Resumo
Este estudo teve como objetivo validar um protocolo para cultivo de Neoechinorhyncus buttnerae (Acanthocephala), parasito de Colossoma macropomum e avaliar a eficácia in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Mentha piperita, Lippia alba e Zengiber officinale no seu controle. Para o cultivo in vitro, os parasitos foram obtidos a partir de peixes naturalmente parasitados, e distribuídos em placas de cultura de 6 poços distribuídos nos seguintes tratamentos em triplicata: NaCl a 0,9%; água do tanque estéril; L-15 Leibovitz meio de cultura; L-15 Leibovitz + ágar 2% meio de cultura; Meio de cultura RPMI 1640; RPMI 1640 + agar 2% de meio de cultura. As placas contendo os parasitas foram mantidas a 24°, 28° e 32°C. Os resultados do cultivo in vitro, mostraram que o meio de cultura que apresentou a melhor sobrevivência nas três temperaturas foi o meio RPMI e a temperatura considerada ideal foi a de 24°, pois os parasitos obtiveram um periodo mais longo de vida sem apresentar alterações morfológicas. Para o ensaio in vitro tambaquis naturalmente parasitados foram necropsiados para retirada dos acantocéfalos. Os parasitos foram expostos a cinco diferentes concentrações (360, 540, 720, 1440, 2880 mg L-1 ) dos óleos essenciais de Mentha, Lippia e Zingiber, diluídas em Tween 80 a 3% 1g:10 mL). Observou-se atividade anti-helmíntica nas maiores concentrações, sendo que o óleo essencial de Mentha apresentou a melhor atividade contra N. buttnerae, pois em menor concentração (540 mg L-1 ) foi capaz de inibir 100% em apenas 120 minutos, poucos minutos a mais que as concentrações mais fortes. Os óleos essenciais de Lippia e Zingiber apresentaram 100% de atividade anti-helmíntica nas concentrações de 1440 e 2880 mg L-1 . Para os ensaios in vivo foram utilizados 210 juvenis de tambaqui, os quais foram alimentados por 30 dias com as dietas experimentais: controle (três réplicas), óleo essencial de Mentha 0,54 g kg-1 (três réplicas), Mentha 2,88g kg-1 (três réplicas); óleo essencial de Lippia 1,44 g kg-1 (três réplicas), Lippia 2,88 g kg-1 (três réplicas) e óleo essencial de Zingiber 1,44 g kg-1 (três réplicas), Zingiber 2,88 g kg-1 (três réplicas). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, constituído por sete tratamentos em 21 unidades experimentais (10 peixes por tanque). A prevalência dos parasitos em peixes tratados com óleos essenciais de Mentha 0,54 g kg-1; Mentha 2,88 g kg-1 e Lippia 2,88 g kg-1 foi 84%, 84% e 88,46% respectivamente. O cálculo da eficácia resultou em 85,46% e 70,03% nos animais que tiveram a dieta suplementada com Mentha nas concentrações de 0,54 e 2,88 g kg-1 respectivamente, 67,10% e 56,93% em Lippia 1,44 e 2,88 g kg-1 respectivamente e 11,70% e 5,19% em Zingiber 1,44 e 2,88 g kg-1 respectivamente. Os números totais de eritrócitos (RBC) e trombócitos foram 9 maiores em peixes tratados com Mentha 0,54 g kg-1 e Zingiber 1,44 g kg-1. A concentração de glicose foi significativamente maior nos peixes que não tiveram suplementação do óleo essencial. Devido a alta eficácia e ao resultado positivo sobre os parâmetros hematológicos analisados e ao ganho de peso, recomenda-se o uso do óleo essencial de Mentha 0,54 g kg-1 administrados na ração para o controle de acantocéfalos.
This study aimed to validate a protocol for the cultivation of Neoechinorhyncus buttnerae (Acanthocephala), a parasite of Colossoma macropomum and to evaluate the in vitro and in vivo efficacy of the essential oils of Mentha piperita, Lippia alba and Zengiber officinale in its control. For in vitro culture, the parasites were obtained from naturally parasitized fish, and distributed in 6-well culture plates distributed in the following treatments in triplicate: 0.9% NaCl; sterile tank water; L-15 Leibovitz culture medium; L-15 Leibovitz + agar 2% culture medium; RPMI 1640 culture medium; RPMI 1640 + agar 2% culture medium. Plaques containing the parasites were maintained at 24 °, 28 ° and 32 ° C. The in vitro culture results showed that the culture medium that showed the best survival at the three temperatures was the RPMI medium and the temperature considered ideal was 24 °, as the parasites obtained a longer period of life without presenting morphological changes. For the in vitro assay naturally parasitized tambaquis were necropsied for removal of the acantocephalan. The parasites were exposed to five different concentrations (360, 540, 720, 1440, 2880 mg L-1 ) of Mentha, Lippia and Zingiber essential oils, diluted in 3% Tween 80 1g: 10ml). It was observed anthelmintic activity at the highest concentrations, and Mentha essential oil showed the best activity against N. buttnerae, because at a lower concentration (540 mg L-1 ) it was able to inhibit 100% in only 120 minutes, few minutes longer than the strongest concentrations. The essential oils of Lippia and Zingiber presented 100% of anthelmintic activity in the concentrations of 1440 and 2880 mg L-1 . For the in vivo tests, 210 tambaqui juveniles were used, which were fed for 30 days with the experimental diets: control (three replicates), Mentha essential oil 0.54 g kg-1 (three replicates), Mentha 2.88 g kg-1 (three replicates); Lippia essential oil 1.44 g kg-1 (three replicates), Lippia 2.88 g kg-1 (three replicates) and Zingiber essential oil 1.44 g kg-1 (three replicates), Zingiber 2.88 g kg-1 (three replicates). The experimental design was completely randomized, consisting of seven treatments in 21 experimental units (10 fish per tank). The prevalence of parasites in fish treated with essential oils of Mentha 0.54 g kg-1; Mentha 2.88 g kg-1 and Lippia 2.88 g kg-1 was 84%, 84% and 88.46% respectively. Efficacy was calculated as 85.46% and 70.03% in the animals fed the Mentha supplemented diet at concentrations of 0.54 and 2.88 g kg -1, respectively, 67.10% and 56.93%, respectively. Lippia 1.44 and 2.88 g kg-1 respectively and 11.70% and 5.19% in Zingiber 1.44 and 2.88 g kg-1 respectively. Total numbers of erythrocytes (RBC) and thrombocytes were higher in fish treated with Mentha 0.54 g kg-1 and Zingiber 1.44 g kg -1. Glucose concentration was significantly higher in fish 11 that did not have essential oil supplementation. Due to the high efficacy and the positive result on the haematological parameters analyzed and the weight gain, it is recommended the use of the essential oil of Mentha 0.54 g kg-1 administered in the diet for the control of acantocephalan.