Resumo
Ornithodoros mimon é um carrapato argasídeo parasita de quirópteras, aves e marsupiais, além de ser bastante agressivo aos humanos. O conhecimento dos transcritos presentes no intestino dos carrapatos auxilia no entendimento do papel de moléculas vitais no processo digestão e na relação parasito-hospedeiro, além de fornecer também informações sobre a evolução dos artrópodes hematófagos. Desta maneira, o presente estudo teve como objetivo conhecer e identificar as principais moléculas expressas no intestino de uma espécie de carrapato argasídeo após o repasto sanguíneo, através de uma análise transcritômica do intestino de fêmeas ingurgitadas de O. mimon. Sessenta fêmeas foram alimentadas e dissecadas para coleta o tecido intestinal. O RNAm da amostra do intestino foi extraído, purificado e quantificado. Esse serviu de molde para síntese do cDNA, que foi utilizado no pirosequenciamento. O transcritoma foi obtido através do método de montagem de novo do cDNA do tecido intestinal. Identificou-se 2235 sequências consensos (contigs) ou transcritos, dos quais 1729 apresentaram similaridade (hit) com sequências dos bancos de dados, enquanto que 506 não tiveram nenhuma similaridade. Os transcritos foram anotados e agrupados conforme as funções biológicas atribuídas as eles no processo de anotação gênica. Atividade catalítica, adesão e transporte foram as funções mais representativas com 780, 709 e 106 transcritos, respectivamente. Em uma análise não automatizada, os transcritos foram subcategorizados em 31 categorias. As categorias mais representativas foram desconhecido, atividade catalítica e transportadores-canais. Identificamos 103 transcritos digestivos associados à digestção de proteínas (67), carboidratos (19) e lipídios (17). Proteinases das classes serino, cisteíne, aspártica e metalo representaram as enzimas atuantes na digestão intracelular do constituinte proteíco do repasto sanguíneo. Genes associados com o transporte (hemelipoglicoproteína) e estocagem (ferritina) dos nutrientes resultantes da digestão foram encontrados bem expressos no trato digestivo. Registrou-se pela primeira vez a presença de uma cisteína peptidase do tipo catepsina O em carrapatos. Foram depositados no banco de dados gênico público 2213 transcritos de O. mimon. A análise filogenética das peptidases revelou que a maioria das proteinases de O. mimon é próxima aos genes codificadores de proteinases de carrapatos. Transcritos de catepsinas L de O. mimon parecem ter divergido de ancestrais recentes diferentes. A inferência filogenética baseada em conjunto de dados transcritos homólogos tem uma resolução topológica similar a de outros conjuntos de dados, como genoma mitocondrial e sequências nuclear de RNA ribossômico (rRNA). Os achados obtidos no presente estudo podem contribuir para compreensão dos importantes processos dos carrapatos argasídeos, como digestão, nutrição e imunidade, além de fornecer informações sobre a filogenia dos carrapatos.
Ornithodoros mimon is an argasid tick that parasitizes bats, birds and opossums and is also aggressive towards humans. It inhabits some countries in the Neotropical region. Knowledge of the transcripts present in the tick gut helps in understanding the role of vital molecules in the digestion process and parasite-host relationship, while also providing information about the evolution of arthropod hematophagy. Thus, the present study aimed to ascertain the main molecules expressed in the gut of argasid ticks after their blood meal, through analysis on the gut transcriptome of engorged females of O. mimon. Sixty females were fed and dissected to extract the gut tissue. The transcriptome was obtained through pyrosequencing and the de novo assembly method on mRNA of the gut tissue. We identified 2,235 contigs, of which 1,729 matched database sequences, while 506 did not present any hits. The transcripts were annotated and grouped according to their biological function. Catalytic, binding and transporter activity were the most representative functions, accounting for 780, 709 and 106 contigs, respectively. The transcripts were classified into 31 categories, using both bioinformatics and data curation practices. The most representative categories were, respectively, unknown, catalytic activity and transporter channels. One hundred and three (103) digestives transcritps associated to digestion of proteins (67), carbohydrates (19) and lipid (17) were identified in the transcriptome analysis. Peptidases associated with hemoglobin digestion, such as serine, cysteine, aspartic protease and metalloenzymes, were identified in the gut of the engorged females. Genes associated with transport (hemelipoglycoprotein) and storage (ferritin) of nutrients resulting from hemoglobin digestion, such as heme, were also found in the digestive tract. The presence of a cathepsin O-like cysteine peptidase was recorded in ticks, for the first time. Two thousand and two hundred thirteen (2213) transcripts were deposited to the Transcriptome Shotgun Assembly (TSA) portal of the NCBI.The phylogenetic analysis on the peptidases confirmed that most of them are clustered with other tick genes. Genes for cathepsin L in O. mimon appear to have diverged from other more common recent ancestors. The topology of the phylogenetic inferences, based on transcripts of inferred families of homologues, was similar to that of previous reports based on different datasets, such as mitochondrial genome and nuclear rRNA sequences. Our findings may help towards better understanding of important argasid metabolic processes, such as digestion, nutrition and immunity.