Resumo
Zika virus (ZIKV), an emerging arthropod-borne virus (arbovirus) of the Flaviviridae family, is a current issue worldwide, particularly because of the congenital and neurological syndromes associated with infection by this virus. As the initial clinical symptoms of all diseases caused by this group are very similar, clinical diagnosis is difficult. Furthermore, laboratory diagnostic efforts have failed to identify specific and accurate tests for each virus of the Flaviviridae family due to the cross-reactivity of these viruses in serum samples. This situation has resulted in underreporting of the diseases caused by flaviviruses. However, many companies developed commercial diagnostic tests after the recent ZIKV outbreak. Moreover, health regulatory agencies have approved different commercial tests to extend the monitoring of ZIKV infections. Considering that a specific and sensitive diagnostic method for estimating risk and evaluating ZIKV propagation is still needed, this review aims to provide an update of the main commercially approved serological diagnostics test by the US Food and Drug Administration (FDA) and Brazilian National Health Surveillance Agency (ANVISA). Additionally, we present the technologies used for monoclonal antibody production as a tool for the development of diagnostic tests and applications of these antibodies in detecting ZIKV infections worldwide.(AU)
Assuntos
Vigilância Sanitária , Testes Sorológicos/métodos , Flaviviridae , Flavivirus , Zika virus , Anticorpos , Anticorpos MonoclonaisResumo
Zika virus (ZIKV), an emerging arthropod-borne virus (arbovirus) of the Flaviviridae family, is a current issue worldwide, particularly because of the congenital and neurological syndromes associated with infection by this virus. As the initial clinical symptoms of all diseases caused by this group are very similar, clinical diagnosis is difficult. Furthermore, laboratory diagnostic efforts have failed to identify specific and accurate tests for each virus of the Flaviviridae family due to the cross-reactivity of these viruses in serum samples. This situation has resulted in underreporting of the diseases caused by flaviviruses. However, many companies developed commercial diagnostic tests after the recent ZIKV outbreak. Moreover, health regulatory agencies have approved different commercial tests to extend the monitoring of ZIKV infections. Considering that a specific and sensitive diagnostic method for estimating risk and evaluating ZIKV propagation is still needed, this review aims to provide an update of the main commercially approved serological diagnostics test by the US Food and Drug Administration (FDA) and Brazilian National Health Surveillance Agency (ANVISA). Additionally, we present the technologies used for monoclonal antibody production as a tool for the development of diagnostic tests and applications of these antibodies in detecting ZIKV infections worldwide.(AU)
Assuntos
Infecção por Zika virus/diagnóstico , Testes Sorológicos , Comércio , Anticorpos Monoclonais/análise , Anticorpos Monoclonais/química , Zika virusResumo
Sarcocystis neurona and Neospora hughesi are coccidian protozoa that can cause neurological illness in horses in America. In this study we report seroprevalence of Neospora spp. andS. neurona in sera of 333 donkeys from the northeastern region of Brazil. Antibodies to Neospora spp. were detected in 2% (7 donkeys) of 333 sera tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with a cut-off dilution of 1:40. Antibodies to S. neurona were found in 3% (10 donkeys) of the samples tested by IFAT (cut-off 50) and 21% (69 donkeys) by the direct agglutination test (SAT 50). The SAT and IFAT results for S. neurona showed a poor concordance (value of Kappa=0.051). This is the first report ofNeospora spp. antibodies in Brazilian donkeys and the first detection of antibodies against S. neurona in this animal species.(AU)
Sarcocystis neurona e Neospora hughesi são protozoários coccídios que infectam equídeos e são responsáveis por doenças neurológicas nessas espécies. Neste estudo, a soroprevalência de infecção porS. neurona e Neospora spp. foi determinada em amostras de 333 soros de jumentos da Região Nordeste do Brasil. Anticorpos contra Neospora spp. foram detectados em 2% (7 jumentos) dos 333 animais examinados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 40. Anticorpos contra S. neurona foram detectados em 3% (10 jumentos) das amostras pela RIFI (ponto de corte de 50) e em 21% (69 jumentos) pela técnica de aglutinação direta (SAT - ponto de corte de 50). SAT e RIFI, para diagnóstico de S. neurona, apresentaram uma baixa concordância (Kappa = 0,051). Essa é a primeira observação de anticorpos anti-N. caninum em jumentos brasileiros e a primeira detecção de anticorpos contra S. neurona nessa espécie.(AU)
Assuntos
Animais , Equidae/imunologia , Equidae/parasitologia , Neospora/citologia , Neospora/imunologia , Sarcocystis/imunologiaResumo
Abstract Sarcocystis neurona and Neospora hughesi are coccidian protozoa that can cause neurological illness in horses in America. In this study we report seroprevalence of Neospora spp. andS. neurona in sera of 333 donkeys from the northeastern region of Brazil. Antibodies to Neospora spp. were detected in 2% (7 donkeys) of 333 sera tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with a cut-off dilution of 1:40. Antibodies to S. neurona were found in 3% (10 donkeys) of the samples tested by IFAT (cut-off 50) and 21% (69 donkeys) by the direct agglutination test (SAT 50). The SAT and IFAT results for S. neurona showed a poor concordance (value of Kappa=0.051). This is the first report ofNeospora spp. antibodies in Brazilian donkeys and the first detection of antibodies against S. neurona in this animal species.
Resumo Sarcocystis neurona e Neospora hughesi são protozoários coccídios que infectam equídeos e são responsáveis por doenças neurológicas nessas espécies. Neste estudo, a soroprevalência de infecção porS. neurona e Neospora spp. foi determinada em amostras de 333 soros de jumentos da Região Nordeste do Brasil. Anticorpos contra Neospora spp. foram detectados em 2% (7 jumentos) dos 333 animais examinados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 40. Anticorpos contra S. neurona foram detectados em 3% (10 jumentos) das amostras pela RIFI (ponto de corte de 50) e em 21% (69 jumentos) pela técnica de aglutinação direta (SAT - ponto de corte de 50). SAT e RIFI, para diagnóstico de S. neurona, apresentaram uma baixa concordância (Kappa = 0,051). Essa é a primeira observação de anticorpos anti-N. caninum em jumentos brasileiros e a primeira detecção de anticorpos contra S. neurona nessa espécie.
Resumo
Toxoplasmosis stands out as a global disease that has felines as definitive hosts. In the municipality of Natal, Rio Grande do Norte State, Brazil, two parks are notable for their ecological and social importance. This study aimed to investigate the presence of Toxoplasma gondii in short hair cats, bats and small non-volant mammals in these two ecological reserves. Altogether, biological samples were obtained from 154 mammals, 92 wild animals from both areas and 62 domestic cats of the Parque da Cidade. In total, 22 (53.7%) non-volant wild mammals, 11 (21.5%) bats and 28 (52.8%) cats were positive for IgG anti-T. gondii antibodies using the Modified Agglutination Test (≥ 25). It was possible to detect the presence of T. gondii DNA, by means of a molecular amplification of a B1 gene fragment (155bp), in 92 tissue samples from wild animals, including Didelphis albiventris, Monodelphis domestica, Artibeus lituratus, Carollia perspicillata and Glossophaga soricina. Of the 62 cats examined by the same molecular method, T. gondii DNA could be detected in 4 cats. In this study, it was observed the circulation of T. gondii in wild species and domestic cats, demonstrating the involvement of wild and domestic animals in the cycle of T. gondii.
Toxoplasmose destaca-se como uma doença global que tem felinos como hospedeiros definitivos. No município de Natal, Rio Grande do Norte, Brasil, dois parques são notáveis por sua importância ecológica e social. Este estudo teve como objetivo investigar a presença de Toxoplasma gondii em gatos de rua, morcegos e pequenos mamíferos não-voadores nestas duas reservas ecológicas. No total, as amostras biológicas foram obtidas de 154 mamíferos, 92 animais selvagens de ambas as áreas e 62 gatos domésticos do Parque da Cidade. No total, 22 (53,7%) mamíferos silvestres não-voadores, 11 (21,5%) morcegos e 28 (52,8%) gatos foram positivos para IgG anti-T. gondii utilizando o Teste de Aglutinação Modificado (≥ 25). Foi possível detectar a presença de DNA de T. gondii, por meio de uma amplificação molecular de um fragmento do gene B1 (155bp), em 92 amostras de tecido de animais selvagens, incluindo Didelphis albiventris, Monodelphis domestica, Artibeus lituratus, Carollia perspicillata e Glossophaga soricina. Dos 62 gatos examinadas pelo mesmo método molecular, DNA de T. gondii pode ser detectado em quatro gatos. Neste estudo, observou-se a circulação de T. gondii em espécies selvagens e gatos domésticos, demonstrando o envolvimento de animais domésticos e selvagens no ciclo de T. gondii.
Assuntos
Animais , Toxoplasmose Animal/diagnóstico , Animais Domésticos/parasitologia , Animais Selvagens/parasitologiaResumo
Dentre os protozoários de maior importância em saúde pública estão Cryptosporidium spp. e Giardia sp. pelo potencial zoonótico. Pesquisou-se a frequência de ocorrência desses parasitas em equídeos abatidos em um frigorífico no município de Araguari, Minas Gerais, durante o período de fevereiro a março de 2008, correlacionando com o sexo, espécie e procedência dos animais. Foram coletadas 150 amostras de fezes, utilizando-se técnicas coproparasitológicas específicas para a detecção de Cryptosporidium spp. e Giardia sp. Os resultados revelaram a presença de cistos de Giardia sp. em 4 % (6/150) das amostras. A porcentagem de fêmeas positivas foi 4,23% (3/71) e machos 3,80% (3/79). Entre os equídeos a porcentagem de positivos foi 10,53% (2/19) em muares e 3,05% (4/131) em equinos. Quanto à procedência dos animais positivos por estados brasileiros, a frequência foi 16,67% (1/6) na Bahia; 7,69% (1/13) em Tocantins; 3,61% (3/83) em Minas Gerais e 2,08% (1/48) em Goiás. Oocistos de Cryptosporidium spp. não foram encontrados em nenhuma das 150 amostras de fezes analisadas. Conclui-se que é importante estudar a frequência desses protozoários em equídeos, acrescentando dados à literatura, bem como sugerir estudos moleculares para pesquisar o genótipo circulante e, desse modo, associar com a epidemiologia desses protozoários e a saúde pública.
Cryptosporidium spp. and Giardia sp are protozoan of larger importance by their zoonotic potential. We studied the frequency of occurrence of these parasites in equidae from Araguari - Minas Gerais, slaughtered during February to March of 2008 and correlated with sex, species and origin. A total of 150 fecal samples were collected and specific techniques were used. The results showed 4% (6/150) of Giardia sp. in all the samples. The positivity was 4.23% (3/71) in females and 3.80% (3/79) in males. The positivity was 10.53% (2/19) in mules and 3.05% (4/131) in horses. The positive samples from Brazilian states was 16.67% (1/6) in Bahia, 7.69% (1/13) in Tocantins, 3.61% (3/83) in Minas Gerais and 2.08% (1/48) in Goiás. Cryptosporidium spp. were not found in any samples analyzed (n=150). We concluded that it is very important to study the frequency of these protozoans in horses, adding data to the; we also suggest molecular studies to associate with epidemiology and public health.
Assuntos
Animais , Cryptosporidium/isolamento & purificação , Equidae/parasitologia , Giardia/isolamento & purificaçãoResumo
Dentre os protozoários de maior importância em saúde pública estão Cryptosporidium spp. e Giardia sp. pelo potencial zoonótico. Pesquisou-se a frequência de ocorrência desses parasitas em equídeos abatidos em um frigorífico no município de Araguari, Minas Gerais, durante o período de fevereiro a março de 2008, correlacionando com o sexo, espécie e procedência dos animais. Foram coletadas 150 amostras de fezes, utilizando-se técnicas coproparasitológicas específicas para a detecção de Cryptosporidium spp. e Giardia sp. Os resultados revelaram a presença de cistos de Giardia sp. em 4 % (6/150) das amostras. A porcentagem de fêmeas positivas foi 4,23% (3/71) e machos 3,80% (3/79). Entre os equídeos a porcentagem de positivos foi 10,53% (2/19) em muares e 3,05% (4/131) em equinos. Quanto à procedência dos animais positivos por estados brasileiros, a frequência foi 16,67% (1/6) na Bahia; 7,69% (1/13) em Tocantins; 3,61% (3/83) em Minas Gerais e 2,08% (1/48) em Goiás. Oocistos de Cryptosporidium spp. não foram encontrados em nenhuma das 150 amostras de fezes analisadas. Conclui-se que é importante estudar a frequência desses protozoários em equídeos, acrescentando dados à literatura, bem como sugerir estudos moleculares para pesquisar o genótipo circulante e, desse modo, associar com a epidemiologia desses protozoários e a saúde pública.(AU)
Cryptosporidium spp. and Giardia sp are protozoan of larger importance by their zoonotic potential. We studied the frequency of occurrence of these parasites in equidae from Araguari - Minas Gerais, slaughtered during February to March of 2008 and correlated with sex, species and origin. A total of 150 fecal samples were collected and specific techniques were used. The results showed 4% (6/150) of Giardia sp. in all the samples. The positivity was 4.23% (3/71) in females and 3.80% (3/79) in males. The positivity was 10.53% (2/19) in mules and 3.05% (4/131) in horses. The positive samples from Brazilian states was 16.67% (1/6) in Bahia, 7.69% (1/13) in Tocantins, 3.61% (3/83) in Minas Gerais and 2.08% (1/48) in Goiás. Cryptosporidium spp. were not found in any samples analyzed (n=150). We concluded that it is very important to study the frequency of these protozoans in horses, adding data to the; we also suggest molecular studies to associate with epidemiology and public health.(AU)
Assuntos
Animais , Equidae/parasitologia , Giardia/isolamento & purificação , Cryptosporidium/isolamento & purificaçãoResumo
Toxoplasmosis is a zoonotic infection caused by Toxoplasma gondii that affects a wide range of vertebrates. Rodents are intermediate hosts and serve as food for felids, the definitive hosts. However, because of the high variety of species in the order Rodentia, the serological diagnosis is difficult to perform, since the most used techniques require the use of specific antibody conjugated to fluorescein or enzymes. The aim of this study was to evaluate the use of a heterologous secondary antibody conjugate in Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) for diagnosis of anti-T. gondii antibodies in two species of wild rodents: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) and Calomys callosus (RENGGER, 1830). The specie Mus musculus (Linnaeus, 1758) was used as control conjugate. The animals were experimentally infected with five cysts of T. gondii (strain ME 49) per animal. The Modified Agglutination Test (MAT), which does not require the use of conjugates, and the presence of T. gondii cysts in the rodents were used to confirm the infection. For each animal species, serum samples were collected weekly for five weeks and tested (50 samples per rodent specie, total of 150 samples). None of the samples from C. callosus and E. russatus were positive in the IFAT when anti-mouse heterologous conjugate was used. Brain cysts of T. gondii were microscopically observed in all animals, except in one of the E. russatus. Positive results were found in the MAT 14 days after T. gondii infection in all three species of rodents and IFAT of the control group (M. musculus) was also positive 14 days after infection using anti-mouse (homologous) conjugate. The use of heterologous secondary antibody conjugates should be used with caution and the MAT had a good agreement for serological diagnosis of T. gondii in the studied rodent species(AU)
A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, que afeta uma grande variedade de vertebrados. Os roedores são hospedeiros intermediários e servem de alimento para felinos, os hospedeiros definitivos. No entanto, por causa da elevada variedade de espécies na ordem Rodentia, o diagnóstico serológico é difícil de ser realizado, uma vez que as técnicas mais empregadas requerem a utilização de um anticorpo específico conjugado com fluoresceína ou enzimas. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de um conjugado secundário heterólogo na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para diagnóstico de anticorpos anti-T. gondii em duas espécies de roedores silvestres: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) e Calomys callosus (RENGGER, 1830). A espécie Mus musculus (Linnaeus, 1758) foi utilizada como controle do conjugado. As três espécies de roedores foram experimentalmente infectadas com cinco cistos de T. gondii (cepas ME 49) por animal. O Teste de Aglutinação Modificado (MAT), que não requer o uso de conjugados, bem como, a presença de cistos de T. gondii nos roedores foram usados para confirmar a infecção. Para cada espécie de animal, amostras de soro foram coletadas durante cinco semanas e testadas (50 amostras por espécie de roedor, total de 150 amostras). Nenhuma das amostras de C. callosus e E. russatus foram positivas na RIFI, quando foi usado o conjugado heterólogo anti-camundongo. Cistos cerebrais de T. gondii foram microscopicamente observados em todos os animais, exceto em um dos E. russatus. Resultados positivos foram encontrados pelo MAT após 14 dias de inoculação em todas as três espécies estudadas e pela RIFI no grupo controle (M. musculus), também no dia 14 após a infecção utilizando conjugado anti-camundongo. O uso de conjugados secundários heterólogos deve ser empregado com cautela e o MAT apresentou uma boa concordância para o diagnóstico sorológico de T. gondii nas espécies de roedores estudadas(AU)
Assuntos
Animais , Toxoplasma , Camundongos/imunologia , Anticorpos Heterófilos/administração & dosagem , Testes Sorológicos/veterinária , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterinária , Testes de Aglutinação/veterinária , Roedores/imunologiaResumo
For supporting the Brazilian bovine encephalitis surveillance program this study examined the differential diagnosis of Neospora caninum in central nervous system (CNS) by histological analysis (HE staining), immunohistochemistry (IHC), and nested-PCR using a set of primers from the Nc5 region of the genomic DNA and ITS1 region of the ribosomal DNA. A sample of 302 cattle presenting neurological syndrome and negative for rabies, aged 0 to 18 years, from herds in 10 Brazilian states was evaluated for N. caninum from January 2007 to April 2010. All specimens tested negative with IHC and nested-PCR using primers from the ITS1 region of ribosomal DNA, while two positive cases (0.66%) were found using primers from the Nc5 region of genomic DNA: a 20 month-old male and a 72 month-old female, both from São Paulo State. Only the male presented severe multifocal necrotizing encephalitis associated with mononuclear cell infiltration, a pathognomonic lesion caused by parasites of the family Sarcocystidae, and only this case was associated with N. caninum thus representing 0.33% positivity. Future studies should explore the association of IHC and nested-PCR with real-time PCR, a quantitative method that could be standardized for improving the detection of N. caninum in bovine CNS specimens.(AU)
Este estudo contribuiu para o programa de vigilância epidemiológica de encefalite bovina no Brasil realizando o diagnóstico diferencial de Neospora caninum no sistema nervoso central (SNC) por análise histológica (coloração HE), imunohistoquímica (IHC) e nested-PCR utilizando-se primers da região Nc5 do DNA genômico e da região ITS1 do DNA ribossomal. Um total de 302 amostras de bovinos com síndrome neurológica, negativos para raiva, na faixa etária de zero a 18 anos, provenientes de rebanhos de 10 estados brasileiros foi avaliada para N. caninum no período de janeiro/2007 a abril/2010. Todas as amostras foram negativas na IHC e na nested-PCR usando-se primers da região ITS1 do DNA ribossomal, enquanto dois casos (0,66%) foram positivos à nested PCR, usando-se primers da região Nc5 do DNA genômico: um macho de 20 meses de idade e uma fêmea de 72 meses de idade, ambos do Estado de São Paulo. Apenas o macho apresentou severa encefalite multifocal necrotizante associada com infiltrado inflamatório mononuclear, lesão patognomônica causada por parasitas da família Sarcocystidae, mostrando que apenas este caso de encefalite foi associado à infecção por N. caninum, representando 0,33% de positividade. Sugere-se em estudos futuros utilizar também a PCR em tempo real para detecção do parasito.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Doenças dos Bovinos/parasitologia , Coccidiose , Encefalite/veterinária , Neospora , Brasil , Diagnóstico Diferencial , Encefalite/diagnóstico , Encefalite/parasitologiaResumo
O trabalho relata a ocorrência de leucoencefalomalácia em equídeos (LEME) com sintomatologia nervosa e com diagnóstico negativo para raiva, herpesvírus equino e encefalomielite equina durante o período de dois anos, no Estado de São Paulo, Brasil. Foram examinadas 67 amostras de sistema nervoso central e em 10,4% (cinco equinos, um pônei e um asinino) observaram-se lesões macroscópicas de LEME, confirmadas pela análise histopatológica. Os animais acometidos eram cinco machos e duas fêmeas, com idades que variavam de 11 meses a nove anos. Os sete casos ocorreram tanto no inverno como em outras estações do ano. As principais manifestações clínicas relatadas foram incoordenação, ataxia, paralisia dos membros posteriores, profunda depressão, levando ao óbito. Macroscopicamente, observaram-se congestão dos vasos meníngeos, áreas de malácia da substância branca, caracterizadas por coloração amarelada e/ou hemorrágica, com cavitação e amolecimento circundados por hiperemia. As lesões microscópicas observadas em todos os casos eram de necrose de liquefação da substância branca do cérebro, caracterizada por substância eosinofílica amorfa e homogênea, presença de edema axonal e perivascular, hemorragia e vacuolização do neurópilo adjacente e esferoides axonais. Em algumas áreas de malácia havia também células Gitter. Em apenas um animal observou-se manguito perivascular mononuclear. O presente trabalho confirma que o diagnóstico diferencial é importante na distinção da LEME com outras neuropatias encefálicas que acometem equídeos. A ocorrência da LEME relatada neste estudo demonstra que esta enfermidade é importante para a equideocultura do Estado de São Paulo. (AU)
This article describes clinical and pathological findings of leukoencephalomalacia in equids with neurological signs which tested negative to rabies, equine herpesvirus and equine encephalomyelitis. This work was carried during the period of two years in São Paulo State, Brazil. A total of 67 brain samples were examined and in 10.4% (five equines, one poney, and one donkey) were observed gross lesions of ELEM, confirmed by histopathological analysis. The animals were five males and two females ranged from 11 months to nine years old. The seven cases happened in all seasons of the year. The most characteristic clinical signs were incoordination, ataxia, paralysis of the hind legs, profound depression and death. Necropsy was performed to collect brain samples for virological and histopathological diagnosis. Gross lesions included congestion of meningeal blood vessels, malacia of the white matter characterized by yellowish depressed areas sometimes hemorrhagic, with cavitations, and softening surrounded by hyperemic area. Microscopically, the lesions were liquefactive necrosis of the white matter brain, characterized by eosinophilic and amorphous material, axonal and perivascular edema, hemorrhage and vacuolization of the neuropil and axonal sferoids. Gitter cells were seen in some areas of malacia. Perivascular mononuclear cuffing was observed in only one case. The present study confirms that differential diagnosis is very important to distinguish equid neuropathies. The occurence of ELEM in the present study shows that the disease is important for the equideoculture in São Paulo State. (AU)
Assuntos
Animais , EquidaeResumo
Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5/'3/'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro.
The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5/'3/'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship.
Assuntos
Animais , Quirópteros/parasitologia , Sarcocystidae/classificação , Testes Sorológicos/métodos , Toxoplasma/genética , Toxoplasma/isolamento & purificação , Interações Hospedeiro-Parasita/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/veterináriaResumo
Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro. (AU)
The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship. (AU)