addresses an unprecedented discussion regarding implant surface evaluation methods, able to show the potential of certain areas to induce bone mineralization in vitro. From the use of mesenchymal progenitor cells, which have the capacity to respond to stimuli surface, comparative tests were performed between the topography implants with and without nano-roughness and the type of functional interaction between pre-osteoblasts seeded directly into these implants. Different characteristics of coating cells and mineralization niches on different surfaces were found.

19.
RGO (Porto Alegre) ; 63(2): 161-168, Apr.-June 2015. ilus
Artigo em Inglês | LILACS-Express | LILACS | ID: lil-755121

RESUMO

OBJECTIVE:

To evaluate the action of risedronate and cobalamin, and effects when associated, when administered osteoblastic cells.

METHODS:

The MC3T3 cells were cultivate in the media α-MEM and α-MEM supplemented with mineralizing factors, ascorbic acid and disodium α-glyicerophosphate, and treated with risedronate, cobalamin, and risedronate associated with cobalamin in a concentration of 10-3M. The cell proliferation and formation of calcium and phosphate nodules were evaluated at 24 hours, 48 hours, 72 hours, 5 days and 7 days via a Neubauer Chamer count, Alizarin and the von Kossa reaction.

RESULTS:

The results showed that the growth curve for cell proliferation and the formation of mineral nodules was similar for both cultures analyzed.

CONCLUSION:

The conclusion was reached that using risedronate, cobalamin and both drugs in combination on osteoblastic cell cultures does not cause alterations to their growth or in the formation of calcium and phosphate nodules.

.

OBJETIVO

Avaliar a ação do risedronato e da cobalamina, e seus efeitos quando associados, em células osteoblásticas

MÉTODO

Células MC3T3 foram cultivadas em meio α-MEM e α-MEM suplementado com fatores mineralizantes, ácido ascórbico e α-glicerofosfato dissódico, e tratadas com: risedronato, cobalamina, e risedronato associado à cobalamina na concentração de 10-3M. A proliferação celular e formação de nódulos de cálcio e fosfato foram avaliados após 24 horas, 48 horas, 72 horas, 5 dias e 7 dias, através de contagem em Câmara de Neubauer, vermelho de Alizarina e Reação de von Kossa

RESULTADOS

Os resultados mostraram que não houve diferenças significativas na curva de crescimento e formação de nódulos minerais entre as culturas analisadas

CONCLUSÃO

Concluiu-se que a utilização do risedronato, da cobalamina e associação de ambas em cultura de células osteoblásticas, não provocaram alterações no crescimento e formação de nódulos de cálcio e fosfato

.

20.
São Paulo; s.n; s.n; fev. 2015. 117 p. tab, graf, ilus.
Tese em Português | LILACS | ID: biblio-836744

RESUMO

As tiazolidinodionas (TZDs) são sensibilizadores de insulina utilizados no tratamento do diabetes mellitus tipo 2. Contudo, apesar dos efeitos benéficos sobre a glicemia, importantes efeitos adversos incluindo perda óssea e aumento de adiposidade são relatados com o uso clínico das TZDs. Assim, é necessário o desenvolvimento de novos derivados de TZDs com potenciais efeitos benéficos sobre a hiperglicemia e menos efeitos adversos. Neste estudo, investigamos os efeitos de 5 novos derivados de TZDs (LYSO-7, GQ-89, GQ-150, GQ-177 e SF-3) sobre a diferenciação celular de pré-osteoblastos murinos MC3T3-E1, pré-adipócitos murinos 3T3-L1 e pré-adipócitos SGBS de linhagem humana. Seus potenciais efeitos sobre a utilização de glicose, a produção de adipocinas e mediadores pró-inflamatórios também foram avaliados, utilizando linhagens murinas e humanas de adipócitos, e macrófagos THP-1 de linhagem humana. O principal achado de nosso estudo foi que os novos derivados de TZDs estimulam a utilização celular de glicose, porém não alteram o processo de diferenciação celular de pré-osteoblastos e pré-adipócitos, quando comparados com a TZD clássica Rosiglitazona. Conforme esperado, o tratamento com Rosiglitazona na concentração de 5 µM inibiu a osteogênese de pré-osteoblastos murinos MC3T3-E1. No entanto, o tratamento com 2 novos derivados de TZDs (GQ-89 e GQ-177) na mesma concentração não afetou a diferenciação celular, sendo possível observar níveis de mineralização de matriz extracelular similares aos do grupo controle. Além disso, enquanto a GQ-89 estimulou a atividade da fosfatase alcalina, a GQ-177 não modulou sua atividade enzimática e induziu a expressão gênica de osteocalcina. Contudo, ambos inibiram a expressão de Runx2 e colágeno. Por sua vez, quando os efeitos foram avaliados sobre a diferenciação de adipócitos, foi possível observar que ao contrário do efeito pró-adipogênico constatado com a Rosiglitazona na concentração de 1 µM, as TZDs GQ-150, GQ-177, LYSO-7 e SF-3 foram incapazes de induzir o acúmulo lipídico em pré-adipócitos murinos e humanos. Além disso, a GQ-150 inibiu a expressão gênica de C/EBPα, assim como a expressão gênica e os níveis protéicos de CD36, enquanto que a SF-3 estimulou a expressão gênica de C/EBPα e de FABP4 e diminuiu a expressão gênica e os níveis protéicos de CD36, os quais não foram modificados pela LYSO-7 em pré-adipócitos murinos 3T3-L1. No entanto, em pré-adipócitos SGBS de linhagem humana, nenhum efeito sobre os marcadores de fenótipo adipogênico C/EBPα e FABP4 foi observado com os novos derivados de TZDs. Ademais, os novos derivados de TZDs não interferiram na via de sinalização de Wnt, não apresentaram qualquer efeito sobre a expressão de adipocinas (adiponectina, resistina e leptina) e mediadores pró-inflamatórios (IL-6, CCL2/MCP-1, TNF-α e JNK), bem como não ativaram o fator de transcrição PPARγ no ensaio de gene repórter. Por sua vez, a LYSO-7, GQ-150 e SF-3 aumentaram o consumo de glicose em presença de insulina em adipócitos 3T3-L1 e modificaram a atividade de enzimas mitocondriais em adipócitos SGBS e macrófagos THP-1. Entretanto, o efeito sensibilizador de insulina foi confirmado somente com a GQ-177 pelo aumento da captação de glicose e somente a LYSO-7 e a SF-3 foram capazes de inibir o consumo de oxigênio e modificar a taxa de glicólise em macrófagos, sugerindo que também poderiam alterar os níveis de ATP/ADP. Considerando que baixos níveis de ATP estimulam a via de sinalização de AMPK, essa via também foi investigada em nosso estudo. Entretanto, os resultados sobre a ativação de AMPK foram inconclusivos. Desse modo, nossos resultados apontam que os novos derivados de TZDs não atuam como ligantes de PPARγ, apresentam atividade sensibilizadora de insulina in vitro, e que exercem menores efeitos antiosteoblásticos e adipogênicos quando comparados com a Rosiglitazona. Mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos responsáveis por esses efeitos, bem como para estabelecer se os novos derivados de TZDs são mais seguros in vivo, com relação ao risco de fraturas ósseas e ganho de massa adiposa


Thiazolidinediones (TZDs) are insulin sensitizers used in the treatment of type 2 diabetes mellitus. However, despite the beneficial effects on blood glucose, significant adverse effects including bone loss and increased adiposity are reported with the clinical use of TZDs. Thus, it is necessary to develop new derivatives of TZDs with potential beneficial effects on hyperglycemia and fewer adverse effects. In this study, we investigated the effects of 5 new derivatives of TZDs (LYSO-7, GQ-89, GQ-150, GQ-177 e SF-3) on cellular differentiation in murine MC3T3-E1 preosteoblasts, murine 3T3-L1 preadipocytes, and SGBS preadipocytes from human lineage. Potential effects on glucose consumption, adipokines, and pro-inflammatory mediators were also assessed using murine and human strains of adipocytes, and macrophages from human THP-1 lineage. The main finding of this study was that new derivatives of TZDs stimulate glucose consumption, but do not change the cell differentiation process of preosteoblasts and preadipocytes compared to classical TZD Rosiglitazone. As expected, the treatmet with Rosiglitazone, at 5µM, inhibited the osteogenesis in murine MC3T3-E1 preosteoblasts. However, the treatment with 2 new derivatives of TZDs (GQ-89 and GQ-177) at the same concentration did not affect cell differentiation, and levels of mineralization of the extracellular matrix similar to the control group were observed. In addition, whereas the GQ-89 stimulated the activity of alkaline phosphatase, GQ-177 does not modulate its enzymatic activity and induced gene expression of osteocalcin. However, both of them inhibit the expression of Runx2 and collagen. In turn, when the effects were assessed on the adipocyte differentiation, unlike the proadipogenic effect observed with Rosiglitazone at a concentration of 1 µM, the new TZDs GQ-150, GQ-177, LYSO-7 and SF-3 were unable to induce lipid accumulation in human and murine preadipocytes. In addition, GQ-150 inhibited the gene expression of C/EBPα , as well as the gene expression and protein levels of CD36, whereas SF-3 stimulated the gene expression of C/EBPα and FABP4 and decreased gene expression and protein levels of CD36, which was not modified by LYSO-7 on murine 3T3- L1 preadipocytes. However, no effect on markers of adipogenic phenotype C/EBPα and FABP4 has been observed with the novel derivatives of TZDs in human SGBS preadipocytes. Furthermore, the new derivatives of TZDs do not interfere with the Wnt signaling pathway, showed no effect on the adipokines expression (adiponectin, resistin and leptin) and proinflammatory mediators (IL-6, CCL2 / MCP-1, TNF α and JNK) and did not activate the transcription factor PPARγ in the gene reporter assay. In turn, LYSO-7, GQ-150, and SF-3 increased glucose consumption in the presence of insulin in 3T3-L1 adipocytes and modified the activity of mitochondrial enzymes in SGBS adipocytes and THP-1 macrophages. However, the effect on insulin sensitization was confirmed only to GQ-177 that increased glucose uptake and just LYSO-7 and SF-3 were able to inhibit oxygen consumption and modify the rate of glycolysis in macrophages, suggesting that they could also alter the levels of ATP/ADP. Since low levels of ATP could stimulate AMPK pathway, this signaling pathway was also investigated in our study. However, the results on the AMPK activation were inconclusive. Thus, our results demonstrate that the new derivatives of TZDs do not act as PPARγ ligands, present insulin sensitizing activity in vitro, and display minor antiosteoblastic and adipogenic effects when compared to Rosiglitazone. More studies are needed to elucidate the exact mechanisms responsible for these effects, as well as to establish whether the safety of the new TZDs with respect to the risk of bone fractures and body mass gain using in vivo models


Assuntos
Adipócitos/efeitos dos fármacos , Osteoblastos/efeitos dos fármacos , Tiazolidinedionas/análise , Bioquímica/classificação , Diferenciação Celular , Diabetes Mellitus/diagnóstico , Hipoglicemiantes/classificação , Osteoblastos/classificação
SELEÇÃO DE REFERÊNCIAS
DETALHE DA PESQUISA