Genetic diversity of Mycoplasma hyopneumoniae in finishing pigs in Minas Gerais / Diversidade de cepas de Mycoplasma hyopneumoniae em suínos em terminação brasileiros

Mycoplasma hyopneumoniae is one of the most challenging respiratory pathogens involved with swine pneumonia worldwide, responsible for a chronic infection with high morbidity, which predisposes secondary bacterial infections in growing and finishing pigs. Advances in diagnostic techniques allowed identification of genetic characteristics associated with high antigenic and proteomic variability among bacterial strains. This study aimed to evaluate the genetic diversity of M. hyopneumoniae strains in lungs with pneumonic lesions obtained from 52 pig farms located in Minas Gerais, one of the largest swine production states in Brazil. Genotyping was performed using multilocus variable number of tandem repeat (VNTR) analysis (MLVA), targeting two loci encoding P97 and P146 adhesins VNTR. The results showed that this agent is widely disseminated in pig farms and there is a high polymorphism of M. hyopneumoniae variants circulating in the state of Minas Gerais. Different M. hyopneumoniae genotypes are randomly distributed in several regions of the state, with no specific geographic population structure pattern. M. hyopneumoniae association with viral agents was sporadic (3.17% with Influenza A and 1.9% with PCV2).

Mycoplasma hyopneumoniae é um dos patógenos respiratórios mais desafiadores envolvidos com pneumonia suína em todo o mundo. É responsável por uma infecção crônica de alta morbidade, que predispõe a infecções bacterianas secundárias nas fases de crescimento e terminação. Avanços nas técnicas diagnósticas permitiram a identificação de características genéticas do agente, associadas à alta variabilidade antigênica e proteômica entre cepas. Este estudo teve como objetivo examinar a ocorrência e diversidade genética de cepas de M. hyopneumoniae em pulmões com lesões pneumônicas em 52 granjas de suínos no estado de Minas Gerais, um dos maiores estados produtores de suínos do Brasil. A genotipagem foi realizada utilizando a técnica de "multilocus variable number of tandem repeat analysis" (VTNR/MLVA), usando dois loci que codificam VNTR das adesinas P97 e P146. Os resultados mostraram que esse agente está amplamente disseminado em granjas de suínos e que existe alto polimorfismo das variantes de M. hyopneumoniae circulando no estado de Minas Gerais. Diferentes genótipos de M. hyopneumoniae estão distribuídos aleatoriamente em várias regiões do estado, sem um padrão de estrutura populacional e geográfica específico. Associação de M. hyopneumoniae e agentes virais foi esporádica (3,17% com Influenza A e 1,9% com PCV2).

Osteoporosis in swine / Osteoporose em suínos

Forty-six pigs presented muscle weakness, hind limb paresis and paralysis, weight loss, lateral recumbency, and death in a clinical course of 7 to 10 days. Two pigs were necropsied and exhibited bone fragility, bone callus formation, and multiple fractures in the limbs, ribs, and vertebrae. Microscopically, there was a diffuse and marked decrease in thickness and number of trabeculae. These were disconnected, with a "free-floating" appearance, while the cortex of the long bones was thinned, with an increase of the cortical porosity by enlargement of Haversian canals and endosteal erosion and decreased osteoblastic activity. Flame atomic absorption spectrometry in liver samples revealed significant zinc overload (>2300ppm) and copper deficiency (<33.1ppm). In this communication, we present the first pathologic description of an outbreak of osteoporosis in pigs, and we also provide a brief review of metabolic bone diseases in pigs.

Quarenta e seis suínos apresentaram fraqueza muscular, paresia e paralisia de membros pélvicos, perda de peso, decúbito lateral e morte, com um curso clínico de 7 a 10 dias. Dois suínos foram submetidos a necropsia e exibiram fragilidade óssea, formação de calo ósseo, e múltiplas fraturas em membros, costelas e vértebras. Microscopicamente notou-se difusamente um marcado decréscimo na espessura e número de trabéculas ósseas. Essas estavam desconexas, com uma aparência de flutuação, enquanto o córtex dos ossos longos estava afinado, com um aumento da porosidade pela dilatação dos canais de Haversian, erosão endosteal e diminuição da atividade osteoblástica. Espectrofotometria por chama foi realizada em amostras de fígado, e revelou um excesso de zinco (>2300ppm) e deficiência de cobre (<33.1ppm). Neste trabalho, apresentamos a primeira descrição patológica de um surto de osteoporose em suínos, além de fornecer uma breve revisão de doenças metabólicas em suínos.

Use of oral fluids to detect anti Lawsonia intracellularis antibodies in experimentally infected pigs / Utilização de fluidos orais para detecção de anticorpos anti Lawsonia intracellularis em suínos experimentalmente infectados

Several pathogens and antibodies derived from serum or produced in tissues associated with the oral cavity are present in the oral fluid (OF). Considering the applicability of this alternative sample, recent studies in veterinary medicine have tested OF as a replacement for serum in diagnostic assays. The aim of this study was to standardize the immunoperoxidase monolayer assay (IPMA) to detect anti-Lawsonia intracellularis immunoglobulin A (IgA) and immunoglobulin G (IgG) in OF samples from experimentally infected pigs. Sixty-two pigs were divided into two groups: control (T1, n=30) and inoculated with L. intracellularis (T2, n=32). Blood, OF and fecal samples were collected at 0, 7, 14, 21, 28 and 42 days post-inoculation (dpi). Some adaptations of the standard technique for serum were made to IPMA for the detection of IgA and IgG in OF. The IPMA showed high specificity and sensitivity for serum samples and high specificity and moderate sensitivity for the detection of IgA and IgG in OF. There was high agreement between the results of serum IgG and OF IgA and IgG. Based on our results, oral fluid samples may be used for the evaluation and determination of anti-L. intracellularis antibodies in pigs, but not for individual diagnosis of swine proliferative enteropathy.(AU)

Vários patógenos e anticorpos derivados do soro ou produzidos em tecidos associados a cavidade oral estão presentes no fluido oral (FO). Considerando a aplicabilidade dessa amostra alternativa, estudos recentes em medicina veterinária têm testado o FO como substituto do soro para testes diagnósticos. O objetivo desse estudo foi padronizar a imunoperoxidase em monocamada de célula (IPMC) para a detecção de imunoglobulina A e imunoglobulina G anti-Lawsonia intracellularis em amostras de FO de suínos experimentalmente infectados. Um total de 62 suínos foram divididos em dois grupos: controle (T1, n=30) e inoculados com L. intracellularis (T2, n=32). Sangue, FO e amostras de fezes foram coletados aos 0, 7,14, 21, 28 e 42 dias após a inoculação (dpi). Algumas adaptações da técnica foram realizadas na técnica padrão da IPMC para a detecção de IgA e IgG. A IPMC demostrou alta especificidade e sensibilidade para amostras de soro e alta especificidade de moderada sensibilidade para a detecção de IgA e IgG em FO. Houve alta concordância entre resultados de detecção de IgG em soro com a IgA e IgG em amostras de FO. Baseado em nossos resultados, amostras de fluido oral podem ser usadas em avaliações e detecção de anticorpos anti-L. intracellularis em suínos, porém não de forma individual.(AU)

Use of oral fluids to detect anti Lawsonia intracellularis antibodies in experimentally infected pigs / Utilização de fluidos orais para detecção de anticorpos anti Lawsonia intracellularis em suínos experimentalmente infectados

Several pathogens and antibodies derived from serum or produced in tissues associated with the oral cavity are present in the oral fluid (OF). Considering the applicability of this alternative sample, recent studies in veterinary medicine have tested OF as a replacement for serum in diagnostic assays. The aim of this study was to standardize the immunoperoxidase monolayer assay (IPMA) to detect anti-Lawsonia intracellularis immunoglobulin A (IgA) and immunoglobulin G (IgG) in OF samples from experimentally infected pigs. Sixty-two pigs were divided into two groups: control (T1, n=30) and inoculated with L. intracellularis (T2, n=32). Blood, OF and fecal samples were collected at 0, 7, 14, 21, 28 and 42 days post-inoculation (dpi). Some adaptations of the standard technique for serum were made to IPMA for the detection of IgA and IgG in OF. The IPMA showed high specificity and sensitivity for serum samples and high specificity and moderate sensitivity for the detection of IgA and IgG in OF. There was high agreement between the results of serum IgG and OF IgA and IgG. Based on our results, oral fluid samples may be used for the evaluation and determination of anti-L. intracellularis antibodies in pigs, but not for individual diagnosis of swine proliferative enteropathy.(AU)

Vários patógenos e anticorpos derivados do soro ou produzidos em tecidos associados a cavidade oral estão presentes no fluido oral (FO). Considerando a aplicabilidade dessa amostra alternativa, estudos recentes em medicina veterinária têm testado o FO como substituto do soro para testes diagnósticos. O objetivo desse estudo foi padronizar a imunoperoxidase em monocamada de célula (IPMC) para a detecção de imunoglobulina A e imunoglobulina G anti-Lawsonia intracellularis em amostras de FO de suínos experimentalmente infectados. Um total de 62 suínos foram divididos em dois grupos: controle (T1, n=30) e inoculados com L. intracellularis (T2, n=32). Sangue, FO e amostras de fezes foram coletados aos 0, 7,14, 21, 28 e 42 dias após a inoculação (dpi). Algumas adaptações da técnica foram realizadas na técnica padrão da IPMC para a detecção de IgA e IgG. A IPMC demostrou alta especificidade e sensibilidade para amostras de soro e alta especificidade de moderada sensibilidade para a detecção de IgA e IgG em FO. Houve alta concordância entre resultados de detecção de IgG em soro com a IgA e IgG em amostras de FO. Baseado em nossos resultados, amostras de fluido oral podem ser usadas em avaliações e detecção de anticorpos anti-L. intracellularis em suínos, porém não de forma individual.(AU)

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Anatomopathological pneumonic aspects associated with highly pathogenic Pasteurella multocida in finishing pigs / Aspectos pneumônicos anatomo-patológicos associados a Pasteurella multocida de alta patogenicidade em suínos de terminação

The bacterium Pasteurella multocida is a frequent cause of porcine respiratory disease complex in finishing pigs. Historically, the bacterium is recognized as an opportunistic agent, causing secondary bacterial pneumonia in pigs. Several Brazilian reports have suggested the ability of P. multocida to cause primary pulmonary infection that leads to the death of finishing pigs prior to slaughter. The aim of this study was to evaluate anatomopathological pulmonary findings associated with P. multocida infection that were obtained from animals with clinical respiratory disease and from animals at slaughter. Twenty-five lung samples from 14 herds of finishing pigs with acute clinical respiratory disease and 19 lungs collected at slaughter from a different set of 14 herds were studied. In all lung samples, bacterial isolation was performed, and only samples with pure P. multocida growth were included in the study. Gross and histopathological lesions were evaluated, as well as Influenza A, porcine circovirus type 2 (PCV2) and Mycoplasma hyopneumoniae co-infections. Pleuritis and pericarditis were more often observed in clinical samples (P<0.05). Moreover, there was a numerical trend indicating that pericarditis, lymphadenomegaly and cavity exudates were more often present in clinical samples. Thirteen lung samples were negative to M. hyopneumoniae, Influenza A and PCV2 by immunohistochemistry (IHC), with only P. multocida identified. In these cases, gross lesions such as pleuritis, pericarditis and lymphadenomegaly were always present, and no histologic lesions indicative of other agents such as Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis or Haemophilus parasuis were observed. These findings suggest the ability of some P. multocida isolates to cause primary respiratory and systemic infection. However, in this study, it was not possible to determine specific virulence markers to explain these findings.

A bactéria Pasteurella multocida é causa frequente do Complexo de Doenças Respiratórias dos suínos em animais de terminação. Historicamente, a bactéria é reconhecida como agente oportunista, causando pneumonia bacteriana secundária. Diversos relatos brasileiros sugerem a habilidade da P. multocida de causar infecção pulmonar primária que leva a mortalidade de animais de terminação antes do abate. O objetivo deste estudo foi avaliar achados anatomopatológicos pulmonares associados com infecção por P. multocida, obtidas de animais acometidos clinicamente por doença respiratória e de animais ao abate. Avaliou-se 25 amostras de pulmão de 14 rebanhos obtidas de animais de terminação com sinais clínicos de doença respiratória aguda, e 19 pulmões coletados ao abate de 14 rebanhos diferentes. Em todos os pulmões, realizou-se isolamento bacteriano, e apenas amostras com crescimento puro de P. multocida foram incluídas no trabalho. Avaliou-se as lesões macro e microscopicamente, assim como co-infecções por Influenza A, Circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e Mycoplasma hyopneumoniae. Pleurite e pericardite foram mais frequentemente observadas em amostras clinicas (P<0,05). Ainda, houve tendência numérica indicando a ocorrência de linfadenomegalia e exsudação cavitária, mais presentes em amostras clínicas. Treze amostras de pulmão foram negativas para M. hyopneumoniae, Influenza A e PCV2 por imunoistoquímica (IHQ), com identificação de apenas P. multocida. Nestes casos, lesões macroscópicas como pleurite, pericardite e linfadenomegalia foram sempre presentes, sem lesões histológicas indicativas de outros agentes como Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis ou Haemophilus parasuis. Estes achados sugerem a habilidade de alguns isolados de P. multocida de causarem quadro respiratório primário e infecção sistêmica. No entanto, neste estudo, não foi possível determinar marcadores de virulência específicos para justificar tais achados.

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Anatomopathological pneumonic aspects associated with highly pathogenic Pasteurella multocida in finishing pigs / Aspectos pneumônicos anatomo-patológicos associados a Pasteurella multocida de alta patogenicidade em suínos de terminação

The bacterium Pasteurella multocida is a frequent cause of porcine respiratory disease complex in finishing pigs. Historically, the bacterium is recognized as an opportunistic agent, causing secondary bacterial pneumonia in pigs. Several Brazilian reports have suggested the ability of P. multocida to cause primary pulmonary infection that leads to the death of finishing pigs prior to slaughter. The aim of this study was to evaluate anatomopathological pulmonary findings associated with P. multocida infection that were obtained from animals with clinical respiratory disease and from animals at slaughter. Twenty-five lung samples from 14 herds of finishing pigs with acute clinical respiratory disease and 19 lungs collected at slaughter from a different set of 14 herds were studied. In all lung samples, bacterial isolation was performed, and only samples with pure P. multocida growth were included in the study. Gross and histopathological lesions were evaluated, as well as Influenza A, porcine circovirus type 2 (PCV2) and Mycoplasma hyopneumoniae co-infections. Pleuritis and pericarditis were more often observed in clinical samples (P<0.05). Moreover, there was a numerical trend indicating that pericarditis, lymphadenomegaly and cavity exudates were more often present in clinical samples. Thirteen lung samples were negative to M. hyopneumoniae, Influenza A and PCV2 by immunohistochemistry (IHC), with only P. multocida identified. In these cases, gross lesions such as pleuritis, pericarditis and lymphadenomegaly were always present, and no histologic lesions indicative of other agents such as Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis or Haemophilus parasuis were observed. These findings suggest the ability of some P. multocida isolates to cause primary respiratory and systemic infection. However, in this study, it was not possible to determine specific virulence markers to explain these findings.(AU)

A bactéria Pasteurella multocida é causa frequente do Complexo de Doenças Respiratórias dos suínos em animais de terminação. Historicamente, a bactéria é reconhecida como agente oportunista, causando pneumonia bacteriana secundária. Diversos relatos brasileiros sugerem a habilidade da P. multocida de causar infecção pulmonar primária que leva a mortalidade de animais de terminação antes do abate. O objetivo deste estudo foi avaliar achados anatomopatológicos pulmonares associados com infecção por P. multocida, obtidas de animais acometidos clinicamente por doença respiratória e de animais ao abate. Avaliou-se 25 amostras de pulmão de 14 rebanhos obtidas de animais de terminação com sinais clínicos de doença respiratória aguda, e 19 pulmões coletados ao abate de 14 rebanhos diferentes. Em todos os pulmões, realizou-se isolamento bacteriano, e apenas amostras com crescimento puro de P. multocida foram incluídas no trabalho. Avaliou-se as lesões macro e microscopicamente, assim como co-infecções por Influenza A, Circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e Mycoplasma hyopneumoniae. Pleurite e pericardite foram mais frequentemente observadas em amostras clinicas (P<0,05). Ainda, houve tendência numérica indicando a ocorrência de linfadenomegalia e exsudação cavitária, mais presentes em amostras clínicas. Treze amostras de pulmão foram negativas para M. hyopneumoniae, Influenza A e PCV2 por imunoistoquímica (IHQ), com identificação de apenas P. multocida. Nestes casos, lesões macroscópicas como pleurite, pericardite e linfadenomegalia foram sempre presentes, sem lesões histológicas indicativas de outros agentes como Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis ou Haemophilus parasuis. Estes achados sugerem a habilidade de alguns isolados de P. multocida de causarem quadro respiratório primário e infecção sistêmica. No entanto, neste estudo, não foi possível determinar marcadores de virulência específicos para justificar tais achados.(AU)

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains / Concentração inibitória mínima de cepas Brachyspira hyodysenteriae brasileiras

The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8µg/ml for doxycycline, >4µg/ml for valnemulin, 8µg/ml for tiamulin, 32µg/ml for tylvalosin, >64µg/ml for lincomycin and >128µg/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.(AU)

Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 µg / mL para a doxiciclina, > 4 µg/ml de valnemulina, 8 µg / mL para a tiamulina, 32 µg / ml para tilvalosina, > 64 µg / ml para a lincomicina e > 128 µg / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.(AU)

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains / Concentração inibitória mínima de cepas Brachyspira hyodysenteriae brasileiras

The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8µg/ml for doxycycline, >4µg/ml for valnemulin, 8µg/ml for tiamulin, 32µg/ml for tylvalosin, >64µg/ml for lincomycin and >128µg/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.(AU)

Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 µg / mL para a doxiciclina, > 4 µg/ml de valnemulina, 8 µg / mL para a tiamulina, 32 µg / ml para tilvalosina, > 64 µg / ml para a lincomicina e > 128 µg / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.(AU)

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains

ABSTRACT: The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8g/ml for doxycycline, >4g/ml for valnemulin, 8g/ml for tiamulin, 32g/ml for tylvalosin, >64g/ml for lincomycin and >128g/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.

RESUMO: Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 g / mL para a doxiciclina, > 4 g/ml de valnemulina, 8 g / mL para a tiamulina, 32 g / ml para tilvalosina, > 64 g / ml para a lincomicina e > 128 g / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.

Equine proliferative enteropathy on a Brazilian farm / Enteropatia proliferativa em um haras brasileiro

Lawsonia intracellularis infection on a horse farm in the Midwest region of Brazil is described. Thirty-nine foals a few days to months old from a herd with 300 horses, experienced diarrhea with variable characteristics and intensities, weight loss, hyperemic mucous membranes and dehydration. In foals 3 to 6 months of age, hypoproteinemia associated with submandibular edema were also common. Intestinal fragments of a 7-month-old foal were sent to an animal disease laboratory for diagnosis. The observed macroscopic lesions were hyperemic serosa, thickening of the intestinal wall with a corrugation, thickening of the mucosa folds and reduction of intestinal lumen. Histological analysis of the small and large intestine revealed enterocyte hyperplasia of the crypts associated with diffuse marked decrease in the number of goblet cells and positive L. intracellularis antigen labeling by immunohistochemistry. Three out of 11 animals of the same property were seropositive for L. intracellularis, demonstrating the circulation of the agent throughout the farm, but none were PCR positive in fecal samples. Based on clinical signs and pathological findings, the diagnosis of equine proliferative enteropathy was confirmed.(AU)

Descreve-se a infecção por Lawsonia intracellularisem uma propriedade na região Oeste do Brasil. Em um rebanho de 300 equinos, 39 potros com poucos dias de vida à 21 meses apresentaram diarreia de características e intensidades variáveis, com perda de peso e desidratação. Em potros com três a seis meses de idade, hipoproteinemia associada a edema submandibular também foram frequentes. Fragmentos intestinais de um potro de 7 meses foram enviados ao laboratório de patologia animal para diagnóstico. Na macroscopia foi observada hiperemia de serosa e moderado espessamento de parede intestinal. Na histologia do intestino delgado existia hiperplasia de enterócitos de criptas difusa intensa com redução marcante de células caliciformes e marcação positiva na imuno-histoquímica para L. intracellularis. Na sorologia de 11 animais da mesma propriedade, três foram positivos. Já a PCR foi negativa para todos os animais. Com base nos sinais clínicos e nos achados patológicos confirmou-se o diagnóstico de enteropatia proliferativa equina, associada a sorologia positiva que demonstrava circulação do agente na propriedade.(AU)

Outbreak of ovine abortion by toxoplasmosis in southeastern Brazil

This study describes an outbreak of Toxoplasma gondii abortions in a sheep herd in January/February 2010. An aborted fetus was submitted to the Veterinary Diagnostic Laboratory for post mortem evaluation. Tissue samples were collected and processed by routine histological methods, stained by hematoxylin-eosin and by immunohistochemistry using anti-T. gondii and Neospora caninum specific antibodies. The 250 sheep herd was reared in a semi-intensive production system and one month before delivery the ewes were confined. Forty out of 100 pregnant ewes aborted in the last month of pregnancy or had stillborns. Serum samples previously collected from some ewes were positive for T. gondii by serological test. Histologically, the fetal central nervous system had multifocal necrotic areas surrounded by inflammatory cells, with intralesional cysts positive for T. gondii by immunohistochemistry. Based on clinical signs, serology, histopathology and immunohistochemistry results a diagnosis of T. gondii abortion was firmed.

Outbreak of ovine abortion by toxoplasmosis in southeastern Brazil

This study describes an outbreak of Toxoplasma gondii abortions in a sheep herd in January/February 2010. An aborted fetus was submitted to the Veterinary Diagnostic Laboratory for post mortem evaluation. Tissue samples were collected and processed by routine histological methods, stained by hematoxylin-eosin and by immunohistochemistry using anti-T. gondii and Neospora caninum specific antibodies. The 250 sheep herd was reared in a semi-intensive production system and one month before delivery the ewes were confined. Forty out of 100 pregnant ewes aborted in the last month of pregnancy or had stillborns. Serum samples previously collected from some ewes were positive for T. gondii by serological test. Histologically, the fetal central nervous system had multifocal necrotic areas surrounded by inflammatory cells, with intralesional cysts positive for T. gondii by immunohistochemistry. Based on clinical signs, serology, histopathology and immunohistochemistry results a diagnosis of T. gondii abortion was firmed.(AU)

Neonatal diarrhea in piglets associated with cpb-2 positive Clostridium perfringens

Clostridium perfringens type A (CPA) has been recognized as one of the most important cause of neonatal diarrhea in piglets. Despite its importance, the pathogenesis of CPA-associated disease is still unclear and data regarding its occurrence in Brazil is scarce. In light of this, the aim of this study was to report a case of neonatal diarrhea in piglets by CPA encoding beta-2 toxin gene (cpb-2). Three three-day-old piglets from a 2000-sow herd with history of diarrhea were necropsied and intestinal samples were collected for histology,  immunohistochemistry, and feces samples were collected for bacteriologic and molecular procedures. Gross and histopathology revealed superficial necrotic enteritis associated with colonies of bacilli adhered to the exposed lamina propria. These ileal and jejunum fragments were positive for C. perfringens by immunohistochemistry, while anaerobic colonies were identified by PCR multiplex as CPA with the cpb-2. No other enteropathogen was identified from intestinal samples. The C. perfringens isolated strains were susceptible to penicillin, metronidazole and vancomicyn and resistant to eritromycin, enrofloxacin, oxitetracyclin and lincomycin.

A surveillance of enteropathogens in piglets from birth to seven days of age in Brazil / Levantamento dos enteropatógenos de leitões do nascimento a sete dias de idade no Brasil

The purpose of the study was to evaluate the real importance of anaerobic enteropathogens and rotavirus in contrast to more common agents as cause of diarrhea in piglets within the first week of life. Sixty 1- to 7-day-old piglets, 30 diarrheic and 30 non-diarrheic (control), from 15 different herds were selected, euthanized and necropsied. Samples of the jejunum, ileum, colon, cecum and feces were collected from the piglets and analyzed to determine the presence of the following enteropathogens: enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), Clostridium perfringens types A and C, Clostridium difficile, rotavirus and Isospora suis. Among diarrheic piglets, 23.3% were positive for C. difficile, 70% for C. perfringens type A cpb2+, 14.3% for rotavirus and 10% for ETEC. Among non-diarrheic control piglets, 10% were positive for C. difficile, 76.7% for C. perfringens type A cpb2+, 0% for rotavirus, 3.3% for ETEC and 3.3% for I. suis. C. perfringens type C was not detected in any of the animals. Histological lesions characteristic of C. difficile, E. coli and rotavirus were observed. However, no C. perfringens type A suggestive lesions were detected. There was a positive correlation between mesocolon edema and the presence of C. difficile toxins. Although C. perfringens type A cpb2+ was the most frequently detected enteropathogen, there was no association between its presence and diarrhea or macro or microscopic changes. C. difficile and Rotavirus were the most relevant pathogens involved with neonatal diarrhea in this study, and histopathology associated with microbiological test proved to be the key to reach a final diagnosis.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar a real importância de enteropatógenos anaeróbios e rotavirus em comparação à outros agentes mais comuns como causa de diarreia em leitões até cinco dias de idade. Leitões com 0 a 7 dias de vida, 30 diarreicos e 30 não diarreicos (controles) de 15 granjas diferentes foram eutanasiados e necropsiados. Amostras de jejuno, íleo, colon e ceco foram coletadas e submetidas à detecção dos seguintes enteropatógenos: Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), Clostridium perfringens, Clostridium difficile, rotavirus e Isospora suis. Entre os animais diarréicos, 23.3% foram positivos para C. difficile, 70% para C. perfringens tipo A cpb2+, 14.3% para rotavirus e 10% para ETEC. Entre os leitões não-diarréicos, 10% foram positivos para C. difficile, 76.7% para C. perfringens tipo A cpb2+, 3.3% para ETEC e 3.3% for I. suis. C. perfringens tipo C não foi detectado em nenhum animal. Lesões histológicas características de C. difficile, E. coli e rotavirus foram observadas. Por outro lado, nenhuma lesão sugestiva de C. perfringens foi detectada. Foi possível observar uma correlação positiva entre edema de mesocolon e presença das toxinas A/B. Apesar de C. perfringens tipo A cpb2+ ter sido o patógeno mais encontrado, nenhuma associação com lesões foi encontrada. C. difficile e Rotavirus foram os agentes mais relevantes associados à diarreia neonatal, e ficou demonstrada a relevância de associação de histopatologia com testes de detecção microbiológica para se firmar um diagnóstico.(AU)

Infection of sparrows (Passer domesticus) and different mice strains with Lawsonia intracellularis / Infecção de pardais (Passer domesticus) e diferentes linhagens de camundongos com Lawsonia intracellularis

The susceptibility of sparrows (Passer domesticus) and strains of mice (Swiss, BALB/c, C-57 and DB-A) to Lawsonia intracellularis infection was studied. Thirty-two sparrows were inoculated with pure culture of L. intracellularis and eleven received sham inoculum. Feces were collected on -1, 7, 14 and 21 days post infection (dpi) for detection of L. intracellularis by PCR. After 21 days, all sparrows were euthanized and the tissues processed for histology and immunohistochemistry (IHC). One hundred sixty mice of four different strains (n=40, per strain) were used. For each mouse strain, 16 animals received mucosa homogenate from a pig infected with L. intracellularis, 16 received pure culture of L. intracellularis and eight animals received sham inoculum. Two control and four inoculated mice from each group were euthanized on 7, 14, 21 and 28 dpi. Sections of intestine were collected for histologic analysis and IHC and pooled feces were collected for L. intracellularis PCR. None of the sparrows had any histologic lesions characteristic of proliferative enteropathy or antigen labeling by IHC. All sparrow fecal samples were negative by PCR. All mice strains studied had histopathological lesions typical of PE and IHC labeling consistent with L. intracellularis infection, especially those animals inoculated with pure culture. The most severe lesions were observed in DB-A and Swiss mice. Fecal shedding was detected in all mice strains, with peak at 14 dpi. We conclude that sparrows do not seem to be relevant in the epidemiology of L. intracellularis. The results showed variations in the lesions among the four mice strains used.(AU)

A susceptibilidade de pardais (Passer domesticus) e linhagens de camundongos (Swiss, BALB / C, C-57 e DB-A) à infecção por L. intracellularis foi testada. Trinta e dois pardais foram inoculados com cultura pura de L. intracellularis e onze receberam placebo. As fezes foram coletadas nos dias -1, 7, 14 e 21 após a infecção (dpi) para a detecção de Lawsonia intracellularis por PCR. Após 21 dias, todos os pardais foram eutanasiados e os tecidos processados para a realização da histologia e imuno-histoquímica (IHQ). Cento e sessenta camundongos de quatro linhagens diferentes (n=40, por linhagem) foram utilizados. Para cada linhagem de camundongo, 16 receberam homogeneizado de mucosa preparado a partir de um suíno infectado com L. intracellularis, 16 receberam cultura pura de L. intracellularis e oito animais receberam placebo. Dois camundongos controle e quatro camundongos inoculados de cada grupo foram sacrificados aos 7, 14, 21 e 28 dpi. Seções de intestino foram coletadas para análise histológica e IHQ e amostras de fezes foram coletadas para a realização da PCR para detecção de L. Intracellularis. Nenhum dos pardais apresentou lesões histológicas características da enteropatia proliferativa ou marcação positiva por meio da IHQ. As amostras de fezes dos pardais foram negativas na PCR. Todas as linhagens de camundongos estudadas tinham lesões histopatológicas típicas de enterite proliferativa e IHQ positiva para a infecção por L. intracellularis, especialmente aqueles animais inoculados com a cultura pura. As lesões mais graves foram observadas em camundongos DB-A e Swiss. A eliminação fecal foi detectada em todas as linhagens de camundongos, com pico 14 dpi. Conclui-se que os pardais não são relevantes na disseminação da L. intracellularis. Os resultados mostraram variações nas lesões entre as quatro linhagens de camundongos utilizadas, indicando o potencial risco que os camundongos representam na transmissão de L. Intracellularis.(AU)

Neonatal diarrhea in piglets associated with cpb-2 positive Clostridium perfringens

Clostridium perfringens type A (CPA) has been recognized as one of the most important cause of neonatal diarrhea in piglets. Despite its importance, the pathogenesis of CPA-associated disease is still unclear and data regarding its occurrence in Brazil is scarce. In light of this, the aim of this study was to report a case of neonatal diarrhea in piglets by CPA encoding beta-2 toxin gene (cpb-2). Three three-day-old piglets from a 2000-sow herd with history of diarrhea were necropsied and intestinal samples were collected for histology,  immunohistochemistry, and feces samples were collected for bacteriologic and molecular procedures. Gross and histopathology revealed superficial necrotic enteritis associated with colonies of bacilli adhered to the exposed lamina propria. These ileal and jejunum fragments were positive for C. perfringens by immunohistochemistry, while anaerobic colonies were identified by PCR multiplex as CPA with the cpb-2. No other enteropathogen was identified from intestinal samples. The C. perfringens isolated strains were susceptible to penicillin, metronidazole and vancomicyn and resistant to eritromycin, enrofloxacin, oxitetracyclin and lincomycin.(AU)