Isolamento e identificação de Coccidioides immitis de amostras de solo relacionadas a surtos de Coccidioidomicose / Isolation and identification of Coccidioides immitis from soil samples related to outbreaks of coccidioidomycosis

RESUMO

A coccidioidomicose (CM) é micose sistêmica endêmica no semi-árido do nordeste brasileiro causada pelo fungo dimórfico geofílico Coccidioides posadasii [=C.immitis (non-CA)].No Brasil a principal característica epidemiológica relacionada a surtos da CM aguda é o distúrbio ambiental provocado por caçadores de tatus que, ao desentocarem o animal de seu habitat natural, revolvem solo contaminado e se infectam ao inalar propágulos (artroconídios) do fungo dispersos na poeira do ar, desencadeando o processo de infecção e doença.O presente trabalho teve como objetivos(i)Isolar e identificar por metodologias clássicas agentes de micoses sistêmicas em amostras ambientais relacionadas a surtos de CM;(ii) Avaliar a eficiência de protocolos para extração de DNA a partir das amostras ambientais utilizando duas metodologias distintasa)criofratura com nitrogênio líquido e b)kit de extração comercial Fast DNA® SPIN® Kit For Soil Q-BIOgene;(iii)Desenvolver iniciadores específicos para a detecção de C.posadasii utilizando recursos de bioinformática;(iv)Avaliar e validar os iniciadores específicos,utilizando-os na detecção de C. posadasii em DNAs de amostras de solo.Foram analisadas por estas metodologias amostras ambientais de dois sítios suspeitos de contaminação por C.posadasii.De 10 amostras de solo coletadas em Elesbão Veloso,3(30 por cento) foram positivas para C.posadasii por inoculação animal,2(20 por cento)foram positivas pela PCR direta e 10 (100 por cento) foram positivas no rastreamento com a técnica de PCR semi-nested. De 23 amostras de solo coletadas em Caridade do Piauí,3(13,3 por cento) foram positivas para C. posadasii por inoculação animal,6(42,8 por cento) de 14 amostras foram positivas pela PCR direta e todas estas 14 amostras (100 por cento) foram positivas no rastreamento com a PCR semi-nested. De 23 amostras de solo coletadas em Caridade do Piauí,3(13,3 por cento) foram positicas para C. immitis non-CA por inoculação animal,6 (42,8 por cento) de amostra...