Molecular detection of Sarcocystis spp. in the breast muscle of captive birds from the southern region of Brazil / Detecção molecular de Sarcocystis spp. no músculo peitoral de aves de cativeiro da região sul do Brasil

Studies on diseases of wild birds are essential in the context of public health, as these animals act as sentinels, allowing information regarding a determined geographic area. In addition, birds are food protein sources for animals, and therefore play an important role in the life cycle of the protozoan Sarcocystis spp. This study aimed to identify the Sarcocystis spp. in breast muscle samples of naturally infected captive birds. The breast muscle of 89 birds were sampled, and the DNA amplified by PCR targeting the 18S ribosomal RNA gene to detect Sarcocystis spp. PCR products were sequenced and 5.61% (5/89) samples showed 100% similarity with Sarcocystis spp. (one Cyanoliseus patagonus, one Psittacula krameri, two Pyrrhura frontalis, and one Ramphastos dicolorus). The large number of naturally infected species analyzed by molecular methods allowed the detection of Sarcocystis spp. in different bird species, corroborating the epidemiology of Sarcocystis spp.

Estudos sobre doenças de aves silvestres são essenciais no contexto da saúde pública, pois esses animais atuam como sentinelas, permitindo obter informações sobre uma determinada área geográfica. Além disso, as aves são fontes de proteína alimentar para os animais e, portanto, desempenham um papel importante no ciclo de vida do Sarcocystis. Este estudo teve como objetivo identificar Sarcocystis spp. nos músculos do peito de aves de cativeiro naturalmente infectadas. Os músculos do peito de 89 aves foram coletados, e o DNA amplificado pela PCR do gene RNA ribossômico 18S para detecção de Sarcocystis spp. Os produtos da PCR foram sequenciados e 5,61% (5/89) amostras apresentaram 100% de similaridade com o Sarcocystis spp. (um Cyanoliseus patagonus, um Psittacula krameri, dois Pyrrhura frontalis e um Ramphastos dicolorus). O grande número de espécies naturalmente infectadas analisadas por métodos moleculares permitiu a detecção de Sarcocystis spp. em diferentes espécies de aves, corroborando a epidemiologia de Sarcocystis spp.

Molecular detection of protozoa of the Sarcocystidae family in sheep from the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Detecção molecular de protozoários da família Sarcocystidae em ovinos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

Infections caused by protozoa belonging to the Sarcocystidae family have worldwide distribution and are common in ruminants, leading to considerable economic losses. This study evaluates Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections in sheep from Southwest region of Rio Grande do Sul, Brazil. Myocardium samples of 80 sheep raised on extensive system were collected. Tissue cysts were detected by direct examination and presence of infective agents was confirmed by PCR. Macroscopic evaluation did not reveal changes, but direct microscopic examination showed cysts in 76.2% (61/80, 95% CI: 66.9 - 85.9) samples, and all cysts were morphologically similar to those caused by Sarcocystis tenella or Sarcocystis arieticanis. PCR detected Sarcocystis spp. DNA in 21.2% (17/80, CI: 12.3-30.2) of the tested samples and T. gondii DNA in 15% (12/80, CI: 7.2-22.8). Moreover, 6.2% (5/80, CI: 2.1-13.9) samples contained DNA of both protozoan. The presence of N. caninum nucleic acids was not observed in tested samples. However, all PCR-positive samples (23.7%-19/80, CI: 14.4-33.1) were also positive by direct examination (microscopic cysts). Thus, a high occurrence of microscopic tissue cysts was detected in sheep from southwest region of Rio Grande do Sul State. Although PCR did not show good sensitivity to identify the causative agents of these cysts, it revealed the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in ovine cardiac muscle samples. This may predispose the contamination of animals and humans by these protozoa.(AU)

Infecções causadas por protozoários da família Sarcocystidae apresentam distribuição mundial, sendo comuns em ruminantes, responsáveis por causar importantes perdas econômicas. Este estudo avaliou infecções de Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de miocárdio de 80 ovinos criados em sistema extensivo. Cistos teciduais foram detectados por exame direto, com a presença dos agentes confirmada por PCR. A avaliação macroscópica não revelou alterações, porém, no exame microscópico direto, foram verificados cistos em 76,2% (61/80, 95% IC: 66,9-85,9) das amostras, sendo todos morfologicamente semelhantes ao Sarcocystis tenella ou Sarcocystis arieticanis. A PCR detectou DNA de Sarcocystis spp. em 21,2% (17/80, IC: 12,3-30,2) das amostras testadas e DNA de T. gondii em 15% (12/80, IC: 7,2-22,8). Em 6,2% (5/80, IC: 2,1-13,9), foram detectados DNA de ambos os protozoários. Todas as amostras positivas no PCR (23,7%-19/80, IC: 14,4-33,1) também foram positivas no exame direto (cistos microscópicos). Assim, uma alta ocorrência de cistos teciduais microscópicos em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul foi detectada. Apesar de a PCR não ter mostrado uma boa sensibilidade na identificação dos agentes causadores desses cistos, foi possível verificar a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em amostras do músculo cardíaco de ovinos. Dessa maneira, a presença destes protozoários pode predispor a contaminação de humanos e animais.(AU)

Dynamics of Rickettsia parkeri infection in domestic chickens / Dinâmica da infecção por Rickettsia parkeri em galinhas domésticas

The aim of the present study was to investigate experimental infections by Rickettsia parkeri in domestic chickens (Gallus gallus domesticus) and to determine the dynamics of antibody production during acute and chronic infection. The animals (n = 64) were allocated into eight groups as follows: G1, inoculated intramuscularly (IM) with 2.5 × 105 Vero cells (1 mL) infected with R. parkeri; G2, inoculated IM with 5.0 × 105 Vero cells (2 mL) infected with R. parkeri; G3, received 1 mL of the inoculum subcutaneously (SC); G4, received 2 mL of inoculum SC; G5, received 1 mL of the inoculum intraperitoneally (IP); G6, injected with 2 mL of the inoculum IP; G7 and G8, received 1 mL and 2 mL of culture medium IM, respectively (negative control groups). All R. parkeri inocula were viable prior to inoculation in the birds. In order to assess the dynamics of antibody production in acute and chronic infection, sera of chickens were collected 3, 7, 14, and 21 d post infection (PI) and assessed using an immunofluorescence antibody test (IFAT). In addition, PCR (gltA gene) was performed using fragments of spleen and lung from euthanized chickens to detect the replication of R. parkeri in tissues during the experimental period. Animals from the G4 and G3 groups exhibited the highest mean antibody titers, with maximum levels observed at 7 and 14 d PI, respectively. Conversely, G2, G4 and G6 exhibited higher meanantibody titers than G1, G3 and G5, respectively. Antibody titers were dose-dependent. Rickettsial DNAwas not detected in either spleen or lung tissue. The present study demonstrated that birds seroconvertafter being challenged by R. parkeri. However, there was no replication of the agent in the tissues analyzed and rickettsemia was not observed.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a infecção experimental por Rickettsia parkeri em galinhas domésticas (Gallus gallus domesticus) e investigar a dinâmica de anticorpos. Para tanto, foram utilizadas 64 galinhas criadas extensivamente divididas em oito grupos: G1 - inoculado com 2,5 x 105 células Vero (1 ml) infectadas por R. parkeri via intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 células Vero (2 ml) infectadas por R. parkeri via IM; G3 - 1 ml do inóculo via subcutânea (SC); G4 - 2 ml de inóculo via SC; G5 1 ml do inóculo via intraperitoneal (IP); G6 - 2 ml de inóculo via IP, e G7 e G8 - 1 e 2 ml de meio de cultivo de células Vero via IM, respectivamente representando os grupos controles negativos. Ressaltase que todos os inóculos de R. parkeri estavam viáveis no momento da inoculação. Os soros das aves foram coletados aos 3, 7, 14 e 21 dias pós-infecção (PI) e testadas por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para avaliar a dinâmica de anticorpos na infecção aguda e crônica. A identificação da multiplicação de R. parkeri nos tecidos, no mesmo período PI, foi realizada por PCR, para um fragmento do gene gltA, em amostras de baço e pulmão provenientes das galinhas eutanasiadas. As aves do G4 e G3 apresentaram as maiores médias de anticorpos obtendo os níveis mais elevados aos sete e 14 dias PI, respectivamente. G2, G4 e G6 apresentaram médias de anticorpos superiores comparados aos G1, G3 eG5 respectivamente, sendo considerada a infecção dose-dependente. Não foi detectado DNA rickettsial nos tecidos avaliados. No presente trabalho foi possível demonstrar que as aves soroconverteram mediante o desafio da inoculação por R. parkeri, todavia não houve a identificação do agente nos tecidos analisados, bem como a presença de rickettsemia.(AU)

Dynamics of Rickettsia parkeri infection in domestic chickens / Dinâmica da infecção por Rickettsia parkeri em galinhas domésticas

The aim of the present study was to investigate experimental infections by Rickettsia parkeri in domestic chickens (Gallus gallus domesticus) and to determine the dynamics of antibody production during acute and chronic infection. The animals (n = 64) were allocated into eight groups as follows: G1, inoculated intramuscularly (IM) with 2.5 × 105 Vero cells (1 mL) infected with R. parkeri; G2, inoculated IM with 5.0 × 105 Vero cells (2 mL) infected with R. parkeri; G3, received 1 mL of the inoculum subcutaneously (SC); G4, received 2 mL of inoculum SC; G5, received 1 mL of the inoculum intraperitoneally (IP); G6, injected with 2 mL of the inoculum IP; G7 and G8, received 1 mL and 2 mL of culture medium IM, respectively (negative control groups). All R. parkeri inocula were viable prior to inoculation in the birds. In order to assess the dynamics of antibody production in acute and chronic infection, sera of chickens were collected 3, 7, 14, and 21 d post infection (PI) and assessed using an immunofluorescence antibody test (IFAT). In addition, PCR (gltA gene) was performed using fragments of spleen and lung from euthanized chickens to detect the replication of R. parkeri in tissues during the experimental period. Animals from the G4 and G3 groups exhibited the highest mean antibody titers, with maximum levels observed at 7 and 14 d PI, respectively. Conversely, G2, G4 and G6 exhibited higher meanantibody titers than G1, G3 and G5, respectively. Antibody titers were dose-dependent. Rickettsial DNAwas not detected in either spleen or lung tissue. The present study demonstrated that birds seroconvertafter being challenged by R. parkeri. However, there was no replication of the agent in the tissues analyzed and rickettsemia was not observed.

O objetivo deste estudo foi avaliar a infecção experimental por Rickettsia parkeri em galinhas domésticas (Gallus gallus domesticus) e investigar a dinâmica de anticorpos. Para tanto, foram utilizadas 64 galinhas criadas extensivamente divididas em oito grupos: G1 - inoculado com 2,5 x 105 células Vero (1 ml) infectadas por R. parkeri via intramuscular (IM); G2 5,0 x 105 células Vero (2 ml) infectadas por R. parkeri via IM; G3 - 1 ml do inóculo via subcutânea (SC); G4 - 2 ml de inóculo via SC; G5 1 ml do inóculo via intraperitoneal (IP); G6 - 2 ml de inóculo via IP, e G7 e G8 - 1 e 2 ml de meio de cultivo de células Vero via IM, respectivamente representando os grupos controles negativos. Ressaltase que todos os inóculos de R. parkeri estavam viáveis no momento da inoculação. Os soros das aves foram coletados aos 3, 7, 14 e 21 dias pós-infecção (PI) e testadas por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para avaliar a dinâmica de anticorpos na infecção aguda e crônica. A identificação da multiplicação de R. parkeri nos tecidos, no mesmo período PI, foi realizada por PCR, para um fragmento do gene gltA, em amostras de baço e pulmão provenientes das galinhas eutanasiadas. As aves do G4 e G3 apresentaram as maiores médias de anticorpos obtendo os níveis mais elevados aos sete e 14 dias PI, respectivamente. G2, G4 e G6 apresentaram médias de anticorpos superiores comparados aos G1, G3 eG5 respectivamente, sendo considerada a infecção dose-dependente. Não foi detectado DNA rickettsial nos tecidos avaliados. No presente trabalho foi possível demonstrar que as aves soroconverteram mediante o desafio da inoculação por R. parkeri, todavia não houve a identificação do agente nos tecidos analisados, bem como a presença de rickettsemia.