Andrologia e criopreservação de sêmen em cães / Andrology and dog semen cryopreservation

O objetivo dessa revisão foi apresentar os aspectos relevantes para avaliação reprodutiva do cãoreprodutor e fatores inerentes à congelação de sêmen canino. O exame andrológico é indicado na avaliação dacapacidade fértil do cão previamente à cópula, inseminação artificial, e/ou conservação do material genético,bem como na seleção de reprodutores e no diagnóstico de infertilidade e suas causas. Composto principalmentepor anamnese, exame físico completo, avaliação do comportamento sexual, espermograma e examescomplementares. Durante o exame físico deve-se atentar para doenças congênitas hereditárias, bem como daruma atenção especial aos testículos e epidídimos. O espermograma constitui parte importantíssima no exameandrológico, desta forma, a avaliação do macho deve ser realizada por um médico veterinário especializado naárea para um diagnóstico preciso. Em relação à criopreservação de sêmen na espécie canina, assim como emoutras espécies, depende de fatores como diluidor, crioprotetores, velocidade de congelação/descongelação,dentre outros. Apesar do progresso na criopreservação de sêmen canino, tal biotécnica merece uma maioratenção no que diz respeito a fatores inerentes ao ejaculado, o que leva a insucesso na preservação da qualidadeespermática.(AU)

The objective of this review was to present the relevant aspects to reproductive evaluation of thebreeder male dog and factors involved in canine semen freezing. The breeding soundness examination isindicated in evaluation of dog breeding potential prior to copulation, artificial insemination, and/or geneticmaterial conservation, as well as in sire selection and diagnosis of infertility and its causes. Mainly composed byanamnesis, complete physical examination, assessment of sexual behavior, semen analysis and complementarytests. During the physical examination, some attention should be paid to hereditary congenital diseases, as wellas a special attention to the testis and epididymis. Semen analysis is a very important part of the breedingsoundness examination, therefore, the evaluation of the male should be performed by a veterinarian specializedfor an accurate diagnosis. Regarding semen cryopreservation in dogs, as in other species, it depends on factorssuch as extender, cryoprotectants, freezing/ thawing rates, among others. Despite progress in cryopreservationof canine semen, such biotechnical deserves greater attention regarding the inherent ejaculate factors, whichleads to failure in preserving sperm quality.(AU)

Andrologia e criopreservação de sêmen em cães / Andrology and dog semen cryopreservation

O objetivo dessa revisão foi apresentar os aspectos relevantes para avaliação reprodutiva do cãoreprodutor e fatores inerentes à congelação de sêmen canino. O exame andrológico é indicado na avaliação dacapacidade fértil do cão previamente à cópula, inseminação artificial, e/ou conservação do material genético,bem como na seleção de reprodutores e no diagnóstico de infertilidade e suas causas. Composto principalmentepor anamnese, exame físico completo, avaliação do comportamento sexual, espermograma e examescomplementares. Durante o exame físico deve-se atentar para doenças congênitas hereditárias, bem como daruma atenção especial aos testículos e epidídimos. O espermograma constitui parte importantíssima no exameandrológico, desta forma, a avaliação do macho deve ser realizada por um médico veterinário especializado naárea para um diagnóstico preciso. Em relação à criopreservação de sêmen na espécie canina, assim como emoutras espécies, depende de fatores como diluidor, crioprotetores, velocidade de congelação/descongelação,dentre outros. Apesar do progresso na criopreservação de sêmen canino, tal biotécnica merece uma maioratenção no que diz respeito a fatores inerentes ao ejaculado, o que leva a insucesso na preservação da qualidadeespermática.

The objective of this review was to present the relevant aspects to reproductive evaluation of thebreeder male dog and factors involved in canine semen freezing. The breeding soundness examination isindicated in evaluation of dog breeding potential prior to copulation, artificial insemination, and/or geneticmaterial conservation, as well as in sire selection and diagnosis of infertility and its causes. Mainly composed byanamnesis, complete physical examination, assessment of sexual behavior, semen analysis and complementarytests. During the physical examination, some attention should be paid to hereditary congenital diseases, as wellas a special attention to the testis and epididymis. Semen analysis is a very important part of the breedingsoundness examination, therefore, the evaluation of the male should be performed by a veterinarian specializedfor an accurate diagnosis. Regarding semen cryopreservation in dogs, as in other species, it depends on factorssuch as extender, cryoprotectants, freezing/ thawing rates, among others. Despite progress in cryopreservationof canine semen, such biotechnical deserves greater attention regarding the inherent ejaculate factors, whichleads to failure in preserving sperm quality.

Análise da integridade de membrana de espermatozoides extraídos de fragmentos frescos de testículos de cães / Sperm membrane integrity analysis from dog fresh testis

To evaluate testicular tissue before cryopreservation is important to quantify and qualify losses ofsperm during the freezing/thawing of testicular tissue. The aim of this study was to analyze the sperm plasmamembrane structural and functional integrity on post-pubertal dogs (n = 7) fresh testis. The sperm fromtesticular tissue were submitted to plasma membrane structural and functional integrity analysis by fluorescentmicroscopy using SYBR 14 and Propidium Iodide and the hiposmotic test, respectively. For statistical analysis,it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (R 3.3.1; P > 0.05). It was observed 94.9% and91.8% spermatozoa presenting structural and functional integrity, respectively. Thus, analysis of the membraneintegrity is an important tool to analyze spermatozoa extracted from testicles. Despite the fluorescence be apractical method, it has a high cost.(AU)

Análise da integridade de membrana de espermatozoides extraídos de fragmentos frescos de testículos de cães / Sperm membrane integrity analysis from dog fresh testis

To evaluate testicular tissue before cryopreservation is important to quantify and qualify losses ofsperm during the freezing/thawing of testicular tissue. The aim of this study was to analyze the sperm plasmamembrane structural and functional integrity on post-pubertal dogs (n = 7) fresh testis. The sperm fromtesticular tissue were submitted to plasma membrane structural and functional integrity analysis by fluorescentmicroscopy using SYBR 14 and Propidium Iodide and the hiposmotic test, respectively. For statistical analysis,it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (R 3.3.1; P > 0.05). It was observed 94.9% and91.8% spermatozoa presenting structural and functional integrity, respectively. Thus, analysis of the membraneintegrity is an important tool to analyze spermatozoa extracted from testicles. Despite the fluorescence be apractical method, it has a high cost.

Azul de toluidina como método para avaliação da integridade da cromatina de espermatozoides canino extraídos do tecido testicular fresco / Toluidine blue as a method for assessment of chromatin integrity canine spermatozoa extracted from fresh testicular tissue

Conservation of gonadal tissue is important for maintenance of endangered wild species. However, thepreservation can lead to cell damage and loss. Thus, it is necessary testicular tissue evaluation before and afterstorage in order to determine damage. The evaluation of sperm chromatin integrity ensures a better assessmentof sperm quality. The toluidine blue is a simple and sensitive test to evaluate the sperm chromatin integrity fromseveral species, but there are not reports in the dog. The aim of this study was evaluating canine spermatozoaextracted from fresh testicular tissue of seven post-pubertal mongrel dogs by toluidine blue and spermmorphology. For statistical analysis, it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (P<0.05).Toluidine blue showed 83% condensed chromatin. Morphological analysis presented 69.34% normalspermatozoa. Toluidine blue was sensitive for the evaluation. However, it still needs some adjustments for amore accurate result for such specie.(AU)

Azul de toluidina como método para avaliação da integridade da cromatina de espermatozoides canino extraídos do tecido testicular fresco / Toluidine blue as a method for assessment of chromatin integrity canine spermatozoa extracted from fresh testicular tissue

Conservation of gonadal tissue is important for maintenance of endangered wild species. However, thepreservation can lead to cell damage and loss. Thus, it is necessary testicular tissue evaluation before and afterstorage in order to determine damage. The evaluation of sperm chromatin integrity ensures a better assessmentof sperm quality. The toluidine blue is a simple and sensitive test to evaluate the sperm chromatin integrity fromseveral species, but there are not reports in the dog. The aim of this study was evaluating canine spermatozoaextracted from fresh testicular tissue of seven post-pubertal mongrel dogs by toluidine blue and spermmorphology. For statistical analysis, it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (P<0.05).Toluidine blue showed 83% condensed chromatin. Morphological analysis presented 69.34% normalspermatozoa. Toluidine blue was sensitive for the evaluation. However, it still needs some adjustments for amore accurate result for such specie.(AU)

Comparação entre diferentes concentrações de gema de ovo na qualidade de espermatozoides epididimários caninos resfriados a 4°C / Comparison between different egg yolk concentrations on canine epipdidymal spermatozoa cooled at 4ºC

The epididymal spermatozoa recovering allow reproduction even with the death of a breeder. Using aproper extender is important and ACP-106c®extender presented good results for canine ejaculate. Egg yolk hasbeen used as a protective membrane against thermal shock, being necessary to determine optimal concentrationfor dog epididymal spermatozoa using ACP-106c®. Thirteen pairs of epididymis were used and spermatozoawere recovered by epididymal tail compression by glass blade. ACP-106® was used as extender and the sampleswere divided into 3 different concentrations of egg yolk (0, 10 or 20%), then analyzes of motility (%) and vigour(0-5) were made at times 0, 60, 120 and 180 minutes as well as after 24 hours. There was no difference in theevaluation of motility and vigour between the three egg yolk concentrations. The concentration of 20% egg yolkshowed higher number of functional membrane.(AU)

Azul de toluidina como método para avaliação da integridade da cromatina de espermatozoides canino extraídos do tecido testicular fresco / Toluidine blue as a method for assessment of chromatin integrity canine spermatozoa extracted from fresh testicular tissue

Conservation of gonadal tissue is important for maintenance of endangered wild species. However, thepreservation can lead to cell damage and loss. Thus, it is necessary testicular tissue evaluation before and afterstorage in order to determine damage. The evaluation of sperm chromatin integrity ensures a better assessmentof sperm quality. The toluidine blue is a simple and sensitive test to evaluate the sperm chromatin integrity fromseveral species, but there are not reports in the dog. The aim of this study was evaluating canine spermatozoaextracted from fresh testicular tissue of seven post-pubertal mongrel dogs by toluidine blue and spermmorphology. For statistical analysis, it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (P<0.05).Toluidine blue showed 83% condensed chromatin. Morphological analysis presented 69.34% normalspermatozoa. Toluidine blue was sensitive for the evaluation. However, it still needs some adjustments for amore accurate result for such specie.

Comparação entre diferentes concentrações de gema de ovo na qualidade de espermatozoides epididimários caninos resfriados a 4°C / Comparison between different egg yolk concentrations on canine epipdidymal spermatozoa cooled at 4ºC

The epididymal spermatozoa recovering allow reproduction even with the death of a breeder. Using aproper extender is important and ACP-106c®extender presented good results for canine ejaculate. Egg yolk hasbeen used as a protective membrane against thermal shock, being necessary to determine optimal concentrationfor dog epididymal spermatozoa using ACP-106c®. Thirteen pairs of epididymis were used and spermatozoawere recovered by epididymal tail compression by glass blade. ACP-106® was used as extender and the sampleswere divided into 3 different concentrations of egg yolk (0, 10 or 20%), then analyzes of motility (%) and vigour(0-5) were made at times 0, 60, 120 and 180 minutes as well as after 24 hours. There was no difference in theevaluation of motility and vigour between the three egg yolk concentrations. The concentration of 20% egg yolkshowed higher number of functional membrane.

Azul de toluidina como método para avaliação da integridade da cromatina de espermatozoides canino extraídos do tecido testicular fresco / Toluidine blue as a method for assessment of chromatin integrity canine spermatozoa extracted from fresh testicular tissue

Conservation of gonadal tissue is important for maintenance of endangered wild species. However, thepreservation can lead to cell damage and loss. Thus, it is necessary testicular tissue evaluation before and afterstorage in order to determine damage. The evaluation of sperm chromatin integrity ensures a better assessmentof sperm quality. The toluidine blue is a simple and sensitive test to evaluate the sperm chromatin integrity fromseveral species, but there are not reports in the dog. The aim of this study was evaluating canine spermatozoaextracted from fresh testicular tissue of seven post-pubertal mongrel dogs by toluidine blue and spermmorphology. For statistical analysis, it was used normality test (Shapiro Wilk) and Wilcoxon test (P<0.05).Toluidine blue showed 83% condensed chromatin. Morphological analysis presented 69.34% normalspermatozoa. Toluidine blue was sensitive for the evaluation. However, it still needs some adjustments for amore accurate result for such specie.

Terapêutica hormonal aplicada à reprodução na cadela / Hormonal therapy applied to reproduction in the bitch

Tradicionalmente, quando se discutia a respeito da reprodução na cadela, objetivava-se apenas a contracepção seja de forma cirúrgica ou através do uso de progestágenos de longa duração. No entanto, com a criação comercial de cães ganhando um destaque no cenário internacional, busca-se incrementar o potencial reprodutivo dos animais, bem como tratar condições reprodutivas que prejudicassem a fertilidade de cadelas e antes resolvidas apenas com uso de cirurgias e interrompendo de forma definitiva a capacidade reprodutiva de tais pacientes. Dentre as classes hormonais mais recentes, destaca-se o uso de bloqueadores dos receptores de progesterona, que já está há aproximadamente 15 anos no mercado e tem uso indicado para tratamento de patologias uterinas como metrite, piometra, bem como indução de parto e interrupção da gestação. Por outro lado, os agonistas do GnRH como a deslorelina agem suprimindo o estro e podem ser utilizados em cadelas nas quais se deseje a contracepção temporária, mas sem os possíveis efeitos colaterais dos progestágenos. Ao se indicar uma terapia à base de hormônios na qual se visa incrementar o potencial reprodutivo ou mesmo solucionar problemas que estejam prejudicando a fertilidade de cadelas, devem-se considerar a relação custo-benefício de tal tratamento.(AU)

Traditionally, discussing about the reproduction in dogs, is aimed only contraception, either surgically or through the use of progestogens of long duration. However, dog commercial breeding gaining a highlight on the international scene, we seek to increase the reproductive potential of animals and treat reproductive conditions that damage the fertility before resolved only using surgery and stopping permanently reproductive capacity of these patients. Among the newer hormone classes, we highlight the use of progesterone receptor blockers, which is commercially available for about 15 years and use has indicated for treatment of uterine pathologies such as metritis, pyometra, as well as induction of labor and termination of gestation. On the other hand, GnRH agonists, such as deslorelin, act by suppressing the oestrous and can be used in dogs in which contraception is desired temporary, but without the potential side effects of progestins. When indicating a hormone-based therapy in which it aims to increase the reproductive potential or even solve problems that are harming the fertility of bitches, one must consider the cost-benefit of such treatment.(AU)

Terapêutica hormonal aplicada à reprodução na cadela / Hormonal therapy applied to reproduction in the bitch

Tradicionalmente, quando se discutia a respeito da reprodução na cadela, objetivava-se apenas a contracepção seja de forma cirúrgica ou através do uso de progestágenos de longa duração. No entanto, com a criação comercial de cães ganhando um destaque no cenário internacional, busca-se incrementar o potencial reprodutivo dos animais, bem como tratar condições reprodutivas que prejudicassem a fertilidade de cadelas e antes resolvidas apenas com uso de cirurgias e interrompendo de forma definitiva a capacidade reprodutiva de tais pacientes. Dentre as classes hormonais mais recentes, destaca-se o uso de bloqueadores dos receptores de progesterona, que já está há aproximadamente 15 anos no mercado e tem uso indicado para tratamento de patologias uterinas como metrite, piometra, bem como indução de parto e interrupção da gestação. Por outro lado, os agonistas do GnRH como a deslorelina agem suprimindo o estro e podem ser utilizados em cadelas nas quais se deseje a contracepção temporária, mas sem os possíveis efeitos colaterais dos progestágenos. Ao se indicar uma terapia à base de hormônios na qual se visa incrementar o potencial reprodutivo ou mesmo solucionar problemas que estejam prejudicando a fertilidade de cadelas, devem-se considerar a relação custo-benefício de tal tratamento.

Traditionally, discussing about the reproduction in dogs, is aimed only contraception, either surgically or through the use of progestogens of long duration. However, dog commercial breeding gaining a highlight on the international scene, we seek to increase the reproductive potential of animals and treat reproductive conditions that damage the fertility before resolved only using surgery and stopping permanently reproductive capacityof these patients. Among the newer hormone classes, we highlight the use of progesterone receptor blockers, which is commercially available for about 15 years and use has indicated for treatment of uterine pathologies such as metritis, pyometra, as well as induction of labor and termination of gestation. On the other hand, GnRH agonists, such as deslorelin, act by suppressing the oestrous and can be used in dogs in which contraception is desired temporary, but without the potential side effects of progestins. When indicating a hormone-based therapy in which it aims to increase the reproductive potential or even solve problems that are harming the fertility of bitches, one must consider the cost-benefit of such treatment.

Infertilidade na cadela e na gata / Infertility in bitches and queens

Nas duas últimas décadas, o foco na área de reprodução de animais de companhia tem mudado, pois veterinários estão sendo procurados não somente para esterilização de animais e sim para solucionar problemas de infertilidade. Isto se deve a crescente popularidade de cães e gatos de raça pura, por razões financeiras ou mesmo afetiva. A maioria das cadelas e gatas que vão ao veterinário por ser supostamente inférteis é submetida a um manejo errado do seu ciclo reprodutivo. Os problemas de fertilidade em cadelas e gatas podem ainda estar relacionados com falhas na monta, problemas ovarianos, uterinos, bem como enfermidades que não envolvem diretamente o trato reprodutivo.

In the last two decades, the interest on reproduction of companion animals has been changed since veterinarians are requested not only for surgical sterilization of dogs and cats but to solve infertility problems. This fact is mainly due to the increased popularity of purebred dogs as well as for sentimental or financial reasons. The most of bitches and queens that are brought to veterinarian for be considered as infertile are subjected to a inappropriate breeding management. Infertility in dogs and cats females can be caused by failure on copule, ovarian disease, uterine disease and other problems not involving the reproductive system.

Infertilidade na cadela e na gata / Infertility in bitches and queens

Nas duas últimas décadas, o foco na área de reprodução de animais de companhia tem mudado, pois veterinários estão sendo procurados não somente para esterilização de animais e sim para solucionar problemas de infertilidade. Isto se deve a crescente popularidade de cães e gatos de raça pura, por razões financeiras ou mesmo afetiva. A maioria das cadelas e gatas que vão ao veterinário por ser supostamente inférteis é submetida a um manejo errado do seu ciclo reprodutivo. Os problemas de fertilidade em cadelas e gatas podem ainda estar relacionados com falhas na monta, problemas ovarianos, uterinos, bem como enfermidades que não envolvem diretamente o trato reprodutivo.(AU)

In the last two decades, the interest on reproduction of companion animals has been changed since veterinarians are requested not only for surgical sterilization of dogs and cats but to solve infertility problems. This fact is mainly due to the increased popularity of purebred dogs as well as for sentimental or financial reasons. The most of bitches and queens that are brought to veterinarian for be considered as infertile are subjected to a inappropriate breeding management. Infertility in dogs and cats females can be caused by failure on copule, ovarian disease, uterine disease and other problems not involving the reproductive system.(AU)

Comparação entre a água de coco em pó (ACP®) e o Tris como diluidores na criopreservação do sêmen de cães / Comparison between powder coconut water (ACP®) and Tris as extenders for canine semen cryopreservation

O presente trabalho comparou a água de coco em pó (ACP®) com o diluidor Tris na criopreservação do sêmen canino através da avaliação clássica e do teste de termorresistência. Cinco reprodutores caninos foram submetidos a duas coletas de sêmen através de manipulação digital As frações espermáticas foram avaliadas quanto à sua coloração, volume, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras de sêmen foram divididas em duas alíquotas: a primeira foi diluída em Tris e a segunda em ACP®. Ambos os diluidores continham 20% de gema de ovo. As amostras foram refrigeradas, adicionadas de glicerol (6%), envasadas em palhetas de 0,25mL, criopreservadas em vapores de nitrogênio, e finalmente armazenadas em nitrogênio líquido. Após uma semana, foi realizada a descongelação a 38°C por 1min em banho-maria, sendo realizadas novas avaliações de motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras foram mantidas a 38°C no banho-maria e avaliadas aos 15 e 30 min após descongelação. Não foram observadas diferenças significativas entre os dois diluidores no decorrer dos procedimentos de criopreservação e descongelação, bem como durante o teste de termorresistência, em relação às características avaliadas. O Tris e o ACP® foram eficientes em conservar 50% de espermatozóides móveis e 70% de espermatozóides morfologicamente normais após a descongelação. Assim, o ACP® pode ser utilizado como diluidor alternativo para a criopreservação do sêmen canino.(AU)

The present study compared powder coconut water (ACP®) and Tris extenders on canine semen cryopreservation by classic evaluation and thermoresistance test. Five stud dogs were submitted to two semen collections by digital manipulation. Sperm fractions were analyzed regarding to its color, volume, sperm concentration, motility, vigor and morphology. Semen samples were divided into two aliquots: the first one was extended in Tris and second one in ACP®. Both extenders contained 20% egg yolk. Samples were cooled to 5°C, glycerol added (6%), packaged in 0.25mL straws, frozen in nitrogen vapors and finally stored in liquid nitrogen. One week later, thaw was performed at 38°C per 1 min in water bath and new evaluations of sperm motility, vigor and morphology were conducted. Samples were kept at 38°C in water bath and evaluated at 15 and 30rnin after thaw. No significant difference was observed between extenders throughout cryopreservation or thawing procedures, as well as during thermoresistance test, concerning to characteristics evaluated. Tris and ACP® were efficient in conserving 50% mobile spermatozoa and 70% morphologically normal sperm after thaw. Thus, ACP® can be used as an alternative extender for canine semen cryopreservation.(AU)

Características in vitro do espermatozóide canino criopreservado em água de coco

A avaliação do sêmen geralmente inclui a análise da motilidade, vigor e morfologia espermática. Porém, para conhecer a extensão dos danos causados à célula espermática e aperfeiçoar os métodos de criopreservação, é de grande importância a análise de outros parâmetros. Dessa forma, o objetivo geral desta tese foi avaliar in vitro a eficácia de um diluente à base de água de côco em pó (ACP-106) na manutenção da qualidade do sêmen canino pós-descongelação. Por isso, o estudo foi dividio em quatro etapas. Na primeira etapa, foi realizada uma comparação entre o método de diluição fixa do sêmen com o de concentração fixa, utilizando os diluentes à base de água de côco in natura (ACIN) e ACP-106. Na segunda etapa, foi observado o efeito do armazenamento a -10°C sobre a eficiência do ACP-106 e o efeito da diluição pós-descongelação. Na terceira e quarta etapas, o9 sêmen congelado foi avaliado pelo teste de interação espermatozóide-oócito, análise computadorizada da motilidade, integridade dde membrana e avaliação morfológica pela microscopia eletrônica de transmissão. O ACP-106 mostrou-se eficiente em comparação com o ACIN, podendo ser utilizada a diluição 1:1 ou a uma concentração espermática de 200 milhões de espermatozóides/mL. Não houve influência do armazenamento a -10°C sobre a eficiência do ACP-106 e a diluição pós-descongelação sobre a longevidade espermática p´[os-descongelação. O proecedimento de congelação-descongelação utilizando ACP-106 foi eficiente na manutenção do potencial fertilizante do espérmatozóide canino in vitro, mantendo não somente a sua capacidade de se ligar, mas também de penetrar na zona pelúicida