Resumo
This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect
Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos
Resumo
This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect
Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos