Enzymatic activity of lipase in post-metamorphic phase bullfrogs

The knowledge of the digestive system of bullfrogs is an important step for the determination of their nutritional requirements throughout growth phases. With the objective of evaluating the enzymatic activity of lipase in the intestinal content of bullfrogs (Rana catesbeiana Shaw, 1802), 100 animals with median weight of 3.6 g were distributed in stalls under controlled temperature and photoperiod. The frogs, selected at the post-metamorphic phase, received commercial extruded diet ad libitum throughout the 87-day experiment. The collections of the intestinal content were performed by the desensitization of the frogs in ice and water at 0ºC and subsequent isolation of the small intestine. Determination of lipase activity was performed with a commercial enzymatic kit (Lipase-Bioclin, MG, Brazil), first measured in samples taken at day three (3.46 UI). During the initial phase the bullfrog possesses low lipase hydrolysis capacity was found, having a specific activity of 217 UI mg-1. In the subsequent period both lipase activity and specific lipase activity continuously increased. Lipase activity as a function of bullfrog weight fell after day twenty and reached 0.33 UI g-1, for frogs of medium weight (179 g). Feed for bullfrogs at the post-metamorphic phase weighing more than 10 g can have larger amounts of ingredients containg lipids, due to the increased digestive capacity of these frogs.

O conhecimento do sistema digestório da rã-touro é um passo importante para a determinação de sua exigência nutricional nas diferentes fases de crescimento. Com o objetivo de avaliar a atividade enzimática da lipase no conteúdo intestinal da rã-touro (Rana catesbeiana Shaw, 1802), 100 animais com peso médio de 3,6 g foram distribuídos em baias-teste com temperatura e fotoperíodo controlados. As rãs, selecionadas na fase pos-metamórfica receberam ração extruzada comercial ad libitum. Durante 87 dias de experimento, 29 coletas (87 rãs) foram feitas em intervalos que variaram de um a oito dias. As rãs foram insensibilizadas em água e gelo a 0ºC para subseqüente isolamento do intestino delgado e retirada do conteúdo intestinal. Para determinação da atividade da lipase foram usados conjuntos enzimáticos da BIOCLIN. A atividade da lipase foi registrada no terceiro dia (3,46 UI). Na fase inicial, a rã-touro possui baixa capacidade de hidrólise para a lipase que teve atividade específica de 217 UI mg-1. No período subseqüente, observou-se aumento contínuo da atividade e da atividade específica da lipase. A atividade da lipase em função do peso da rã-touro depois do 20º dia apresentou redução contínua, alcançando valor de 0,33 UI g-1, registrado para rãs com peso médio de 179 g. As rações para rã-touro com peso superior a 10 g podem conter quantidades maiores de ingredientes que contenham lipídos, devido ao aumento da capacidade da digestão.

Enzymatic activity of lipase in post-metamorphic phase bullfrogs

The knowledge of the digestive system of bullfrogs is an important step for the determination of their nutritional requirements throughout growth phases. With the objective of evaluating the enzymatic activity of lipase in the intestinal content of bullfrogs (Rana catesbeiana Shaw, 1802), 100 animals with median weight of 3.6 g were distributed in stalls under controlled temperature and photoperiod. The frogs, selected at the post-metamorphic phase, received commercial extruded diet ad libitum throughout the 87-day experiment. The collections of the intestinal content were performed by the desensitization of the frogs in ice and water at 0ºC and subsequent isolation of the small intestine. Determination of lipase activity was performed with a commercial enzymatic kit (Lipase-Bioclin, MG, Brazil), first measured in samples taken at day three (3.46 UI). During the initial phase the bullfrog possesses low lipase hydrolysis capacity was found, having a specific activity of 217 UI mg-1. In the subsequent period both lipase activity and specific lipase activity continuously increased. Lipase activity as a function of bullfrog weight fell after day twenty and reached 0.33 UI g-1, for frogs of medium weight (179 g). Feed for bullfrogs at the post-metamorphic phase weighing more than 10 g can have larger amounts of ingredients containg lipids, due to the increased digestive capacity of these frogs.

O conhecimento do sistema digestório da rã-touro é um passo importante para a determinação de sua exigência nutricional nas diferentes fases de crescimento. Com o objetivo de avaliar a atividade enzimática da lipase no conteúdo intestinal da rã-touro (Rana catesbeiana Shaw, 1802), 100 animais com peso médio de 3,6 g foram distribuídos em baias-teste com temperatura e fotoperíodo controlados. As rãs, selecionadas na fase pos-metamórfica receberam ração extruzada comercial ad libitum. Durante 87 dias de experimento, 29 coletas (87 rãs) foram feitas em intervalos que variaram de um a oito dias. As rãs foram insensibilizadas em água e gelo a 0ºC para subseqüente isolamento do intestino delgado e retirada do conteúdo intestinal. Para determinação da atividade da lipase foram usados conjuntos enzimáticos da BIOCLIN. A atividade da lipase foi registrada no terceiro dia (3,46 UI). Na fase inicial, a rã-touro possui baixa capacidade de hidrólise para a lipase que teve atividade específica de 217 UI mg-1. No período subseqüente, observou-se aumento contínuo da atividade e da atividade específica da lipase. A atividade da lipase em função do peso da rã-touro depois do 20º dia apresentou redução contínua, alcançando valor de 0,33 UI g-1, registrado para rãs com peso médio de 179 g. As rações para rã-touro com peso superior a 10 g podem conter quantidades maiores de ingredientes que contenham lipídos, devido ao aumento da capacidade da digestão.

Laccase production by Lepista sordida

A Lepista sordida laccase has been characterized. Laccase and manganese peroxidase were detected in liquid medium with ammonium phosphate, yeast extract and ammonium molybdidate as nitrogen sources after 3 days of cultivation. Laccase optimal temperature and pH were 45ºC and 3.5, respectively.

Uma lacase de Lepista sordida foi caracterizada. O fungo produziu lacase e manganês peroxidase em meio líquido com fosfato de amônio, extrato de levedura e molibdato de amônio como fontes de nitrogênio 3 dias após a inoculação. Temperatura e pH ótimos para lacase foram 45ºC e 3,5, respectivamente.

Resistance to stem canker, frogeye leaf spot and powdery mildew of soybean lines lacking lipoxigenases in the seeds

The soybean [Glycine max (L.) Merrill] crop holds a prominent position in the Brazilian economy because of the extension of the planted area and volume of grain production, but the beany flavor has been a limiting factor for soybean derivatives consumption by western population. This flavor is produced mainly by action of lipoxygenase enzymes (Lox1, Lox2 and Lox3), present in some commercial varieties. The genetic elimination of the alleles that codify these enzymes is the most appropriate way to avoid problems associated to this deleterious flavor. To elucidate the effect of seed lipoxygenase elimination on the resistance to plant pathogens, normal varieties of soybean (FT-Cristalina RCH, Doko RC and IAC-12) and their backcross-derived lines, both with the three lipoxygenases present in their seeds (triple-positive, TP) and without the three lipoxygenases (triple-null, TN), were tested for their resistance to stem canker (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis), frogeye leaf spot (Cercospora sojina Hara), and powdery mildew (Microsphaera diffusa Cke. & Pk.). All genetic materials studied were resistant to stem canker. FT-Cristalina RCH and Doko-RC and their TP and TN lines were resistant to frogeye leaf spot. IAC-12 and its derived lines not only presented a higher disease index, but also the derived lines, TP and TN, were more susceptible, indicating the loss of genes for disease resistance in the backcrosses. There was no association between the elimination of lipoxygenases from the seeds with the resistance to frogeye leaf spot. In relation to the powdery mildew, TP or TN lines presented similar or higher resistance than their respective recurrent parents whose susceptibility appeared in the following order: IAC-12, less susceptible, Doko-RC, intermediate and FT-Cristalina RCH, more susceptible.

A cultura da soja [Glycine max (L.) Merrill] ocupa lugar de destaque na economia brasileira, tanto em termos de área plantada, quanto de produção de grãos. A presença de gosto de feijão cru tem sido limitante para o consumo de derivados de soja pelos povos ocidentais. Esse sabor característico é proporcionado pelas enzimas lipoxigenases (Lox1, Lox2 e Lox3). A eliminação dessas enzimas, pela manipulação genética dos alelos que as codificam, é a maneira mais adequada de contornar os problemas associados ao sabor desagradável. Visando elucidar a participação das lipoxigenases, no processo de resistência da soja a patógenos, variedades normais de soja (FT-Cristalina RCH, Doko RC e IAC-12) e suas respectivas linhagens obtidas por retrocruzamentos, sem as três lipoxigenases nas sementes (triplo-nulas - TN) e com as três lipoxigenases (triplo-positivas - TP), foram testadas quanto às suas resistências ao cancro-da-haste (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis), à cercosporiose (Cercospora sojina Hara) e ao oídio (Microsphaera diffusa Cke. & Pk.). Todos os materiais genéticos foram resistentes ao cancro-da-haste. Com relação à cercosporiose, FT-Cristalina RCH e Doko-RC e suas respectivas linhagens com ou sem lipoxigenases mostraram-se resistentes, enquanto IAC-12 e suas linhagens derivadas mostraram índices de doença mais elevados, sendo que as linhagens IAC-12 TP e TN foram mais suscetíveis, indicando perda de gene de resistência nos retrocruzamentos. Não houve relação entre retirada dos genes que codificam lipoxigenases nas sementes com a resistência à cercosporiose. No caso do oídio, as linhagens TP ou TN apresentaram-se similares ou pouco mais resistentes que seus respectivos progenitores recorrentes, os quais se mostraram suscetíveis na seguinte ordem: IAC-12, menos suscetível, Doko-RC, intermediário e FT-Cristalina RCH, mais suscetível.

Resistance to stem canker, frogeye leaf spot and powdery mildew of soybean lines lacking lipoxigenases in the seeds

The soybean [Glycine max (L.) Merrill] crop holds a prominent position in the Brazilian economy because of the extension of the planted area and volume of grain production, but the beany flavor has been a limiting factor for soybean derivatives consumption by western population. This flavor is produced mainly by action of lipoxygenase enzymes (Lox1, Lox2 and Lox3), present in some commercial varieties. The genetic elimination of the alleles that codify these enzymes is the most appropriate way to avoid problems associated to this deleterious flavor. To elucidate the effect of seed lipoxygenase elimination on the resistance to plant pathogens, normal varieties of soybean (FT-Cristalina RCH, Doko RC and IAC-12) and their backcross-derived lines, both with the three lipoxygenases present in their seeds (triple-positive, TP) and without the three lipoxygenases (triple-null, TN), were tested for their resistance to stem canker (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis), frogeye leaf spot (Cercospora sojina Hara), and powdery mildew (Microsphaera diffusa Cke. & Pk.). All genetic materials studied were resistant to stem canker. FT-Cristalina RCH and Doko-RC and their TP and TN lines were resistant to frogeye leaf spot. IAC-12 and its derived lines not only presented a higher disease index, but also the derived lines, TP and TN, were more susceptible, indicating the loss of genes for disease resistance in the backcrosses. There was no association between the elimination of lipoxygenases from the seeds with the resistance to frogeye leaf spot. In relation to the powdery mildew, TP or TN lines presented similar or higher resistance than their respective recurrent parents whose susceptibility appeared in the following order: IAC-12, less susceptible, Doko-RC, intermediate and FT-Cristalina RCH, more susceptible.

A cultura da soja [Glycine max (L.) Merrill] ocupa lugar de destaque na economia brasileira, tanto em termos de área plantada, quanto de produção de grãos. A presença de gosto de feijão cru tem sido limitante para o consumo de derivados de soja pelos povos ocidentais. Esse sabor característico é proporcionado pelas enzimas lipoxigenases (Lox1, Lox2 e Lox3). A eliminação dessas enzimas, pela manipulação genética dos alelos que as codificam, é a maneira mais adequada de contornar os problemas associados ao sabor desagradável. Visando elucidar a participação das lipoxigenases, no processo de resistência da soja a patógenos, variedades normais de soja (FT-Cristalina RCH, Doko RC e IAC-12) e suas respectivas linhagens obtidas por retrocruzamentos, sem as três lipoxigenases nas sementes (triplo-nulas - TN) e com as três lipoxigenases (triplo-positivas - TP), foram testadas quanto às suas resistências ao cancro-da-haste (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis), à cercosporiose (Cercospora sojina Hara) e ao oídio (Microsphaera diffusa Cke. & Pk.). Todos os materiais genéticos foram resistentes ao cancro-da-haste. Com relação à cercosporiose, FT-Cristalina RCH e Doko-RC e suas respectivas linhagens com ou sem lipoxigenases mostraram-se resistentes, enquanto IAC-12 e suas linhagens derivadas mostraram índices de doença mais elevados, sendo que as linhagens IAC-12 TP e TN foram mais suscetíveis, indicando perda de gene de resistência nos retrocruzamentos. Não houve relação entre retirada dos genes que codificam lipoxigenases nas sementes com a resistência à cercosporiose. No caso do oídio, as linhagens TP ou TN apresentaram-se similares ou pouco mais resistentes que seus respectivos progenitores recorrentes, os quais se mostraram suscetíveis na seguinte ordem: IAC-12, menos suscetível, Doko-RC, intermediário e FT-Cristalina RCH, mais suscetível.