Molecular characterization of Giardia lamblia and risk factors for giardiasis among immunocompromised patients in southern Brazil / Caracterização molecular de Giardia lamblia e fatores de risco para giardíase em pacientes imunocomprometidos no sul do Brasil

Acute Giardia infections often cause diarrhea and stomach upset. Chronic infections can lead to malnutrition, micronutrient deficiencies, malabsorption and weight loss. This study assessed the prevalence of G. lambia infection and assessed associated risk factors among immunocompomised patients undergoing chemotherapeutic treatment in southern Brazil. A total of 110 immunocompromised patients in Pelotas, RS, Brazil, consented to participate in this study and were recruited. Socioeconomic and epidemiological profile of patients was collected by questionnaire. The prevalence for Giardia were determined through microscopy by the centrifugation-flotation technique using stool samples of every patient. In addition, the genetic characterization of the parasite was carried out by amplifying and sequencing the glutamate dehydrogenase (gdh) gene. By microscopy, the prevalence of giardiasis was 17.3% (19/110). Furthermore, the DNA sequences revealed that 7 (36.8%) out of 19 isolates belonged to assemblage B, while 6 of them (31.6%) belonged to assemblage C, 5 (26.3%) to assemblage A and 1 (5.3%) to assemblage D. Risk factors (p ≤ 0.05) for giardiasis were schooling level (OR=8.0 (1.02 ­ 62.91) sharing a house with more than three people (OR=14.1 (3.77 ­ 52.51), water sources (OR=38.9 (10.4 ­ 145.7), sewage treatment (OR=14.2 (3.1 ­ 65.5), waste destination (OR=7.44 (2.0 ­ 27.3), owning pets (OR=4.6 (1.0 ­ 21.2) and cultivating a vegetable garden (OR=4.2 (1.3 ­ 13.6). The prevalence of G. lamblia in immunocompromised patients was considered elevate with the identification of four assemblage of the parasite (A, B, C and D).

As infecções agudas por Giardia geralmente causam diarreia e dores de estômago. As infecções crônicas podem levar à desnutrição, deficiências de micronutrientes, má absorção e perda de peso. Este estudo avaliou a prevalência da infecção por G. lambia e os fatores de risco associados em pacientes imunocomprometidos em tratamento quimioterápico no sul do Brasil. Um total de 110 pacientes imunocomprometidos de Pelotas, RS, Brasil, consentiram em participar deste estudo e foram recrutados. O perfil socioeconômico e epidemiológico dos pacientes foi coletado por meio de questionário. A prevalência de Giardia foi determinada através de microscopia pela técnica de centrifugação-flutuação utilizando amostras de fezes de cada paciente. Além disso, a caracterização genética do parasita foi realizada pela amplificação e sequenciamento do gene da glutamato desidrogenase (gdh). À microscopia, a prevalência de giardíase foi de 17,3% (19/110). Além disso, as sequências de DNA revelaram que 7 (36,8%) dos 19 isolados pertenciam ao agrupamento B, enquanto 6 deles (31,6%) pertenciam ao agrupamento C, 5 (26,3%) ao agrupamento A e 1 (5,3%) ao agrupamento D. Os fatores de risco (p ≤ 0,05) para giardíase foram, escolaridade (OR=8,0 (1,02 ­ 62,91), dividir casa com mais de três pessoas (OR=14,1 (3,77 ­ 52,51), fontes de água (OR=38,9 (10,4 ­ 145,7), tratamento de esgoto (OR=14,2 (3,1 ­ 65,5), destinação do lixo (OR=7,44 (2,0 ­ 27,3), possuir animais de estimação (OR=4,6 (1,0 ­ 21,2) e cultivar horta (OR=4,2 (1,3 ­ 13.6). A prevalência de G. lamblia em pacientes imunocomprometidos foi considerada elevada com a identificação de quatro conjuntos do parasito (A, B, C e D).

Assessment of the acid phosphatase CP01850 from Corynebacterium pseudotuberculosis in DNA and subunit vaccine formulations against caseous lymphadenitis / Avaliação da fosfatase ácida recombinante CP01850 de Corynebacterium pseudotuberculosis em formulações vacinais de subunidade e de DNA contra a linfadenite caseosa

The target cp1002_RS01850 from Corynebacterium pseudotuberculosis was used to construct a DNA and recombinant subunit vaccine against caseous lymphadenitis. Recombinant protein rCP01850 was expressed in Escherichia coli using pAE vector, and DNA vaccine was engineered with pTARGET vector. BALB/c mice were divided in five groups containing eight animals each, inoculated with: pTARGET/cp01850 as DNA vaccine (G1); rCP01850 plus Al (OH)3 as recombinant subunit vaccine (G2); pTARGET/cp01850 and a boost with rCP01850 plus Al (OH)3 (G3); pTARGET (G4); or Al (OH)3 (G5). Mice were inoculated and blood samples were collected on days 0, 21, and 42 for the analysis of total IgG, IgG1 and IgG2a by ELISA. In each group, five animals were challenged with Mic-6 C. pseudotuberculosis strain, and three were used for cytokine quantification by qPCR. Although no group has been protected by vaccines against lethal challenge, G2 showed an increase in the survival rate after challenge. Significantly higher levels of IL-4, IL-12, IFN-γ, total IgG, IgG1 and IgG2a were also detected for G2, evidencing a mixed Th1/Th2 immunological profile. In conclusion, despite no protection level provided by different vaccinal strategies using cp1002_RS01850 from C. pseudotuberculosis, G2 developed a Th1/Th2 immune response with an increase in survival rate.(AU)

O alvo cp1002_RS01850 de Corynebacterium pseudotuberculosis foi utilizado para construir uma vacina recombinante de subunidade e de DNA contra a linfadenite caseosa. A proteína recombinante rCP01850 foi expressa em Escherichia coli usando o vetor pAE, e a vacina de DNA foi construída com o vetor pTARGET. Camundongos BALB/c foram divididos em grupos de oito animais, inoculados com: pTARGET/cp01850 como vacina de DNA (G1); rCP01850 e Al (OH)3 como vacina recombinante de subunidade (G2); pTARGET/cp01850 e um boost com rCP01850 e Al (OH)3 (G3); pTARGET (G4); ou Al (OH)3 (G5). Os animais foram inoculados e amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 21, e 42 do experimento para a análise de IgG total, IgG1 e IgG2a por ELISA. De cada grupo, cinco animais foram desafiados com a cepa Mic-6 de C. pseudotuberculosis, e três foram usados para a quantificação de citocinas por qPCR. Apesar de nenhum grupo ter sido protegido pelas vacinas testadas contra o desafio letal, G2 apresentou taxa de sobrevida e níveis de IL-4, IL-12, IFN-γ, IgG total, IgG1 e IgG2a significativamente mais altos, evidenciando um perfil imunológico misto Th1/Th2. Conclui-se que apesar das diferentes estratégias vacinais utilizando cp1002_RS01850 de C. pseudotuberculosis não terem sido capazes de gerar proteção, G2 desenvolveu uma resposta Th1/Th2 e elevou a taxa de sobrevida.(AU)

Assessment of the acid phosphatase CP01850 from Corynebacterium pseudotuberculosis in DNA and subunit vaccine formulations against caseous lymphadenitis / Avaliação da fosfatase ácida recombinante CP01850 de Corynebacterium pseudotuberculosis em formulações vacinais de subunidade e de DNA contra a linfadenite caseosa

The target cp1002_RS01850 from Corynebacterium pseudotuberculosis was used to construct a DNA and recombinant subunit vaccine against caseous lymphadenitis. Recombinant protein rCP01850 was expressed in Escherichia coli using pAE vector, and DNA vaccine was engineered with pTARGET vector. BALB/c mice were divided in five groups containing eight animals each, inoculated with: pTARGET/cp01850 as DNA vaccine (G1); rCP01850 plus Al (OH)3 as recombinant subunit vaccine (G2); pTARGET/cp01850 and a boost with rCP01850 plus Al (OH)3 (G3); pTARGET (G4); or Al (OH)3 (G5). Mice were inoculated and blood samples were collected on days 0, 21, and 42 for the analysis of total IgG, IgG1 and IgG2a by ELISA. In each group, five animals were challenged with Mic-6 C. pseudotuberculosis strain, and three were used for cytokine quantification by qPCR. Although no group has been protected by vaccines against lethal challenge, G2 showed an increase in the survival rate after challenge. Significantly higher levels of IL-4, IL-12, IFN-γ, total IgG, IgG1 and IgG2a were also detected for G2, evidencing a mixed Th1/Th2 immunological profile. In conclusion, despite no protection level provided by different vaccinal strategies using cp1002_RS01850 from C. pseudotuberculosis, G2 developed a Th1/Th2 immune response with an increase in survival rate.(AU)

O alvo cp1002_RS01850 de Corynebacterium pseudotuberculosis foi utilizado para construir uma vacina recombinante de subunidade e de DNA contra a linfadenite caseosa. A proteína recombinante rCP01850 foi expressa em Escherichia coli usando o vetor pAE, e a vacina de DNA foi construída com o vetor pTARGET. Camundongos BALB/c foram divididos em grupos de oito animais, inoculados com: pTARGET/cp01850 como vacina de DNA (G1); rCP01850 e Al (OH)3 como vacina recombinante de subunidade (G2); pTARGET/cp01850 e um boost com rCP01850 e Al (OH)3 (G3); pTARGET (G4); ou Al (OH)3 (G5). Os animais foram inoculados e amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 21, e 42 do experimento para a análise de IgG total, IgG1 e IgG2a por ELISA. De cada grupo, cinco animais foram desafiados com a cepa Mic-6 de C. pseudotuberculosis, e três foram usados para a quantificação de citocinas por qPCR. Apesar de nenhum grupo ter sido protegido pelas vacinas testadas contra o desafio letal, G2 apresentou taxa de sobrevida e níveis de IL-4, IL-12, IFN-γ, IgG total, IgG1 e IgG2a significativamente mais altos, evidenciando um perfil imunológico misto Th1/Th2. Conclui-se que apesar das diferentes estratégias vacinais utilizando cp1002_RS01850 de C. pseudotuberculosis não terem sido capazes de gerar proteção, G2 desenvolveu uma resposta Th1/Th2 e elevou a taxa de sobrevida.(AU)