4-hydroxy-2-nonenal as a marker of the oxidative stress in brains of dogs with canine distemper / 4-hidroxi-2-nonenal como marcador de estresse oxidativo no cérebro de cães com cinomose

Canine Distemper is a disease caused by Canine morbillivirus (CM), a pantropic virus that can affect the central nervous system (CNS), causing demyelination. However, the pathogenesis of this lesion remains to be clarified. Brain samples of 14 naturally infected dogs by CM were analyzed to evaluate the presence of oxidative stress and demyelination. RT-PCR assay was performed to confirm a diagnosis of canine distemper in the brain, immunohistochemistry anti-CM was used to localize the viral proteins in the tissue, and anti-4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE) was a marker of a product of lipid peroxidation. The results showed the presence of viral proteins in the demyelinated area with the presence of 4-HNE. Our results suggest that the CM virus infection causes oxidative stress leading to lipid peroxidation, which causes tissue damage and demyelination. In conclusion, oxidative stress plays a significant role in canine distemper pathogenesis in the CNS.(AU)

A cinomose canina é uma doença causada pelo Morbilivírus canino (CM), um vírus pantrópico que pode afetar o sistema nervoso central (SNC), causando desmielinização. No entanto, a patogênese dessa lesão não está totalmente esclarecida. RT-PCR e imuno-histoquímica foram realizadas para confirmação do diagnóstico de cinomose em amostras de encéfalo de 14 cães naturalmente infectados. Após confirmação, foi realizada uma avaliação do estresse oxidativo por imuno-histoquímica com uso de anti-4-hidroxi-nonenal (4HNE) como marcador de produtos resultantes da peroxidação lipídica. Os resultados sugerem que a infecção pelo CM causa estresse oxidativo no tecido, levando a peroxidação lipídica, a qual causa danos ao tecido, culminando com desmielinização. Conclui-se que o estresse oxidativo tem papel importante na patogênese da cinomose canina no sistema nervoso central.(AU)

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, while the stability of nsp3 supports its function as a protease involved in AvCoV replication. In conclusion, AvCoV quasispecies evolution is influenced by the biological model under consideration, and a gradual transition is seen for minor and major variants.(AU)

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode-se especular que diferenças em receptores celulares entre Vero e BHK-21, além da velocidade da morte celular, levaram à seleção de diferentes cepas dominantes, enquanto que a estabilidade de nsp3 concorda com sua função como protease com papel na replicação de AvCoV. Como conclusão, a evolução de quase-espécies de AvCoV é influenciada pelo modelo biológico sob consideração e uma transição gradual é vista para variantes dominantes e subdominantes.(AU)

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, while the stability of nsp3 supports its function as a protease involved in AvCoV replication. In conclusion, AvCoV quasispecies evolution is influenced by the biological model under consideration, and a gradual transition is seen for minor and major variants.(AU)

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode-se especular que diferenças em receptores celulares entre Vero e BHK-21, além da velocidade da morte celular, levaram à seleção de diferentes cepas dominantes, enquanto que a estabilidade de nsp3 concorda com sua função como protease com papel na replicação de AvCoV. Como conclusão, a evolução de quase-espécies de AvCoV é influenciada pelo modelo biológico sob consideração e uma transição gradual é vista para variantes dominantes e subdominantes.(AU)

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, whi

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode

Evolution of Avian coronavirus (AvCoV) in BHK-21 and VERO cells / Evolução de Coronavírus aviário (AvCoV) em células BHK-21 e VERO

Avian coronavirus (AvCoV) infects a range of tissues in chickens and several other avian species. Although the virus can be isolated in chicken embryos, only a few strains of the 6 genotypes/33 lineages can grow in cell lines, with the Beaudette strain (GI-1 lineage) being the most used for in vitro studies. Considering the differences between cell lines and chicken embryos as habitats for AvCoV, this study aimed to assess the diversity of the genes coding for the nonstructural protein 3 (nsp3) and spike envelope protein (S) after serial passages in BHK-21 and Vero cells. After 14 passages of an embryo-adapted Beaudette strain, the virus loads fluctuated in both cell lines, with the highest loads being 8.72 log genome copies/µL for Vero and 6.36 log genome copies/µL for BHK-21 cells. No polymorphisms were found for nsp3; regarding S, not only aa substitutions (Vero: 8th passage A150S, and 14th S150A; BHK-21: 4th S53F, 8th F53Y, and 8th S95R), but also minor variants could be detected on chromatograms with fluctuating intensities. As the regions of these aa substitutions are within the receptor-binding domain of S, it can be speculated that differences in cell receptors between Vero and BHK-21 cells and the speed of cell death led to the selection of different dominant strains, whi

O Coronavírus aviário AvCoV infecta uma variedade de tecidos de galinhas e de outras espécies aviárias. Apesar de este vírus poder ser isolado em ovos embrionados de galinha, apenas alguns dos 6 genótipos / 33 linhagens podem crescer em cultivo celular, sendo a cepa Beuadette (linhagem GI-11) a mais utilizada para estudos in vitro. Considerando as diferentes linhagens celulares e ovos embrionados como habitats para o AvCoV, este estudo teve por objetivo estudar a diversidade de genes que codificam para a proteína não-estrutural 3 (nsp3) e espícula (S) após passagens seriadas em células BHK-21 e VERO. Após 14 passagens, de uma amostra Beuadette adaptada a ovos embrionados, os títulos virais variaram em ambas as células, com os maiores títulos sendo de 8,72 log cópias genômicas/µL para Vero e 6,36 cópias genômicas/µL para BHK-21. Nenhum polimorfismo foi encontrando para nsp3. Considerando a proteína S, não somente foram encontradas substituições de aminoácidos (Vero: 8a passagem A150S e 14a passagem S150A; BHK-21: 4a passagem S53F, 8a passagem F53Y e S95R), mas também, variantes subconsensuais foram detectadas pelos cromatogramas com intensidades flutuantes. Uma vez que as regiões destes aa se encontram no domínio de ligação de receptor de S, pode

Evolution of equine influenza viruses (H3N8) during a Brazilian outbreak, 2015

Equine influenza is one of the major respiratory infectious diseases in horses. An equine influenza virus outbreak was identified in vaccinated and unvaccinated horses in a veterinary school hospital in São Paulo, SP, Brazil, in September 2015. The twelve equine influenza viruses isolated belonged to Florida Clade 1. The hemagglutinin and neuraminidase amino acid sequences were compared with the recent isolates from North and South America and the World Organisation for Animal Health recommended Florida Clade 1 vaccine strain. The hemagglutinin amino acid sequences had nine substitutions, compared with the vaccine strain. Two of them were in antigenic site A (A138S and G142R), one in antigenic site E (R62K) and another not in antigenic site (K304E). The four substitutions changed the hydrophobicity of hemagglutinin. Three distinct genetic variants were identified during the outbreak. Eleven variants were found in four quasispecies, which suggests the equine influenza virus evolved during the outbreak. The use of an out of date vaccine strain or updated vaccines without the production of protective antibody titers might be the major contributing factors on virus dissemination during this outbreak.(AU)

Evolution of equine influenza viruses (H3N8) during a Brazilian outbreak, 2015

Abstract Equine influenza is one of the major respiratory infectious diseases in horses. An equine influenza virus outbreak was identified in vaccinated and unvaccinated horses in a veterinary school hospital in São Paulo, SP, Brazil, in September 2015. The twelve equine influenza viruses isolated belonged to Florida Clade 1. The hemagglutinin and neuraminidase amino acid sequences were compared with the recent isolates from North and South America and the World Organisation for Animal Health recommended Florida Clade 1 vaccine strain. The hemagglutinin amino acid sequences had nine substitutions, compared with the vaccine strain. Two of them were in antigenic site A (A138S and G142R), one in antigenic site E (R62K) and another not in antigenic site (K304E). The four substitutions changed the hydrophobicity of hemagglutinin. Three distinct genetic variants were identified during the outbreak. Eleven variants were found in four quasispecies, which suggests the equine influenza virus evolved during the outbreak. The use of an out of date vaccine strain or updated vaccines without the production of protective antibody titers might be the major contributing factors on virus dissemination during this outbreak.

Development and validation of a modified TaqMan based real-time PCR assay targeting the lipl32 gene for detection of pathogenic Leptospira in canine urine samples

A modified TaqMan real-time polymerase chain reaction targeting a 138 bp fragment within the lipl32 gene was developed to identify exclusively pathogenic Leptospira spp. in dog urine samples. Thirty-five samples from dogs with suspected clinical leptospirosis and 116 samples from apparently healthy dogs were tested for presence of leptospiral DNA using the TaqMan-based assay. The results were compared with those from a well-established conventional PCR targeting the 16S RNA encoding gene associated with nucleotide sequencing analysis. The overall agreement between the assays was 94.8% (confidence interval [CI] 95% 88-100%). The newly developed assay presented 91.6% (CI 95% 71.5-98.5%) relative sensitivity (22[+] lipl32 PCR/24[+] 16S RNA and sequencing), 100% (CI 95% 96.3-100%) relative specificity and 98.7% accuracy (CI 95% 94.8-100%). The lipl32 assay was able to detect and quantify at least 10 genome equivalents/reaction. DNA extracted from 17 pathogenic Leptospira spp., 8 intermediate/saprophytic strains and 21 different pathogenic microorganisms were also tested using the lipl32 assay, resulting in amplification exclusively for pathogenic leptospiral strains. The results also demonstrated high intra and inter-assay reproducibility (coefficient of variation 1.50 and 1.12, respectively), thereby qualifying the newly developed assay as a highly sensitive, specific and reliable diagnostic tool for leptospiral infection in dogs using urine specimens.(AU)

Molecular stability of a vaccine strain of Canine coronavirus after serial passages in A72 cells / Estabilidade molecular de uma amostras vacinal de Coronavírus canino após passagens seriadas em células A72

Canine coronavirus (CCoV) exists in types I and II and infects dogs leading mainly to enteritis, though type II has already been associated with generalized and highly lethal infection. A CCoV-type II inactivated vaccine produced in A72 canine cells is available worldwide and largely used, though the molecular stability after serial passages of vaccine seeds is unknown. This article reports the evolution of the CCoV-II vaccine strain 1-71 in A72 cells based on partial S gene sequencing, showing the predominance of neutral evolution and the occurrence of four sites under purifying selection. Thus, cell-adapted strains of CCoV-II may be genetically stable after serial passages in a same cell line due to a stable virus-host relationship.(AU)

O Coronavírus canino (CCoV) ocorre como tipos I e II e infecta cães, levando principalmente a enterite, apesar do tipo II já ter sido associado à infecção generalizada e altamente letal. Uma vacina de CCoV-II inativada produzida em células caninas A72 é disponível mundialmente e largamente utilizada, apesar da sua estabilidade molecular após passagens seriadas de sementes vacinais ser desconhecida. Este artigo relata a evolução da amostra vacinal CCoC-II 1-71 em células A-72 com base em sequenciamento parcial do gene S, demonstrando predomínio de evolução neutra e a ocorrência de quaro sítios sob seleção purificante. Portanto, amostras de CCoV-II adaptadas a cultivos celulares podem ser estáveis geneticamente após passagens seriadas em uma mesma linhagem celular devido à existência de uma relação estável vírus-hospedeiro.(AU)

Molecular stability of a vaccine strain of Canine coronavirus after serial passages in A72 cells / Estabilidade molecular de uma amostras vacinal de Coronavírus canino após passagens seriadas em células A72

Canine coronavirus (CCoV) exists in types I and II and infects dogs leading mainly to enteritis, though type II has already been associated with generalized and highly lethal infection. A CCoV-type II inactivated vaccine produced in A72 canine cells is available worldwide and largely used, though the molecular stability after serial passages of vaccine seeds is unknown. This article reports the evolution of the CCoV-II vaccine strain 1-71 in A72 cells based on partial S gene sequencing, showing the predominance of neutral evolution and the occurrence of four sites under purifying selection. Thus, cell-adapted strains of CCoV-II may be genetically stable after serial passages in a same cell line due to a stable virus-host relationship.(AU)

O Coronavírus canino (CCoV) ocorre como tipos I e II e infecta cães, levando principalmente a enterite, apesar do tipo II já ter sido associado à infecção generalizada e altamente letal. Uma vacina de CCoV-II inativada produzida em células caninas A72 é disponível mundialmente e largamente utilizada, apesar da sua estabilidade molecular após passagens seriadas de sementes vacinais ser desconhecida. Este artigo relata a evolução da amostra vacinal CCoC-II 1-71 em células A-72 com base em sequenciamento parcial do gene S, demonstrando predomínio de evolução neutra e a ocorrência de quaro sítios sob seleção purificante. Portanto, amostras de CCoV-II adaptadas a cultivos celulares podem ser estáveis geneticamente após passagens seriadas em uma mesma linhagem celular devido à existência de uma relação estável vírus-hospedeiro.(AU)

Diagnóstico molecular do granuloma lepróide canino, a partir de cortes histológicos emblocados em parafina, pela técnica de reação em cadeia de polimerase (Pcr) estudo retrospectivo (2002-2009) / Molecular diagnosis of Canine Leproid Granuloma out of paraffin-embedded histological cuts using polymerase chain reaction (PCR) a retrospective study (2002-2009)

Canine leproid granuloma or canine leprosy is a mycobacteriosis that has a dermatopathic framework, which includes aspects that are still unclear, especially regarding its mode of transmission and etiological agent. In order to verify the genetic characterization of the mycobacteria that is involved in the condition, the present study analyzed histological cuts from animals with an established diagnosis of such disorder. The study samples were taken from of 13 dogs that were assisted at the HOVET / USP Dermatology Service. This material was subsequently subjected to nested and real-time polymerase chain reaction (PCR). The nested PCR confirmed the presence of the agent in 18.7% of the animals, whereas the real-time PCR detected 69.2% of samples with DNA of the mycobacterium, thus proving that such method presents higher sensitivity. Furthermore, it was observed that the species of mycobacterium that causes Canine Leproid Granulnoma in dogs from Brazil presents a 100% genetic homology when compared to samples obtained from animals in studies abroad.(AU)

O Granuloma lepróide canino (GLC) ou lepra canina consiste em micobacteriose, com quadro dermatopático que conta com aspectos ainda obscuros, principalmente quanto ao seu modo de transmissão e agente etiológico envolvido. Com a finalidade de se verificar a caracterização gênica da micobactéria em questão, procedeu-se estudo a partir de cortes histológicos, de animais com diagnóstico estabelecido da enfermidade. A amostragem foi composta de 13 cães, atendidos no Serviço de Dermatologia do HOVET/USP. Tal material foi posteriormente submetido às técnicas de reação em cadeia de polimerase (PCR), nested e em tempo real. O método da PCR nested confirmou a presença do agente em apenas 18,7% dos animais. Enquanto que, em 69,2% das amostras, o DNA da micobactéria envolvida foi detectado pela PCR em tempo real, demonstrando ser neste estudo, o método de maior sensibilidade. Pôde-se concluir ainda que a espécie de micobactéria causadora do Granuloma lepróide canino nos cães brasileiros possui homologia gênica de 100%, quando comparada às amostras provindas de animais de estudos estrangeiros.(AU)

Sporotrichosis in Yorkshire Terrier dog in the city of São Paulo, SP Brazil: case report / Esporotricose em cão Yorkshire Terrier na cidade de São Paulo, SP Brasil: relato de caso

Sporotrichosis is an implantation or subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus Sporothrix spp. that infects both humans and animals. Dogs are rarely affected and this microorganism is considered as of low zoonotic potential. The present study reports a case of sporotrichosis in a one year old female Yorkshire Terrier dog, with no history of previous contact with cats. Histopathological and immunohistochemical analyses performed in the sample, collected by means of the lesion biopsy, revealed a nodular dermatitis with intra-lesion Sporothrix spp. The dog was treated with itraconazole (10 mg/kg/day for 120 days). No additional skin lesions were detected, 11 months after starting the treatment. Currently, sporotrichosis has not been included as a disease requiring the mandatory report. However, it is important to instruct the professionals concerning the zoonotic potential of this disease, and on the clinical features which might be very subtle and similar to those found in the most common skin diseases.(AU)

A esporotricose é uma micose subcutânea de implantação causada pelo fungo dimórfico Sporothrix spp. que acomete seres humanos e animais, sendo rara em cães e com baixo potencial zoonótico. O presente relato refere-se a um cão da raça Yorkshire Terrier, fêmea, com um ano de idade, sem histórico de contato com felinos, que apresentou lesão cutânea em membro torácico direito, resistente ao tratamento com antibiótico. A amostra obtida da biópsia excisional da lesão foi enviada para realização de exame histopatológico (H&E, PAS e Grocott) e análise imuno-histoquímica para a investigação de dermatozoonoses. Os resultados confirmaram o diagnóstico de Sporothrix spp. O animal foi tratado com itraconazol (10 mg/kg/dia via oral durante 120 dias). Não foram observadas lesões após 11 meses do início do tratamento. Atualmente, a esporotricose não é considerada como doença de notificação compulsória. Entretanto, é importante conscientizar os profissionais veterinários quanto ao potencial zoonótico da doença, e quanto às características clínicas, que podem ser sutis e semelhantes à outras dermatopatias comuns.(AU)

Desenvolvimento de oligonucleotídeos iniciadores para sequenciamento dos genes codificadores das proteínas NSP1, NSP3 e VP6 de rotavírus suíno do grupo A / Development of primers for sequencing the NSP1, NSP3, and VP6 genes of the group A porcine rotavirus

Rotavírus é responsável pela ocorrência de diarreia em humanos e em várias espécies animais. Oito pares de oligonucleotídeos iniciadores (primers) foram desenvolvidos e utilizados como estratégia para o sequenciamento do tipo Sanger da região codificadora dos genes NSP1, NSP3 e VP6 com base nas áreas conservadas do genoma dos rotavírus do grupo A de suínos. Um total de 3 amostras previamente triadas como positivas para rotavírus do grupo A, tiveram os respectivos genes amplificados e seqüenciados por estes oligonucleotídeos iniciadores, possibilitando a caracterização das amostras circulantes, cujo conhecimento é essencial para a compreensão da epidemiologia da doença.(AU)

Rotavirus is the causative pathogen of diarrhea in humans and in several animal species. Eight pairs of primers were developed and used for Sanger sequencing of the coding region of the NSP1, NSP3, and VP6 genes based on the conserved regions of the genome of the group A porcine rotavirus. Three samples previously screened as positive for group A rotaviruses were subjected to gene amplification and sequencing to characterize the pathogen. The information generated from this study is crucial for the understanding of the epidemiology of the disease.(AU)

Molecular epidemiology of rabies virus isolated of herbivores from Brazilian Amazon / Epidemiologia molecular de vírus da raiva isolados de herbívoros procedentes da Amazônia brasileira

Rabies virus samples (n = 17) A1 to A3 exhibit a similar composition and geographic distribution. Diverse composition of remaining groups of N and G gene is attributable to different sequences used in the alignments for each genomic region. Glycoprotein amino acid sequence showed molecular markers in sub-lineages A2, A3, A4 and A7. This information provides a better comprehension of molecular epidemiology of rabies, starting with the knowledge of viral lineages circulating in the Brazilian Amazon.(AU)

Amostras do vírus da raiva (n = 17) isoladas de bovinos (n = 11), equinos (n = 4) e bubalinos (n = 2) procedentes do Pará (n = 7), Tocantins (n = 6) e Rondônia (n = 4) foram submetidas à técnica de RT-PCR para amplificação parcial dos genes da Nucleoproteína (N) e Glicoproteína (G). As sequências nucleotídicas obtidas foram analisadas pelo método de reconstrução filogenética Neighbor-Joining com o modelo evolutivo Kimura 2-parâmetros. Todas as 17 amostras pertenceram ao cluster A, que se encontrou na linhagem associado com morcego hematófago Desmodus rotundus. A análise filogenética baseada nos genes N e G, sugere a presença de cinco sublinhagens (A1-A5) e sete sublinhagens (A1-A7), respectivamente. Quando se compara ambas as filogenias, as sublinhagens A1 até A3 mostram composição e distribuição geográfica concordante, já a diversidade observada na composição das sublinhagens restantes é atribuída ao uso de sequências de diferentes alinhamentos. A glicoproteína mostrou marcadores moleculares nas sublinhagens A2, A3, A4 e A7, o que fornece elementos para melhor compreensão da epidemiologia molecular da raiva das linhagens circulantes na Amazônia Brasileira.(AU)

Salmonella Agona em Perus (Meleagris gallopavo) de criações comerciais no Brasil / Salmonella Agona in Turkeys (Meleagris gallopavo) in commercial farms from Brazil

Salmonella spp. é um dos principais agentes envolvidos em casos de doenças de origem alimentar em humanos, responsável por perdas significativas na avicultura. O presente trabalho investigou a presença de Salmonella spp. em fezes de perus comerciais no Brasil. Foram colhidos suabes fecais de 14 lotes de perus comerciais (pool de seis aves/lote). Os suabes foram submetidos aos procedimentos de isolamento bacteriológico convencionais e a detecção de DNA do agente foi realizada com a técnica de PCR. Salmonella spp. foi detectada em um total de nove lotes dos 14 avaliados. As amostras foram negativas na identificação molecular dos sorovares Enteritidis e Typhimurium. Os isolados foram encaminhados ao laboratório de referência para sorotipagem e identificados como S. Agona; um patógeno considerado emergente em vários países.(AU)

Abstract Salmonella spp. is one of the major players involved in cases of foodborne diseases in humans and is responsible for significant losses in the poultry industry. The aim of this study was to investigate the presence of Salmonella spp. in feces of commercial turkeys from Brazil. Fecal swabs from 14 turkey farms (pool of six poults/flocks) were collected. The swabs were subject to the conventional bacteriological isolation procedures and to DNA detection of the agent trough PCR. Salmonella spp. was present in a total of nine from 14 turkey farms evaluated. The samples were negative on molecular identification for serovars Enteritidis and Typhimurium. Isolated strains submitted to the reference laboratory for serotyping were identified as S. Agona that has been described as emergent pathogen in several countries.(AU)

Occurrence of Chlamydophila felis in a cattery in Osasco city, São Paulo state / Ocorrência de Chlamydophila felis em um gatil na região de Osasco, São Paulo

Chlamydophila felis is associated with upper respiratory tract infections. In the present study, 31 cats from a noncommercial shelter located in Osasco, SP, Brazil, were examined. The cats presented with clinical manifestations, which were classified from grade 1 to 4, with 4 indicating severe manifestations. In total, 16.13% of the cats presented with grade 1 severity of clinical manifestations, 25.81% presented with grade 2, 38.71% presented with grade 3, and 19.35% presented with grade 4. PCR was used to detect C. felis in samples taken from the oral mucosa and ocular conjunctiva of both eyes using sterile, dry cotton swabs. Overall, 58% of the samples were positive for C. felis. Of these animals, none showed clinical manifestations that were classified as grade 1, whereas 5.56% of cats were classified as grade 2, 61.11% were classified as grade 3, and 33.33% were classified as grade 4. The median clinical manifestation intensity score for the first group was 3 and ranged from 2 to 4. In the second group not positive for C. felis, 38.45% of the animals (5/13) presented with manifestations classified as grade 1, 53.85% (7/13) were classified as grade 2, 7.69% (1/13) were classified as grade 3, and no animals were classified as grade 4. The median clinical manifestation intensity score for the second group was 2 and ranged from 1 to 3. In this study, there was a high occurrence of C. felis in animals with clinical manifestations(AU)

A Chlamydophila felis está associada à infecção de trato respiratório superior. No presente estudo, foram utilizados 31 felinos de um gatil não comercial, localizado em Osasco/SP. Os gatos apresentavam manifestações clínicas, classificadas de 1 a 4, sendo 4 atribuído àqueles que apresentavam pior manifestação clínica. Foi observada a intensidade de manifestação clínica grau 1 em 16,13% dos gatos, a 2 em 25,81%, a 3 em 38,71% e a 4 em 19,35%. A detecção de C. felis foi realizada por técnica de PCR em amostras obtidas com suabes de algodão, seco e estéril, de mucosa oral e de conjuntiva ocular de ambos os olhos. Verificou-se que 58% das amostras para C. felis foram positivas, entre esses animais, nenhum apresentou manifestação clínica classificada como grau 1, o grau 2 foi observado em 5,56% dos gatos, 61,11% para o 3 e 33,33% dos animais apresentava a intensidade 4. Verificou-se que para o primeiro grupo a mediana dos escores de intensidade das manifestações clínicas observadas foi de 3, variando de 2 a 4. No segundo grupo, foi observado 38,45% (5/13) dos animais para a intensidade 1, 53,85% (7/13) para a 2 e 7,69% (1/13) para a 3, nenhum animal deste grupo apresentou o grau 4. Verificou-se para o segundo grupo, a mediana dos escores de intensidade das manifestações clínicas observadas foi de 2, variando de 1 a 3. Neste trabalho foi observada uma elevada ocorrência de C. felis em animais com manifestação clínica(AU)

On the evolution of Avian infectious bronchitis virus in Vero cells / Sobre a evolução do vírus da bronquite infecciosa das galinhas em células Vero

Avian infectious bronchitis virus (IBV) (Nidovirales: Coronaviridae) is a chicken Gammacoronavirus with the highest evolution rate in the genus and, despite the recently reported proofreading activity of its polymerase, intra and interhost diversity is a well documented phenomenon. This study aimed to assess the genetic variation of serial passages of a variant genotype IBV strain in vitro. Strain CRG-BETA, propagated in chicken embryos, was inoculated in VERO cells monolayers up to the 4th passage and each passage was monitored with an RT-PCR targeted to the S1 gene (nt 705 to 1094) and an RT-PCR to the protein 5a mRNA. All passages were positive to RT-PCRs to S1 and passages 1 to 3 to 5a mRNA; S1 sequences showed no polymorphism. The finding of IBV mRNA in the cell cultures demonstrates that the CRG-BETA IBV strain is replicating in the VERO cells and regarding S1 sequence analysis, the lack of nucleotide mutations shows that CRG-BETA might have reached a fixed status. As a conclusion, different genotypes of IBV present different evolutionary patterns not only in vivo as previously known, but also in vitro, as described herein.(AU)

O virus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV) (Nidovirales: Coronaviridae) é um Gammacoronavirus com a maior taxa evolutiva no gênero e, apesar de uma recentemente relatada atividade corretiva de sua polimerase, a diversidade intra e inter-hospedeiros é um fenômeno bem documentado. Este estudo objetivou avaliar a variação genética após passagens seriais de uma amostra de IBV variante. A amostra CRG-BETA, propagada em embriões de galinhas, foi inoculada em monocamadas de células VERO até a quarta passagem e cada passagem foi monitorada com uma RTPCR para a região S1 do gene S (nt 705 a 1094) e uma RT-PCR para o mRNA da proteína 5a do vírus. Todas as passagens foram positivas para S1 e as passagens 1 a 3 para mRNA 5a; sequências de S1 não apresentaram polimorfismos. O encontro de mRNA de IBV nos cultivos celulares demonstra que a amostra CRG-BETA está replicando nas células VERO e, em relação à análise de S1, a ausência de mutações de nucleotídeos demonstra que a amostra CRG-BETA pode ter atingido um estado fixo. Como conclusão, diferentes genótipos de IBV apresentam diferentes padrões evolutivos não apenas in vivo, como previamente conhecido, mas também in vitro, como aqui relatado.(AU)

Detection of infectious bronchitis virus and Avian metapneumovirus by a duplex semi-nested reversetranscription–polymerase chain reaction assay / Detecção do vírus da bronquite infecciosa das galinhas e do metapneumovírus aviário utilizando uma reação de transcrição reversa com reação em cadeia pela polimerase duplex

duplex RT-PCR assay is reported for the simultaneous detection of avian infectious bronchitis virus (IBV) and avian metapneumovirus (aMPV), the causative agents of major diseases in poultry. The duplex RT-PCR assay optimized showed a detection limit of 10-3 (101 EID50/50m L for IBV and 100.5 EID50/50m L for aMPV, respectively when two viruses were mixed and 10-1 for each one separated (103 EID50/50m L for IBV and 102.5 EID50/50m L for aMPV, respectively. It was specific, sensitive and applicable for the rapid detection of these viruses in clinical samples.(AU)

Descreve-se um ensaio de duplex RT-PCR assay para a detecção simultânea do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV) e do metapneumovirus aviário (aMPV), agentes etiológicos de doenças de elevada importância em avicultura. A duplex RT-PCR otimizada mostrou um limiar de detecção de 10-3 (101 EID50/50m L para IBV e 100.5 EID50/50m L para aMPV, respectivamente, quando da combinação dos dois vírus e 10-1 para cada um dos vírus em separado(103 EID50/50m L para IBV e 102.5 EID50/50m L para aMPV, respectivamente. O ensaio foi demonstrado como específico, sensível e aplicável à rápida detecção destes vírus em amostras clínicas.(AU)

Multiple substitutions in biologically active domains of rabies virus glycoprotein can be related to pathogenic profile / Múltiplas substituições em domínios biologicamente ativos da glicoproteína do vírus rábico podem estar relacionadas com o perfil patogênico

Pathogenic profile of a rabies virus isolated from an insectivorous bat Lasiurus ega was compared with a rabies fixedvirus strain (CVS/32) in hamster and mouse. Incubation and clinical periods, clinical manifestation and death rateswere compared. Challenge of hamsters with L. ega was performed using: 10 2,611-4,021 LD50 /0,05 mL;. For CVS were used10 3,7-4,7 LD50 /0,05 mL. Were tested intramuscular (IM), intradermal (ID), intranasal (IN), epidermal abrasion (EA)inoculation routes. Viral antigen in brains was confirmed by Direct Immunofluorescence Test. Mortality percentagesobserved with L. ega rabies virus isolate were the following in hamster: 3,5 % IM, 10,710% IN; in mice: 50.0% IM, 30.0%IN. Furious rabies was predominant. Mortality percentages observed with CVS/32 in hamster: 12.5% IM, 62.5% ID,12.5% IN; in mice 100.0% IM, 70.0% ID, 10.0% IN. Paralytic rabies was found with this strain in both animal models.Epidermic abrasion was not a suitable challenge route. Incubation period was 5-7 days for CVS and 11-16 days for L. egaisolate, meanwhile clinical periods were comprehended between 4–7 days for both viruses. Several substitutions weredetected at antigenic domains of glycoprotein: AI (position 231), AII (34–42 and 198-200), domain of fusion dependenton low pH (102–179), transmembrane domain (440–461) and residue 242. These viruses showed contrasting biologicalbehaviors that can be linked to those substitutions at antigenic domains previously described.(AU)

O perfil patogênico de um vírus da raiva isolado de um morcego insetívoro Lasiurus ega foi comparado com o de vírusfixo de raiva (CVS/32) em hamster e camundongo, determinando os períodos de incubação e clínico, manifestaçãoclínica e mortalidade. Os animais foram desafiados com 10 2,611 - 4,021 DL50 /0,05 mL do isolado de L. ega e 10 3,7- 4,7 LD50 /0,05 mL do CVS/32, usando as vias: intramuscular (IM), intradermica (ID), intranasal (IN) e abrasão epidermica (AE).A presença do antígeno viral foi confirmada pela prova de imunofluorescência direta. As porcentagens de mortalidadeobservadas com o isolado de L. ega foram as seguintes em hamster: 3,5% IM, 10,71% IN; em camundongo: 50.0%IM, 30.0% IN. A forma furiosa da doença foi predominante. As porcentagens de mortalidade observadas com o vírusCVS/32 em hamster foram as seguintes: 12.5% IM, 62.5% ID, 12.5% IN; em camundongo 100.0% IM, 70.0% ID,10.0% IN. Com este vírus foi observada raiva paralitica. A via AE mostrou-se inadequada para induzir doença. Operíodo de incubação foi de 5–7 dias para o CVS/32 e 11-16 dias para o isolado de L. ega, entre tanto os períodosclínicos oscilaram entre 4–7 dias para ambos os vírus. Varias substituições foram achadas em domínios antigênicos daglicoproteína: AI (posição 231), AII (34–42 e 198-200), domínio de fusão dependente de baixo pH (102–179), domínioda transmembrana (440–461) e resíduo 242. Esses vírus mostraram comportamentos biológicos distintos o que poderiaestar ligado às substituições nos domínios antigênicos anteriormente descritos.(AU)

The Cap gene of porcine circovirus type 2 (PCV2) evolves by positive selection in vitro / O gene Cap de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) evolui por seleção positiva in vitro

This article reports the genetic divergence of PCV2 after passages in VERO and SK-RST cell lines. Fishers exact test indicated a trend for positive selection on the cap gene. These results allow insights on the development of PCV2 vaccines and the evolution of the genus Circovirus.(AU)

Este artigo relata a divergência genética de PCV2 após passagens em células das linhagens VERO e SK-RST. O teste exato de Fisher indicou tendência para seleção positiva no gene cap. Estes resultados permitem inferências relativas ao desenvolvimento de vacinas contra PCV2 e sobre a evolução do gênero Circovirus.(AU)