Resumo
Objetivou-se avaliar os efeitos de diferentes concentrações de bicarbonato e albumina sérica bovina (BSA) adicionados ao meio de capacitação in vitro sobre a indução da reação acrossômica no sêmen suíno. Oito diferentes tratamentos com diferentes concentrações de bicarbonato (0, 5, 15 e 38 mM) e BSA (0 e 5 mg/ml) foram testados: 1) controle negativo (No BSA / No Bic), o meio básico sem bicarbonato ou BSA; 2) meio básico suplementado apenas com 5 mg / mL de BSA (BSA / No Bic); 3) meio básico suplementado com 5 mM de NaHCO3 e 5 mg / mL de BSA (BSA + 5 mM Bic); 4) meio básico suplementado apenas com 5 mM de NaHCO3 (sem BSA + 5 mM Bic); 5) meio básico suplementado com 5 mM de NaHCO3 e 5 mg / mL de BSA (BSA + 15 mM Bic); 6) meio básico suplementado apenas com 15 mM de NaHCO3 (sem BSA + 15 mM Bic); 7) meio básico suplementado com NaHCO3 38 mM e 5 mg / mL de BSA (BSA + Bic 38 mM); e 8) meio básico suplementado apenas com NaHCO3 38 mM (sem BSA + Bic 38 mM). As células espermáticas foram submetidas aos meios e incubadas a 38,5 C com 5% de CO2 por 5h. A motilidade espermática, integridade de membrana, distúrbio lipídico de membrana, níveis de cálcio intracelular, atividade mitocondrial e níveis de fosforilação de tirosina de GSK3 e DARPP32 foram determinados após 0, 2 e 4 h de incubação e também após 30 e 60 min da adição de progesterona. Os meios sem BSA não se capacitaram, obtendo resultados semelhantes ao meio não capacitante (sem BSA e sem bicarbonato) (P<0,05). Os meios com BSA e bicarbonato a 15 ou 38 mM apresentaram (P<0,05) altos níveis de cálcio (Fluo-3 e Rhod 5), desordem lipídica (M540) e fosforilação de proteínas (GSK3). O meio com BSA e bicarbonato a 15 mM apresentou (P<0,05) maior motilidade e viabilidade que o meio com BSA e bicarbonato a 38 mM. O meio com BSA e sem bicarbonato ou com bicarbonato a 5 mM se capacitaram, porém com menores indices de capacitação que os meios que contiam BSA e bicarbonato a 15 ou 38 mM. Os resultados mostraram que a capacitação in vitro de sêmen suíno está relacionada com a presença de BSA no meio capacitante e a presença do bicarbonato não é um fator limitante para a capacitação. O meio que obteve melhor resultado de capacitação foi o BSA com bicarbonato a 15 mM.
The objective of the present work was to evaluate the effects of different concentrations of bicarbonate and bovine serum albumin (BSA), added to the in vitro capacitation medium, on the induction of the acrosome reaction in boar semen. Eight different treatments with different concentrations of bicarbonate (0, 5, 15 and 38 mM) and BSA (0 and 5 mg / ml) were tested: 1) negative control (No BSA / No Bic), which was the basic medium without bicarbonate or BSA; 2) basic medium supplemented with 5 mg/mL BSA only (BSA / No Bic); 3) basic medium supplemented with 5 mM NaHCO3 and 5 mg/mL BSA (BSA + 5 mM Bic); 4) basic medium supplemented with 5 mM NaHCO3 only (No BSA + 5 mM Bic); 5) basic medium supplemented with 5 mM NaHCO3 and 5 mg/mL BSA (BSA + 15 mM Bic); 6) basic medium supplemented with 15 mM NaHCO3 only (No BSA + 15 mM Bic); 7) basic medium supplemented with 38 mM NaHCO3 and 5 mg/mL BSA (BSA + 38 mM Bic); and 8) basic medium supplemented with 38 mM NaHCO3 only (No BSA + 38 mM Bic). Sperm cells were submitted to the medium and incubated at 38.5 C with 5% of CO2 for 5 h. Sperm motility, membrane integrity, membrane lipid disorder, intracellular calcium levels, mitochondrial activity and tyrosine phosphorylation levels of GSK3 and DARPP32 were determined after 0, 2 and 4 h of incubation and after 30 and 60 min of the addition of progesterone. The medium without BSA did not capacitated, generating similar results to the non-capacitive medium (without BSA and without bicarbonate) (P <0.05). Mediums with BSA and bicarbonate at 15 or 38 mM showed high (P <0.05) levels of calcium (Fluo-3 and Rhod 5), lipid disorder (M540) and protein phosphorylation (GSK3). The medium with BSA and 15 mM bicarbonate presented (P <0.05) greater motility and viability than the medium with BSA and bicarbonate at 38 mM. The medium with BSA and without bicarbonate or with 5 mM bicarbonate, were capacitated, however with lower indices than medium containing BSA and bicarbonate at 15 or 38 mM. The analyzes showed that the in vitro capacitation of boar semen is related to the presence of BSA in the capacitive medium and the presence of bicarbonate is not a limiting factor for the capacitation. The medium that obtained the best qualification result was BSA with bicarbonate at 15 mM.
Resumo
Este estudo foi realizado com o objetivo de verificar a influência da bacteriospermia na qualidade do sêmen suíno fresco ou armazenado a 15 oC por 72 horas Para isso, 26 ejaculados provenientes de 26 reprodutores foram utilizados. Em seguida, os ejaculados foram diluídos em BTS sem antibiótico de forma a obter doses inseminantes contendo três bilhões de Avaliações da qualidade espermática foram realizadas após a diluição e também após 72 horasde armazenamento, assim como a avaliação microbiológica Cada microrganismo identificado foi correlacionado com os parâmetros de qualidade do sêmen pelo teste de correlação de Spearman. No sêmen in natura, foram identificados de um a seis tipos de bactérias, sendo a Staphylococcus spp. (77% das amostras) e Proteus mirabilis (77%) as mais frequentes, seguida da Burkholderia cepacia (35%) e Morganella morganii (31%). No sêmen armazenado por 72 horas, foram identificados de um a cinco tipos de bactérias, sendo a Proteus mirabilis (96% das amostras) a mais frequente, seguido da Morganella morganii (31%) e Staphylococcus spp. (27%). Os valores de UFC/mL total obtidos com o sêmen armazenado foram numericamente superiores aos valores obtidos com o sêmen in natura. No sêmen fresco diluído, a Pseudomonas putida mostrou correlação negativa com a motilidade mas positiva com a viabilidade espermática, enquanto que a Burkholderia cepacia apresentou correlações positivas com a velocidade da célula espermática e integridade acrossomal, mas negativa em relação ao teor de dialdeído malônico no sêmen. No sêmen armazenado, a Proteus mirabilis mostrou correlações negativas com os movimentos espermáticos e positivas com o total de alterações morfológicas, viabilidade espermática e porcentagem de acrossomas íntegros. A pseudomonas putida e a Comamonas testosteroni apresentaram correlações negativas com a motilidade espermática. A Escherichia coli apresentou correlações negativas com a viabilidade espermática e porcentagem de acrossomas íntegros, enquanto que a Acinetobacter baumannii calcoaceticus apresentou correlação positiva com o teor de dialdeído malônico e consumo de glicose pelos espermatozoides. A Morganella morganii apresentou correlação positiva com a viabilidade espermática. Conclui-se que dependendo da espécie de bactéria, a bacteriospermia pode influenciar a qualidade do sêmen suíno fresco ou armazenado por 72 horas a 15 ºC. A B. cepacia e a M. morganii são as bactérias que melhoram a qualidade do sêmen fresco diluído e do sêmen armazenado, respectivamente. A P. putida é a bactéria que causa maiores injúrias no sêmen fresco, enquanto que a P. mirabilis, a P. putida, a C. testosteroni, a E. coli e a A. baumannii as que causam maiores prejuízos ao sêmen armazenado.
This study was conducted with the objective of verifying the influence of bacteriospermia over the quality of porcine semen, fresh or stored at 15oC for 72 hours. To do this, 26 ejaculates originated from 26 reproducers were used. Subsequently, the ejaculates were diluted in BTS with no antibiotics in order to obtain inseminating doses containing three billion spermatozoids per inseminating dose. Spermatic quality evaluations were conducted after dilution and after 72 hours of storage, in addition to seminal microbiological evaluation. Each identified microorganism was correlated with the semen quality parameters by means of the Spearman correlation test. In the in natura semen, we identified from one to six typed of bacteria, being Staphylococcus spp. (77% of the samples) and Proteus mirabilis (77%) the most frequent, followed by Burkholderia capacia (35%) and Morganella morganii (31%). In the semen stored for 72 hours, we identified from one to five types of bacteria, being Proteus mirabilis (96% of the samples) the most frequent, folloed by Morganella morganii (31%) and Staphylococcus spp. (27%). The values for total CFU/mL obtained from the stored semen were numerically superior to those obtained from the in natura semen. In the fresh diluted semen, the Pseudomonas putida showed negative correlation with mobility, and positive correlation with sperm viability, while Burkholderia cepacia presented positive correlation with spermatic cell motility and acrosome integrity, and negative correlation in relation to the content of malonic dialdehyde in the semen. In the stored semen, Proteus mirabilis showed negative correlations with spermatic motility and positive correlations with total morphological changes, sperm viability and percentage of whole acrosomes. Pseudomonas putida and Comamonas testosterone presented negative correlations with spermatic motility. Escherichia coli presented negative correlations with sperm viability and percentage of whole acrosomes, while Acinetobacter baumannii calcoaceticus presented positive correlation with the content of malonic dialdehyde and glucose consumption by the spermatozoa. Morganella morganii presented positive correlation with sperm viability. We conclude that, depending on the species of bacteria, bacteriospermia can influence the quality of porcine semen, fresh or stored for 72 hours at 15oC. B. cepacia and M. morganii improve the quality of diluted fresh semen and of semen stored for 72 hours, respectively. P. putida causes higher damage to fresh semen, while P. mirabilis, P. putida, C. testosterone, E. coli and A. baumannii cause higher damage to stored semen.