Resumo
O consumo de alimentos contaminados gera grande preocupação e alerta para os setores de Saúde Pública. Por isso, a busca por análises que permitam a rápida identificação de micro-organismos patogênicos está se tornando cada vez mais necessária para o monitoramento da qualidade de alimentos. Neste contexto, a PCR quantitativa em tempo real (qPCR), e sua variação utilizando o propídio de monoazida (PMA-qPCR), pode ser utilizada como ferramenta para auxiliar na análise do risco microbiológico, pois permite a rápida identificação e quantificação de micro-organismos patogênicos e indicadores de contaminação, tornando-se fundamental para o monitoramento da qualidade de alimentos destinados ao consumo humano. Assim, objetivou-se avaliar a qPCR multiplex para a detecção e quantificação dos patógenos Escherichia coli (E. coli), Staphylococcus aureus (S. aureus), e Salmonella spp. na cadeia produtiva de alimentos de origem animal, e assim validar esta metodologia para a quantificação simultaneamente e imediata destes micro-organismos
The consumption of contaminated food generates great concern and alert for the Public Health sectors. Therefore, the search for analyzes that allow the rapid identification of pathogenic microorganisms is becoming increasingly necessary for monitoring food quality. In this context, quantitative real-time PCR (qPCR), and its variation using monoazide propidium (PMA-qPCR), can be used as a tool to assist in the analysis of microbiological risk, as it allows for the rapid identification and quantification of micropathogenic organisms and contamination indicators, making it essential for monitoring the quality of food intended for human consumption. Thus, the objective was to evaluate the multiplex qPCR for the detection and quantification of the pathogens Escherichia coli (E. coli), Staphylococcus aureus (S. aureus), and Salmonella spp. in the animal food production chain, and thus validate this methodology for the simultaneous and immediate quantification of these microorganisms.
Resumo
O consumo de alimentos contaminados gera grande preocupação e alerta para os setores de saúde pública. Por isso, a busca por análises que permitam a rápida identificação de micro-organismos patogênicos está se tornando cada vez mais necessária para o monitoramento da qualidade de alimentos destinados ao consumo humano. Neste contexto, a reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) pode ser utilizada como análise alternativa dos alimentos, pois permite quantificar o número de cópias de genes alvos de micro-organismos de forma rápida e sensível. O objetivo deste trabalho foi padronizar a qPCR multiplex para a quantificação simultânea dos fragmentos de genes específicos de Salmonella spp. (Ssf), Escherichia coli (phoA) e Staphylococcus aureus (nuc) e, assim, propor a utilização desta técnica para a análise de alimentos nos setores de controle de qualidade de indústrias alimentícias. As curvas padrão apresentaram R2 > 0,99, eficiência entre 99 a 110% e a reprodutibilidade inter e intra-experimentos apresentou coeficientes de variação baixos em todos os ensaios. A metodologia foi aplicada em amostras de ostras e a sensibilidade e especificidade do método multiplex foram comparadas com ensaios uniplex. Nesta análise, a qPCR multiplex apresentou uma sensibilidade maior que 30%, especificidade maior que 75% e acurácia maior que 50% na análise combinada para a detecção dos três patógenos simultaneamente. Assim, sugerimos que o método descrito neste estudo possa ser utilizado como uma técnica de triagem rápida para a análise da qualidade microbiológica de alimentos
Consumption of contaminated food is a major concern and Sectors of public health. Therefore, the search for analyzes that allow rapid Identification of pathogenic micro-organisms is becoming increasingly Necessary for the monitoring of the quality of foods for consumption human. In this context, the quantitative real-time polymerase chain reaction (QPCR) can be used as an alternative food analysis because it allows Quantify the number of copies of target genes of microorganisms rapidly and sensitive. The objective of this work was to standardize multiplex qPCR for quantification Fragment of Salmonella spp. (Ssf), Escherichia Coli (phoA) and Staphylococcus aureus (nuc) and thus propose the use of this technique For the analysis of food in the industries quality control sectors Food. The standard curves showed R2> 0.99, efficiency between 99 and 110% and Inter- and intra-experiment reproducibility presented low coefficients of variation In all trials. The methodology was applied to oyster samples and the sensitivity And specificity of the multiplex method were compared with uniplex assays. In this Analysis, multiplex qPCR showed a sensitivity greater than 30%, specificity Greater than 75% and accuracy greater than 50% in the combined analysis for the detection of the three Pathogens simultaneously. Thus, we suggest that the method described in this study Can be used as a rapid screening technique for quality analysis Food microbiology