Influência da contagem de folículos antrais na produção in vitro de embriões bovinos de doadoras Bos indicus e Bos taurus Revisão de literatura / Influence of the antral follicle count on bovine in vitro embryo production from Bos indicus and Bos taurus donors

A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotécnica que se consolidou nos últimos anos e seu uso em bovinos continua a expandir-se, especialmente no Brasil. A facilidade em obter oócitos e as características do rebanho brasileiro foram determinantes para este crescimento. É conhecido que animais Bos taurus indicus e Bos taurus taurus possuem diferenças fisiológicas, metabólicas, endócrinas e comportamentais que impactam diretamente a reprodução. Além disso, a contagem de folículos antrais (CFA) é um parâmetro conhecidamente repetível no indivíduo, mas seu impacto na reprodução das fêmeas ainda não está completamente elucidado, especialmente considerando suas interações com a subespécie. O objetivo da presente revisão é destacar os mecanismos pelos quais estas características influenciam o rendimento e aplicabilidade da produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

In vitro embryo production (IVP) is a well stablished biotechnic, and its use in bovines is still expanding, especially in Brazil. The facility to obtain oocytes associated to the breed characteristics of the Brazilian herd were decisive for this expansion. It is known that the physiology, metabolism, endocrinal system and behavior are different for Bos taurus indicus and Bos taurus taurus animals, and these differences may impact directly on the characteristics of reproduction of these animals. Furthermore, the antral follicle count (AFC) is known to present high repeatability on the same female, but its impact on the female reproduction remains unclear, either in the interaction between AFC and subspecies. The aim of this review is to highlight the mechanisms through which the AFC and subspecies may influence the income and feasibility of bovine in vitro embryo production.(AU)

Influência da contagem de folículos antrais na produção in vitro de embriões bovinos de doadoras Bos indicus e Bos taurus – Revisão de literatura / Influence of the antral follicle count on bovine in vitro embryo production from Bos indicus and Bos taurus donors

A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotécnica que se consolidou nos últimos anos e seu uso em bovinos continua a expandir-se, especialmente no Brasil. A facilidade em obter oócitos e as características do rebanho brasileiro foram determinantes para este crescimento. É conhecido que animais Bos taurus indicus e Bos taurus taurus possuem diferenças fisiológicas, metabólicas, endócrinas e comportamentais que impactam diretamente a reprodução. Além disso, a contagem de folículos antrais (CFA) é um parâmetro conhecidamente repetível no indivíduo, mas seu impacto na reprodução das fêmeas ainda não está completamente elucidado, especialmente considerando suas interações com a subespécie. O objetivo da presente revisão é destacar os mecanismos pelos quais estas características influenciam o rendimento e aplicabilidade da produção in vitro de embriões bovinos.

In vitro embryo production (IVP) is a well stablished biotechnic, and its use in bovines is still expanding, especially in Brazil. The facility to obtain oocytes associated to the breed characteristics of the Brazilian herd were decisive for this expansion. It is known that the physiology, metabolism, endocrinal system and behavior are different for Bos taurus indicus and Bos taurus taurus animals, and these differences may impact directly on the characteristics of reproduction of these animals. Furthermore, the antral follicle count (AFC) is known to present high repeatability on the same female, but its impact on the female reproduction remains unclear, either in the interaction between AFC and subspecies. The aim of this review is to highlight the mechanisms through which the AFC and subspecies may influence the income and feasibility of bovine in vitro embryo production.

Injectable progesterone in timed artificial insemination programs in beef cows

The aims of this study were I) to compare the follicular diameter, corpus luteum diameter and serum progesterone (P4) concentrations in cows treated with conventional protocol vs. injectable P4 protocol; II) to determine the serum P4 profile in ovariectomized heifers; and III) to compare pregnancy rate between protocols. In experiment I, multiparous cows received a protocol for ovulation synchronization with an intravaginal P4 device (n = 38; device + EB day 0; device removal + PGF2α + eCG + EC day 8) or injectable P4 (n = 38; injection + EB day 0; PGF2α + eCG + EC day 8). In experiment II, ovariectomized heifers (n = 8) were treated with injectable P4 and blood samples were collected to determine the serum P4 profile. In experiment III, multiparous cows were timed AI with two different P4 approaches, intravaginal P4 device (n = 48) or injectable P4 (n = 47). In the first experiment, cows treated with P4 device had higher (P < 0.05) diameter of dominant follicle after ovulation induction (11.6 ± 1.8 vs.10.3 ± 1.8 mm) and ovulation rate (97%, 37/38 vs. 47.3%, 18/38) than cows treated with injectable P4. But, the follicular growth daily was higher (P < 0.05) in cows treated with injectable P4 than intravaginal device (1.3 ± 0.4 vs. 1.0 ± 0.3 mm/day, respectively). In experiment II, the P4 concentration peak occurred within 48 hours (6.54 ng/mL) and decreased after 96 hours (P < 0.05) after P4 injection. In experiment III, cows with P4 device had higher (P < 0.05) pregnancy rate than the injectable P4 group (60.4 vs. 34.0%, respectively). These results demonstrate that although the intravaginal P4 devices showed a higher pregnancy rate, a protocol with injectable P4 represents an easier method and a promising alternative for TAI in cattle.(AU)

Injectable progesterone in timed artificial insemination programs in beef cows

The aims of this study were I) to compare the follicular diameter, corpus luteum diameter and serum progesterone (P4) concentrations in cows treated with conventional protocol vs. injectable P4 protocol; II) to determine the serum P4 profile in ovariectomized heifers; and III) to compare pregnancy rate between protocols. In experiment I, multiparous cows received a protocol for ovulation synchronization with an intravaginal P4 device (n = 38; device + EB day 0; device removal + PGF2α + eCG + EC day 8) or injectable P4 (n = 38; injection + EB day 0; PGF2α + eCG + EC day 8). In experiment II, ovariectomized heifers (n = 8) were treated with injectable P4 and blood samples were collected to determine the serum P4 profile. In experiment III, multiparous cows were timed AI with two different P4 approaches, intravaginal P4 device (n = 48) or injectable P4 (n = 47). In the first experiment, cows treated with P4 device had higher (P < 0.05) diameter of dominant follicle after ovulation induction (11.6 ± 1.8 vs.10.3 ± 1.8 mm) and ovulation rate (97%, 37/38 vs. 47.3%, 18/38) than cows treated with injectable P4. But, the follicular growth daily was higher (P < 0.05) in cows treated with injectable P4 than intravaginal device (1.3 ± 0.4 vs. 1.0 ± 0.3 mm/day, respectively). In experiment II, the P4 concentration peak occurred within 48 hours (6.54 ng/mL) and decreased after 96 hours (P < 0.05) after P4 injection. In experiment III, cows with P4 device had higher (P < 0.05) pregnancy rate than the injectable P4 group (60.4 vs. 34.0%, respectively). These results demonstrate that although the intravaginal P4 devices showed a higher pregnancy rate, a protocol with injectable P4 represents an easier method and a promising alternative for TAI in cattle.

Evaluation of pregnancy rates of Bos indicus cows subjected to different synchronization ovulation protocols using injectable progesterone or an intravaginal device / Avaliação da taxa de prenhez de vacas Bos indicus submetidas a sincronização da ovulação com diferentes protocolos a base de progesterona injetável ou dispositivo intravaginal

This study evaluated the pregnancy rate in Nelore cows (Bos indicus) that were subjected to fixedtime artificial insemination (FTAI) using different protocols consisting of injectable progesterone (P4) or an intravaginal device (impregnated with P4). Multiparous cows 72-84 months in age, 30-45 days postpartum, were selected on the basis of the absence of a corpus luteum (CL) and follicles <8 mm after transrectal palpation and ultrasound examinations. On a random day of the estrus cycle (D0), the selected animals (n = 135) were randomly assigned to one of three experimental groups (n = 45 each). Group I (injectable P4/FTAI 36 hours) received 250 mg of injectable P4 and 2 mg EB on D0; on D7, they received 500 μg of cloprostenol; on D8, 300 IU of eCG and 1 mg of EB were administered; and finally, FTAI was performed 36 hours after the application of EB. Group II (injectable P4/FTAI 48 hours) received the same protocol as Group I, except that the FTAI was performed 48 hours after ovulation induction. The animals of Group III (Control/CIDR) received a conventional protocol for FTAI using an intravaginal device (D0: P4 and 2 mg EB; D8: device removal, 500 μg cloprostenol, 300 IU eCG, 1 mg EB; and FTAI performed 48 hours after removal of the device). The results showed that cows synchronized with the conventional protocol for FTAI (Control/CIDR) had a higher pregnancy rate (60 %, 27/45) than those synchronized with an injectable P4/FTAI 36 hours (33.33 %; 15/45, P = 0.010). However, the group receiving injectable P4 group/FTAI 48 hours had a similar pregnancy rate (48.9 %; 22/45; P = 0.290) when compared to both the group receiving the conventional protocol and that receiving injectable P4/FTAI 36 hours (P = 0.134).[...]

Este estudo avaliou a taxa de prenhez de vacas Nelore (Bos indicus) submetidas a diferentes protocolos de IATF a base de progesterona (P4) injetável ou dispositivo intravaginal impregnado com P4. Vacas multíparas entre 72 e 84 meses de idade, com 30 a 45 dias pós-parto foram previamente selecionadas com base na ausência de corpo lúteo (CL) e folículos < 8 mm após palpação e exame ultrassonográfico transretal. Em um dia aleatório do ciclo estral (D0), os animais selecionados (N = 135) foram aleatoriamente distribuídos em um dos três grupos experimentais (n = 45 / grupo). O grupo I (P4 injetável/IATF 36 horas) recebeu 250 mg de P4 injetável e 2 mg BE no D0. No D7 aplicou-se 500 μg de Cloprostenol. No D8 300 UI de eCG e 1 mg de BE foram administrados, sendo que a IATF foi realizada 36 horas após a aplicação do BE. O grupo II (P4 injetável/IATF 48 horas) recebeu o mesmo protocolo, exceto pela IATF que foi realizada 48 horas após indução da ovulação. Os animais do grupo III (Controle/CIDR) receberam um protocolo convencional de IATF com dispositivo intravaginal (D0 - P4 e 2 mg BE, D8 - remoção do dispositivo, 500 μg Cloprostenol, 300 UI eCG, 1 mg BE e IATF realizada 48 horas após a remoção dos dispositivos). Os resultados foram analisados pelo teste do Qui-Quadrado (p ≤ 0,05). No estudo, as vacas sincronizadas com protocolo convencional de IATF (Controle/ CIDR) apresentaram maior taxa de prenhez (60%; 27/45) do que aquelas submetidas à sincronização da ovulação com P4 injetável/IATF 36 horas (33,33%; 15/45; p = 0,01). Porém, o grupo P4 injetável/ IATF 48 horas demonstrou uma taxa de prenhez semelhante (48, 9%; 22/45; p = 0,290) ao grupo com protocolo convencional e ao grupo de P4 Injetável/IATF 36 horas (p = 0,134). Embora a P4 injetável demonstrou afetar a taxa de prenhez com à IATF realizada em 36 horas, as vacas inseminadas 48 horas após a indução da ovulação apresentaram taxas semelhantes às vacas que receberam dispositivo intravaginal.[...]

Evaluation of pregnancy rates of Bos indicus cows subjected to different synchronization ovulation protocols using injectable progesterone or an intravaginal device / Avaliação da taxa de prenhez de vacas Bos indicus submetidas a sincronização da ovulação com diferentes protocolos a base de progesterona injetável ou dispositivo intravaginal

This study evaluated the pregnancy rate in Nelore cows (Bos indicus) that were subjected to fixedtime artificial insemination (FTAI) using different protocols consisting of injectable progesterone (P4) or an intravaginal device (impregnated with P4). Multiparous cows 72-84 months in age, 30-45 days postpartum, were selected on the basis of the absence of a corpus luteum (CL) and follicles <8 mm after transrectal palpation and ultrasound examinations. On a random day of the estrus cycle (D0), the selected animals (n = 135) were randomly assigned to one of three experimental groups (n = 45 each). Group I (injectable P4/FTAI 36 hours) received 250 mg of injectable P4 and 2 mg EB on D0; on D7, they received 500 μg of cloprostenol; on D8, 300 IU of eCG and 1 mg of EB were administered; and finally, FTAI was performed 36 hours after the application of EB. Group II (injectable P4/FTAI 48 hours) received the same protocol as Group I, except that the FTAI was performed 48 hours after ovulation induction. The animals of Group III (Control/CIDR) received a conventional protocol for FTAI using an intravaginal device (D0: P4 and 2 mg EB; D8: device removal, 500 μg cloprostenol, 300 IU eCG, 1 mg EB; and FTAI performed 48 hours after removal of the device). The results showed that cows synchronized with the conventional protocol for FTAI (Control/CIDR) had a higher pregnancy rate (60 %, 27/45) than those synchronized with an injectable P4/FTAI 36 hours (33.33 %; 15/45, P = 0.010). However, the group receiving injectable P4 group/FTAI 48 hours had a similar pregnancy rate (48.9 %; 22/45; P = 0.290) when compared to both the group receiving the conventional protocol and that receiving injectable P4/FTAI 36 hours (P = 0.134).[...](AU)

Este estudo avaliou a taxa de prenhez de vacas Nelore (Bos indicus) submetidas a diferentes protocolos de IATF a base de progesterona (P4) injetável ou dispositivo intravaginal impregnado com P4. Vacas multíparas entre 72 e 84 meses de idade, com 30 a 45 dias pós-parto foram previamente selecionadas com base na ausência de corpo lúteo (CL) e folículos < 8 mm após palpação e exame ultrassonográfico transretal. Em um dia aleatório do ciclo estral (D0), os animais selecionados (N = 135) foram aleatoriamente distribuídos em um dos três grupos experimentais (n = 45 / grupo). O grupo I (P4 injetável/IATF 36 horas) recebeu 250 mg de P4 injetável e 2 mg BE no D0. No D7 aplicou-se 500 μg de Cloprostenol. No D8 300 UI de eCG e 1 mg de BE foram administrados, sendo que a IATF foi realizada 36 horas após a aplicação do BE. O grupo II (P4 injetável/IATF 48 horas) recebeu o mesmo protocolo, exceto pela IATF que foi realizada 48 horas após indução da ovulação. Os animais do grupo III (Controle/CIDR) receberam um protocolo convencional de IATF com dispositivo intravaginal (D0 - P4 e 2 mg BE, D8 - remoção do dispositivo, 500 μg Cloprostenol, 300 UI eCG, 1 mg BE e IATF realizada 48 horas após a remoção dos dispositivos). Os resultados foram analisados pelo teste do Qui-Quadrado (p ≤ 0,05). No estudo, as vacas sincronizadas com protocolo convencional de IATF (Controle/ CIDR) apresentaram maior taxa de prenhez (60%; 27/45) do que aquelas submetidas à sincronização da ovulação com P4 injetável/IATF 36 horas (33,33%; 15/45; p = 0,01). Porém, o grupo P4 injetável/ IATF 48 horas demonstrou uma taxa de prenhez semelhante (48, 9%; 22/45; p = 0,290) ao grupo com protocolo convencional e ao grupo de P4 Injetável/IATF 36 horas (p = 0,134). Embora a P4 injetável demonstrou afetar a taxa de prenhez com à IATF realizada em 36 horas, as vacas inseminadas 48 horas após a indução da ovulação apresentaram taxas semelhantes às vacas que receberam dispositivo intravaginal.[...](AU)

Effect of fixative type and fixation time on the morphology of equine preantral ovarian follicles / Efeito do tipo de fixador e tempo de fixação na morfologia de folículos pré-antrais equinos

The aim of this study was to investigate the efficacy of the tissue fixatives Bouin, Carnoy and 10% Formaldehyde in equine ovarian fragments. Ovaries (n=4) from mares of mixed breeds were obtained at a local slaughterhouse and transported at 20 ºC in a thermo container. Immediately after collection, the ovaries were washed with a modified PBS solution (Cultilab®, Campinas-SP, Brazil) and divided into nine fragments with approximately 5x5x1 mm, removed from the parenchyma of each ovary. The ovarian fragments were then immersed in three different fixatives, Bouin (B) Carnoy (C) or 10% Formaldehyde (F) for 6, 12 or 24 hours. Each fragment was individually immersed in a 20 mL tube containing 20 times the volume of fixative solution. After this period, the fragments were held in 70% ethanol for 24 hours. Each procedure was performed in four replicates. For histological analysis, the specimens were dehydrated in increasing concentrations of alcohol, submitted to diaphanization in xylol and embedded in paraffin. Serial sections of 5 μm were made with the use of a rotating microtome (Leica® type, Wetzlar, Germany), followed by slide mounting and staining with periodic acid-Schiff (PAS) and hematoxylin. A total of 540 slides with 1,620 sections were evaluated, which contained 465 preantral follicles that were classified as normal or degenerated. Follicles were considered as degenerated when presented at least one of the following aspects: cytoplasm retraction, pyknotic nucleus, cytoplasmic vacuoles,displacement of granulosa cells and/or disruption of the basal membrane. A logistic regression test was used for statistical analysis, and differences were considered significant when P<0.05. The Carnoy fixative, when used for 24 hours, provided the best conditions of morphological integrity (53.3%; 32/60)compared to all others, and the use of Boiun for 24 hours was considered the worst treatment (19.1%; 9/47)[...](AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia dos fixadores teciduais Bouin, Carnoy ou Formol 10% em fragmentos ovarianos equinos. Ovários (n=4) de éguas, sem raça definida, foram obtidos de abatedouro local e transportados em recipiente térmico a 20 ºC. Imediatamente após a coleta, os ovários foram lavados com solução de PBS modificado (Cultilab®, Campinas-SP, Brasil), e divididos em nove fragmentos com aproximadamente 5x5x1 mm, retirados do parênquima de cada ovário. Em seguida, os fragmentos ovarianos foram imersos em um dos três diferentes fixadores, Bouin (B), Carnoy (C) ou Formol 10% (F), por 6, 12 ou 24 horas. Cada fragmento foi acondicionado individualmente em um frasco contendo aproximadamente 20 vezes o volume da solução fixadora. Após este período, foram mantidos em álcool 70% por 24 horas. Para cada fixador e tempo foram realizadas quatro réplicas. No processamento histológico, os fragmentos foram desidratados em concentrações crescentes de álcool, diafanizados em xilol e incluídos em parafina. Em seguida, foram feitos cortes seriados de 5 ?m em micrótomo rotativo (Leica®, Wetzlar-Alemanha), seguidos da montagem de lâminas e coloração com ácido periódico de Schiff (PAS) e hematoxilina. Foram avaliadas 540 lâminas com 1.620 cortes histológicos, contendo 465 folículos pré-antrais que foram classificados como íntegros ou degenerados. A degeneração foi detectada pela presença de pelo menos um dos seguintes aspectos: retração docitoplasma, núcleo picnótico, vacúolos citoplasmáticos, deslocamento das células da granulosa e/ou rompimento da membrana basal. Um teste de regressão logística foi utilizado para a análise estatística, e as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. O fixador Carnoy utilizado por 24 horas proporcionou as melhores condições de integridade morfológica (53,3%; 32/60) em relação aos demais,sendo Boiun por 24 h o tratamento menos eficaz (19,1%; 9/47).[...](AU)

Effect of fixative type and fixation time on the morphology of equine preantral ovarian follicles / Efeito do tipo de fixador e tempo de fixação na morfologia de folículos pré-antrais equinos

The aim of this study was to investigate the efficacy of the tissue fixatives Bouin, Carnoy and 10% Formaldehyde in equine ovarian fragments. Ovaries (n=4) from mares of mixed breeds were obtained at a local slaughterhouse and transported at 20 ºC in a thermo container. Immediately after collection, the ovaries were washed with a modified PBS solution (Cultilab®, Campinas-SP, Brazil) and divided into nine fragments with approximately 5x5x1 mm, removed from the parenchyma of each ovary. The ovarian fragments were then immersed in three different fixatives, Bouin (B) Carnoy (C) or 10% Formaldehyde (F) for 6, 12 or 24 hours. Each fragment was individually immersed in a 20 mL tube containing 20 times the volume of fixative solution. After this period, the fragments were held in 70% ethanol for 24 hours. Each procedure was performed in four replicates. For histological analysis, the specimens were dehydrated in increasing concentrations of alcohol, submitted to diaphanization in xylol and embedded in paraffin. Serial sections of 5 μm were made with the use of a rotating microtome (Leica® type, Wetzlar, Germany), followed by slide mounting and staining with periodic acid-Schiff (PAS) and hematoxylin. A total of 540 slides with 1,620 sections were evaluated, which contained 465 preantral follicles that were classified as normal or degenerated. Follicles were considered as degenerated when presented at least one of the following aspects: cytoplasm retraction, pyknotic nucleus, cytoplasmic vacuoles,displacement of granulosa cells and/or disruption of the basal membrane. A logistic regression test was used for statistical analysis, and differences were considered significant when P<0.05. The Carnoy fixative, when used for 24 hours, provided the best conditions of morphological integrity (53.3%; 32/60)compared to all others, and the use of Boiun for 24 hours was considered the worst treatment (19.1%; 9/47)[...]

O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia dos fixadores teciduais Bouin, Carnoy ou Formol 10% em fragmentos ovarianos equinos. Ovários (n=4) de éguas, sem raça definida, foram obtidos de abatedouro local e transportados em recipiente térmico a 20 ºC. Imediatamente após a coleta, os ovários foram lavados com solução de PBS modificado (Cultilab®, Campinas-SP, Brasil), e divididos em nove fragmentos com aproximadamente 5x5x1 mm, retirados do parênquima de cada ovário. Em seguida, os fragmentos ovarianos foram imersos em um dos três diferentes fixadores, Bouin (B), Carnoy (C) ou Formol 10% (F), por 6, 12 ou 24 horas. Cada fragmento foi acondicionado individualmente em um frasco contendo aproximadamente 20 vezes o volume da solução fixadora. Após este período, foram mantidos em álcool 70% por 24 horas. Para cada fixador e tempo foram realizadas quatro réplicas. No processamento histológico, os fragmentos foram desidratados em concentrações crescentes de álcool, diafanizados em xilol e incluídos em parafina. Em seguida, foram feitos cortes seriados de 5 ?m em micrótomo rotativo (Leica®, Wetzlar-Alemanha), seguidos da montagem de lâminas e coloração com ácido periódico de Schiff (PAS) e hematoxilina. Foram avaliadas 540 lâminas com 1.620 cortes histológicos, contendo 465 folículos pré-antrais que foram classificados como íntegros ou degenerados. A degeneração foi detectada pela presença de pelo menos um dos seguintes aspectos: retração docitoplasma, núcleo picnótico, vacúolos citoplasmáticos, deslocamento das células da granulosa e/ou rompimento da membrana basal. Um teste de regressão logística foi utilizado para a análise estatística, e as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. O fixador Carnoy utilizado por 24 horas proporcionou as melhores condições de integridade morfológica (53,3%; 32/60) em relação aos demais,sendo Boiun por 24 h o tratamento menos eficaz (19,1%; 9/47).[...]