Desenvolvimento de um método de diagnóstico molecular para o câncer gástrico baseado na análise do perfil da expressão gência através da metodologia de cDNA array / Development of a molecular diagnosis tool for gastric cancer based on gene expression profile using the cDNA array methodology

RESUMO

O estudo do Câncer gástrico é de grande importância tendo em vista a sua alta taxa de incidência e mortalidade em todo o mundo. As estimativas do Instituto nacional do Câncer (INCA) para 1999 mostram que o câncer de estômago provocou o maior número de óbitos por câncer no Brasil. Hoje o maior avanço no entendimento do câncer gástrico advêm de estados relacionando o processo de oncogêneses com a infecção por H. pilori. O tratamento da infecção com antibióticos levou a uma redução significativa na incidência de câncer gástrico em países desenvolvidos, como o Japão e os EUA. Em países em desenvolvimento, como o Brasil, essa queda foi menos significativa devido a uma grande incidência de casos de re-infecção. A identificação de genes diferencialmente expressos no tecido gástrico normal e tumoral permitirá a descoberta de marcadores genéticos indicadores da evolução do processo de transformação celular. Considerando que as alterações morfológicas, hoje a base do diagnóstico, são consequentes de alterações moleculares, os métodos de diagnóstico baseados no perfil de expressão gênica poderão ser capazes de identificar lesões pré-malignas. Além disso, a determinação do perfil molecular de um tumor poderá determinar um regime de tratamento de forma tumor-específica... Identificamos, duas proteínas ribossomais denominadas de L26 e L27. A expressão de L26 foi encontrada em amostra tumoral e é um importante marcador para a diferenciação entre um adenocarcinoma pouco diferenciado e um linfoma gástrico. Encontramos uma sequência homóloga ao gene da Mucina 4 (MUC4). Sabe-se que há um aumento na expressão de MUC4 em Câncer de estômago e as mucinas sintetizadas pelas células malignas podem contribuir para a capacidade de invasão das células tumorais, favorecendo o surgimento de metástases... A partir deste estudo, poderemos identificar os genes relacionados com o desenvolvimento do câncer gástrico e viabilizar um diagnóstico molecular...(AU)

ABSTRACT

Gastric cancer is one of the leading causes of cancer-related death in Brazil and in the world. High frequency of gastric cancer-related death is mainly due to late-stage diagnosis. Hence, new tools aimed to early diagnostic would have a positive impact in the outcome of the disease. Using cDNA arrays, we analised the expression proflle of normal gastric mucosa (N), gastritis (G), intestinal metaplasia (M) and gastric tumor (I). Based on the differentially expressed genes, we developed diagnosis tools for identification of lesions in gastric mucosa. In a ftrst step, we used cDNA arrays having around 4,500 elements to compare the expression proflle of six samples of normal gastric mucosa and six samples of tumor gastric mucosa. Eighty differentially expressed cDNAs were identified and, using Self Organizing Map (SOM), their expression proflle allowed the precise separation of the normal from the tumor sample groups. In a second step, the expression pro file o f 3 7 6 distinct genes, derived from the ftrst analysis and plus a set of known altered genes in human cancer according to the literature, were analised in 99 gastric fragments represented by N (n=28), G (n=21), M (n=22) and T (n=28). Pair wise comparisons between these samples allowed the identification of 42 differentially expressed genes with p<0.0009 in a Wilcoxon test. Using the clustering algorithm k-means, the expression profile of 18 genes allowed the clustering of the majority of N and G samples in a distinct group, the majority of M and T samples in two aditional groups and fourth heterogeneous group. We then applied Fisher's linear discriminat to identify trios of genes that could be used to build classifiers for class distinction. A lager number of classifiers could distinguish between NxT whereas, for the distinction of GxT and MxT, fewer classifiers were identified.Importandy, it was possible identify samples of intestinal metaplasia whose expression pattem resembled that of an adenocarcinoma and can now be used for follow-up of patients in order to determine their potencial as prognostic test for malignant transformation (AU)