Resumo
From a total of 187 fecal samples from children with ages between 0 and 5 years, collected in the Hospital Universitário -USP, Brazil, from 1994 to 1996, 54 (28.9%) were positive for rotavirus. Positive samples were characterized by electropherotyping, subgrouping, G serotype and genotype and P genotype. Rotavirus electropherotypes were characterized in four different long genome patterns (38.9%), one short genome pattern (34.0%) and 18.0% were characterized as an unusual pattern. Subgroup I was found in 38.9% strains, subgroup II in 50.0% and 7.7% was subgroup nonI-nonII. For G serotypes, G2 was found in 59.3%, G1 was identified in 33.3% of strains, two samples showed mixtures of G1+G2 and one sample was G1+G3. Ten samples characterized as serotype G2 showed a long eletropherotype. Genotype G2 was the most frequently and was found in 37 (44.0%) samples (23 samples as a single genotype and 14 as mixtures of genotypes). G1 was found in 15 samples. G3 and G4 was detected mainly in mixtures of genotypes and G5, G6 and G9 were identified only in mixtures. A total of 20 (38.5%) samples were characterized as G genotype mixtures and P mixtures were found in 16 (29.6%) samples. P[4] was found in 55.6% of samples, P[8] in 51.9% and P[6-M37 like] in 22.3% of cases. P[6-Gottfried like] and P[11] were detected only in mixtures. One sample with G6 specificity, mixed with a G2 rotavirus and a P[11] strain, mixed with P[4] and P[8]strain was described for the first time in Latin America.
De um total de 187 amostras fecais de crianças com idades entre 0 e 5 anos, coletadas no Hospital Universitário -USP, Brasil, de 1994 a 1996, 54 (28.9%) foram positivas para rotavírus. As amostras positivas foram caracterizadas quanto ao eletroferótipo, subgrupo, sorotipo G e genotipo G e P. Foram identificados quatro diferentes eletroferótipo longos em 38.9% das amostras, um eletroferótipo curto (34,0%) e 18,0% foram caracterizadas como um eletroferótipo não usual. O subgrupo I foi encontrado em 38,9% amostras, o subgrupo II em 50,0% e nãoI-nãoII em 7,7%. O sorotipo G2 foi encontrado em 59,3% e G1 em 33,3%. Duas amostras apresentaram misturas de G1+G2 e outra amostra G1+G3. Dez amostras caracterizadas como sorotipo G2 mostraram perfil eletroferótico longo. O genotipo G2 foi o mais freqüente, encontrado em 37 amostras (23 como único genotipo e 14 associados a outro genotipo). G1 foi encontrado em 15 amostras; G3 e G4 foram detectados principalmente em misturas e G5, G6 e G9, identificados somente em misturas. Um total de 20 (38,5%) amostras foram identificadas como misturas de genotipo G e foram encontradas 16 (29,6%) amostras com misturas de genotipo P. P[4] foi encontrado em 55,6% das amostras, P[8] em 51,9% e P[6-M37 like], em 5,5% das amostras. P[6-Gottfried like] e P[11] foram detectados somente em misturas. Uma amostra com especificidade G6, associada ao genotipo G2 e outra P[11] misturada com P[4] e de P[8] foram identificadas pela primeira vez na América Latina.
Resumo
Stenotrophomonas maltophilia is a Gram-negative bacillus, which is becoming widely recognized as an important nosocomial pathogen. The main objective of this study was to evaluate the genetic relatedness, by random amplified polymorphic DNA (RAPD) and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of 86 clinical isolates of S. maltophilia (colonization 22, infection 64) obtained from 79 hospitalized patients, from different geographic regions of São Paulo State. The genotypic analysis performed by RAPD and PFGE was used in 24 isolates for genetic identity confirmation. The results were congruent between the two methods but it was not possible to link genetic profiles with the studied variables, clinical state and geographic area, probably due to the great variability among the strains. The analyses by PFGE confirmed identity in 5 pairs of microorganisms and RAPD, in this study, showed to be a useful tool for investigation of diversity leading the identification of 85 genetic profiles. The genetic diversity shown may be due to re-infection by different strains or co-infection by multiple strains which suggests multiple entry sources of the bacterium in the hospital setting or of acquisition by patient. In this setting, colonization, infection and re-infection occur with unknown frequency, raising the need for the establishment of specific control measures.
Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, conhecido como importante patógeno nosocomial. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a relação genética, através da análise randômica do polimorfismo de DNA (RAPD) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), de 86 isolados clínicos de S. maltophilia (22 de colonização, 64 de infecção) obtidos de 79 pacientes hospitalizados em diferentes regiões geográficas do estado de São Paulo. A análise genotípica foi realizada através da técnica RAPD e o PFGE foi usado em 24 isolados para confirmar a identidade genética dos mesmos. Os resultados foram coerentes entre os dois métodos, mas não foi possível correlacionar um perfil genético com as variáveis estudadas, estado clínico e área geográfica, provavelmente pela ampla variabilidade entre as linhagens. A análise por PFGE confirmou a identidade genética em 5 pares de microrganismos e o RAPD, neste estudo, mostrou ser uma ferramenta útil para investigação da diversidade, possibilitando identificar 85 perfis genéticos. A diversidade genética observada através do RAPD pode ser devido à re-infecção por diferentes linhagens ou co-infecção por linhagens distintas, sugerindo múltiplas fontes de entrada da bactéria no hospital ou de aquisição pelo paciente. Nesse ambiente, a colonização, infecção e re-infecção ocorrem com freqüência, o que leva à necessidade do estabelecimento de medidas de controle específicas.
Resumo
Forty-six S. maltophilia isolates obtained from hospital clinical specimens were studied for protease (caseinase and elastase) production, hemolytic activity, adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. Susceptibility to antimicrobial agents was also evaluated. The majority of isolates were obtained from respiratory tract secretions of patients using medical devices. All the isolates grown overnight were able to hydrolyze casein at 30ºC and 37ºC. After 72h, all the isolates hydrolyzed elastase at 30ºC and 40 isolates (87%) at 37ºC. Most of the isolates presented hemolytic activity after 96h of incubation at both temperatures. Rabbit blood showed the hightest hemolytic activity, after 96h 61% and 98% of tested isolates presented beta-hemolysis at 30ºC and 37ºC, respectively. All isolates were susceptible to trimethoprim-sulfametoxazole and were resistant to most beta-lactams tested. By the dilution method, S. maltophilia showed a high susceptibility to ticarcillin-clavulanate and a lower susceptibility to ciprofloxacin than the agar diffusion. The isolates showed adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. The proteolytic activities and adhesion to inanimate surfaces detected in S. maltophilia can be related to the pathogenesis of this bacterium and/or medical device colonization which favors the development of nosocomial infections.
Quarenta e seis amostras de S. maltophilia obtidas de amostras clínicas foram estudadas quanto à produção de protease (caseinase e elastase), atividade hemolítica, adesão a células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A sensibilidade aos agentes antimicrobianos também foi avaliada. A maioria das amostras foi obtida de secreções do trato respiratório de pacientes em uso de "dispositivos" médicos. Todas as amostras foram capazes de hidrolisar a caseína após o crescimento a 30ºC e 37ºC por 16-18hs. Após 72 hs, todas as amostras apresentaram atividade hemolítica após 96hs de incubação em ambas as temperaturas. A maior atividade hemolítica foi verificada com o sangue de coelho; após 96hs, 61% e 98% das amostras apresentaram b-hemólise a 30ºC e 37ºC, respectivamente. Todas as amostras foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim e resistentes à maioria dos antimicrobianos b-lactâmicos testados. Através do método de diluição em ágar, S. maltophilia mostrou uma alta sensibilidade à ticarcilina-ácido clavulânico e uma menor sensibilidade à ciprofloxacina do que pelo método de difusão em ágar. As amostras mostraram adesão às células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A atividade proteolítica e adesão a superfícies inanimadas detectadas em S. maltophilia podem estar relacionadas à patogênese desta bactéria. A colonização de "dispositivos" médicos favorece o desenvolvimento de infecções hospitalares.
Resumo
A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.
O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.
Resumo
A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.
O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.