Serological and molecular findings in diagnosis of leptospirosis serovar hardjo in a dairy bovine herd / Acompanhamento sorológico e molecular do sorovar hardjo no diagnóstico de leptospirose em um rebanho bovino leiteiro

The cattle are considered hosts of the Hardjo serovar, causing economic damages due to the reproductive failures like abortions and infertility. The serovar Hardjo usually remains in the reproductive tract and also in the renal tubules where it is eliminated intermittently in the urine for months. Placental remnants, the aborted fetus and contaminated urine promote the permanence of this bacterium within the herd for years. Thus, the objective of this study was to monitor for prolonged period, cows naturally infected with Leptospira ssp. through microbiological culture, serological examination and DNA detection of the pathogen in the urine. The dairy herd was composed of 50 breeding cows with a history of abortion and infertility, without leptospirosis vaccine and located in the northern region of Paraná. Blood and urine samples were collected and laboratorial diagnosis were performed five times at intervals of four months. Blood samples were collected from the all 50 animals and the serum was submitted to the microscopic agglutination test (MAT) for the detection of anti-leptospira antibodies. Of the total cows, 20 showed antibody titres ≥ 1: 100 in MAT and urine samples were collected from only those animals with higher titers to perform nested-PCR (n-PCR) and bacterial isolation per culture. In addition, two urine samples from five animals with antibody titers < 1: 100 were collected in MAT for n-PCR. Serovar Hardjo wasconsidered the most frequent during the serological monitoring of the animals evaluated. The n-PCRtechnique was able to detect leptospiral DNA in the urine of animals with MAT ≥ 1: 100 antibody titersand urine from animals whose titers were < 1: 100. Sequencing of the leptospiral amplicons shared100% nucleotide sequence identity with the Leptospira interrogans species. Positive n-PCR resultsfrom animals with titers of < 1: 100 suggest that the cut-off of MAT is could be not sufficient to detectrenal carriers, so it is also important to...(AU)

Os bovinos são considerados hospedeiros do sorovar Hardjo, causando prejuízos econômicos devido aos problemas reprodutivos como abortos e infertilidade. O sorovar Hardjo costuma permanecer no trato reprodutivo e também nos túbulos renais onde é eliminado de forma intermitente na urina por meses. Restos placentários, o feto abortado e a urina contaminada favorecem a permanência dessa bactéria dentro do rebanho por anos. Assim, o objetivo deste estudo foi monitorar por período prolongado, vacas naturalmente infectadas por Leptospira ssp. através de cultura microbiológica, exame sorológico e detecção de DNA do patógeno na urina. O rebanho leiteiro estudado era constituído por 50 vacas reprodutoras com histórico de abortos e infertilidade, sem uso de vacina contra a leptospirose e localizada na região Norte do Paraná. As amostras de sangue e urina foram coletadas e submetidas a análises laboratoriais em cinco vezes em intervalos espaçados de quatro meses. As amostras de sangue foram coletadas dos 50 animais e o soro foi submetido ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM) para detecção de anticorpos anti-leptospira. Do total vacas, 20 demonstraram títulos de anticorpos ≥ 1: 100 na SAM e foram coletadas amostras de urina apenas destes animais com maiores título para realizar a nested-PCR (n-PCR) e isolamento bacteriano por cultura. Adicionalmente, foram coletadas duas amostras de urina de cinco animais com títulos de anticorpos < 1: 100 na SAM para n-PCR. OSorovar Hardjo foi considerado como sendo o mais frequente durante o monitoramento sorológico dosanimais avaliados. A técnica de n-PCR foi capaz de detectar DNA leptospiral na urina de animais comtítulos de anticorpos ≥ 1: 100 e na urina de animais cujos títulos eram < 1:100. O sequenciamento dosamplicons leptospíricos compartilhou 100% de identidade da sequência de nucleotídeos com a espécieLeptospira interrogans. Os resultados positivos da n-PCR dos animais com títulos < 1: 100 sugerem quea...(AU)

Epidemiological status of bovine leptospirosis in the State of Paraná, Brazil / Situação epidemiológica da leptospirose bovina no estado do Paraná

The objective of this study was to determine the prevalence of antibodies against Leptospira spp and their geographic distribution and to identify the risk factors associated with this disease in cattle herds with reproductive activity in the state of Paraná. A total of 14 163 females aged ≥24 months originating from 1 926 herds that were not vaccinated against Leptospira spp were evaluated. To detect the Leptospira spp antibodies, all serum samples were submitted for a microscopic serum-agglutination test (MAT). An epidemiological questionnaire was performed at each farm visited to characterize the management practices and study the risk factors associated with the presence or absence of Leptospira spp. To perform geoprocessing, the geographical coordinates of each farm were recorded with a Global Positioning System (GPS), which were then used to create a map. The apparent prevalence of bovine leptospirosis in the herds was the parameter used to generate the final risk map. The apparent prevalences of seropositivity in the herds and animals in Paraná state were 54.28%(95%CI:52.05- 56.51) and 37.70%(95%CI:34.54-40.86), respectively. Multiple logistic regression analysis revealed that the risk factors associated with leptospirosis due to any serovar were the rental of grazing areas [OR=1.91(1.36-2.68)], presence of horses [OR=1.59(1.28-1.97)], presence of > 20 females ≥ 24 months of age [OR=2.25(1.46-3.49)], presence of > 49 bovines [OR=2.78(1.82-4.26)], purchase of animals for reproduction [OR=1.96(1.59-2.41)] and presence of calving pens [OR=1.32(1.04-1.68)]. Risk factors for leptospirosis due specifically to serovar Hardjo were the presence of > 49 bovines [OR=3.05(1.94-4.80)], presence of > 20 females ≥ 24 months [OR=2.38(1.50-3.79)], presence of horses [OR=1.87(1.45-2.43)], purchase of animals for reproduction [OR=2.14(1.68-2.72)] and rental of grazing areas [OR=2.22(1.54-3.21)]. (AU)

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos anti-Leptospira spp, sua distribuição espacial e identificar os fatores de risco associados à doença nos rebanhos bovinos com atividade reprodutiva do estado do Paraná. Foram estudadas 14.163 fêmeas com idade ≥ 24 meses, provenientes de 1.926 rebanhos não vacinados contra a leptospirose. Para detectar anticorpos contra a Leptospira spp, todos os soros foram submetidos a prova de soroaglutinação microscópica (SAM). . Em cada propriedade visitada foi aplicado um questionário epidemiológico, que permitiu a caracterização das práticas de manejo empregadas e o estudo dos fatores de risco associados com a presença ou ausência da Leptospira spp. Para o geoprocessamento, as coordenadas geográficas de cada propriedade foram obtidas por meio de aparelhos de posicionamento global por satélite (GPS), as quais foram utilizadas para a confecção do mapa. A prevalência aparente de propriedades e animais sororeagentes no estado foi de 54,28%(95%CI:52.05-56.51) e 37,70%(95%CI:34.54- 40.86), respectivamente. Na análise de regressão logística multivariada, foram identificados como fatores de risco para a infecção para qualquer sorovar de Leptospira spp: aluguel de pasto [OR=1.91(1.36-2.68)]; presença de equinos [OR=1.59(1.28-1.97)]; presença de > 20 fêmeas com idade ≥ 24 meses [OR=2.25(1.46-3.49)]; presença de > 49 bovinos [OR=2.78(1.82-4.26)]; compra de reprodutores [OR=1.96(1.59-2.41)] e presença de piquete de parição [OR=1.32(1.04-1.68)]. Os fatores de risco para a infecção pelo sorovar Hardjo foram presença de > 49 bovinos [OR=3.05(1.94- 4.80)], presença de > 20 fêmeas com idade ≥ 24 meses [OR=2.38(1.50-3.79)]; presença de equinos [OR=1.87(1.45-2.43)]; compra de reprodutores [OR=2.14(1.68-2.72)] e aluguel de pasto (O.R=2,22; I.C=1,54-3,21). [OR=2.22(1.54-3.21)]. (AU)

Epidemiological status of bovine leptospirosis in the State of Paraná, Brazil / Situação epidemiológica da leptospirose bovina no estado do Paraná

The objective of this study was to determine the prevalence of antibodies against Leptospira spp and their geographic distribution and to identify the risk factors associated with this disease in cattle herds with reproductive activity in the state of Paraná. A total of 14 163 females aged ≥24 months originating from 1 926 herds that were not vaccinated against Leptospira spp were evaluated. To detect the Leptospira spp antibodies, all serum samples were submitted for a microscopic serum-agglutination test (MAT). An epidemiological questionnaire was performed at each farm visited to characterize the management practices and study the risk factors associated with the presence or absence of Leptospira spp. To perform geoprocessing, the geographical coordinates of each farm were recorded with a Global Positioning System (GPS), which were then used to create a map. The apparent prevalence of bovine leptospirosis in the herds was the parameter used to generate the final risk map. The apparent prevalences of seropositivity in the herds and animals in Paraná state were 54.28%(95%CI:52.05- 56.51) and 37.70%(95%CI:34.54-40.86), respectively. Multiple logistic regression analysis revealed that the risk factors associated with leptospirosis due to any serovar were the rental of grazing areas [OR=1.91(1.36-2.68)], presence of horses [OR=1.59(1.28-1.97)], presence of > 20 females ≥ 24 months of age [OR=2.25(1.46-3.49)], presence of > 49 bovines [OR=2.78(1.82-4.26)], purchase of animals for reproduction [OR=1.96(1.59-2.41)] and presence of calving pens [OR=1.32(1.04-1.68)]. Risk factors for leptospirosis due specifically to serovar Hardjo were the presence of > 49 bovines [OR=3.05(1.94-4.80)], presence of > 20 females ≥ 24 months [OR=2.38(1.50-3.79)], presence of horses [OR=1.87(1.45-2.43)], purchase of animals for reproduction [OR=2.14(1.68-2.72)] and rental of grazing areas [OR=2.22(1.54-3.21)].

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos anti-Leptospira spp, sua distribuição espacial e identificar os fatores de risco associados à doença nos rebanhos bovinos com atividade reprodutiva do estado do Paraná. Foram estudadas 14.163 fêmeas com idade ≥ 24 meses, provenientes de 1.926 rebanhos não vacinados contra a leptospirose. Para detectar anticorpos contra a Leptospira spp, todos os soros foram submetidos a prova de soroaglutinação microscópica (SAM). . Em cada propriedade visitada foi aplicado um questionário epidemiológico, que permitiu a caracterização das práticas de manejo empregadas e o estudo dos fatores de risco associados com a presença ou ausência da Leptospira spp. Para o geoprocessamento, as coordenadas geográficas de cada propriedade foram obtidas por meio de aparelhos de posicionamento global por satélite (GPS), as quais foram utilizadas para a confecção do mapa. A prevalência aparente de propriedades e animais sororeagentes no estado foi de 54,28%(95%CI:52.05-56.51) e 37,70%(95%CI:34.54- 40.86), respectivamente. Na análise de regressão logística multivariada, foram identificados como fatores de risco para a infecção para qualquer sorovar de Leptospira spp: aluguel de pasto [OR=1.91(1.36-2.68)]; presença de equinos [OR=1.59(1.28-1.97)]; presença de > 20 fêmeas com idade ≥ 24 meses [OR=2.25(1.46-3.49)]; presença de > 49 bovinos [OR=2.78(1.82-4.26)]; compra de reprodutores [OR=1.96(1.59-2.41)] e presença de piquete de parição [OR=1.32(1.04-1.68)]. Os fatores de risco para a infecção pelo sorovar Hardjo foram presença de > 49 bovinos [OR=3.05(1.94- 4.80)], presença de > 20 fêmeas com idade ≥ 24 meses [OR=2.38(1.50-3.79)]; presença de equinos [OR=1.87(1.45-2.43)]; compra de reprodutores [OR=2.14(1.68-2.72)] e aluguel de pasto (O.R=2,22; I.C=1,54-3,21). [OR=2.22(1.54-3.21)].

Serological and molecular findings in diagnosis of leptospirosis serovar hardjo in a dairy bovine herd / Acompanhamento sorológico e molecular do sorovar hardjo no diagnóstico de leptospirose em um rebanho bovino leiteiro

The cattle are considered hosts of the Hardjo serovar, causing economic damages due to the reproductive failures like abortions and infertility. The serovar Hardjo usually remains in the reproductive tract and also in the renal tubules where it is eliminated intermittently in the urine for months. Placental remnants, the aborted fetus and contaminated urine promote the permanence of this bacterium within the herd for years. Thus, the objective of this study was to monitor for prolonged period, cows naturally infected with Leptospira ssp. through microbiological culture, serological examination and DNA detection of the pathogen in the urine. The dairy herd was composed of 50 breeding cows with a history of abortion and infertility, without leptospirosis vaccine and located in the northern region of Paraná. Blood and urine samples were collected and laboratorial diagnosis were performed five times at intervals of four months. Blood samples were collected from the all 50 animals and the serum was submitted to the microscopic agglutination test (MAT) for the detection of anti-leptospira antibodies. Of the total cows, 20 showed antibody titres ≥ 1: 100 in MAT and urine samples were collected from only those animals with higher titers to perform nested-PCR (n-PCR) and bacterial isolation per culture. In addition, two urine samples from five animals with antibody titers < 1: 100 were collected in MAT for n-PCR. Serovar Hardjo wasconsidered the most frequent during the serological monitoring of the animals evaluated. The n-PCRtechnique was able to detect leptospiral DNA in the urine of animals with MAT ≥ 1: 100 antibody titersand urine from animals whose titers were < 1: 100. Sequencing of the leptospiral amplicons shared100% nucleotide sequence identity with the Leptospira interrogans species. Positive n-PCR resultsfrom animals with titers of < 1: 100 suggest that the cut-off of MAT is could be not sufficient to detectrenal carriers, so it is also important to...

Os bovinos são considerados hospedeiros do sorovar Hardjo, causando prejuízos econômicos devido aos problemas reprodutivos como abortos e infertilidade. O sorovar Hardjo costuma permanecer no trato reprodutivo e também nos túbulos renais onde é eliminado de forma intermitente na urina por meses. Restos placentários, o feto abortado e a urina contaminada favorecem a permanência dessa bactéria dentro do rebanho por anos. Assim, o objetivo deste estudo foi monitorar por período prolongado, vacas naturalmente infectadas por Leptospira ssp. através de cultura microbiológica, exame sorológico e detecção de DNA do patógeno na urina. O rebanho leiteiro estudado era constituído por 50 vacas reprodutoras com histórico de abortos e infertilidade, sem uso de vacina contra a leptospirose e localizada na região Norte do Paraná. As amostras de sangue e urina foram coletadas e submetidas a análises laboratoriais em cinco vezes em intervalos espaçados de quatro meses. As amostras de sangue foram coletadas dos 50 animais e o soro foi submetido ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM) para detecção de anticorpos anti-leptospira. Do total vacas, 20 demonstraram títulos de anticorpos ≥ 1: 100 na SAM e foram coletadas amostras de urina apenas destes animais com maiores título para realizar a nested-PCR (n-PCR) e isolamento bacteriano por cultura. Adicionalmente, foram coletadas duas amostras de urina de cinco animais com títulos de anticorpos < 1: 100 na SAM para n-PCR. OSorovar Hardjo foi considerado como sendo o mais frequente durante o monitoramento sorológico dosanimais avaliados. A técnica de n-PCR foi capaz de detectar DNA leptospiral na urina de animais comtítulos de anticorpos ≥ 1: 100 e na urina de animais cujos títulos eram < 1:100. O sequenciamento dosamplicons leptospíricos compartilhou 100% de identidade da sequência de nucleotídeos com a espécieLeptospira interrogans. Os resultados positivos da n-PCR dos animais com títulos < 1: 100 sugerem quea...

Epidemiologia da leptospirose bovina no estado do paraná

O presente trabalho teve como objetivo estudar a epidemiologia da leptospirose em rebanhos bovinos com atividade reprodutiva do estado do Paraná. Para este estudo, o estado foi estratificado em sete circuitos produtores. O delineamento estatístico, as amostras sorológicas e as informações referentes às propriedades foram as empregadas para o estudo da brucelose bovina no Estado do Paraná, dentro do contexto do Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT). Foram determinados a prevalência de anticorpos-Leptospira spp, sua distribuição espacial e os fatores de risco associados à infecção no estado. Para todo o estado, foram avaliadas 14.163 fêmeas bovinas com idade ? 24 meses, provenientes de 1.926 rebanhos não vacinados contra a leptospirose. As informações necessárias para o geoprocessamento foram obtidas durante as visitas as propriedades rurais, nas quais foram aplicados os questionários epidemiológicos para a obtenção de informações epidemiológicos e práticas de manejo empregadas e realizadas as coletas de amostras de sangue. Para o diagnóstico sorológico da infecção foi utilizada a prova de soroaglutinação microscópica (SAM) com 22 sorovares de Leptospira spp. O programa ArcGIS 9 foi utilizado para a confecção do mapa de risco final, definindo as áreas de maior risco epidemiológico da enfermidade no estado. A prevalência de rebanhos e animais do estado foi de 54,28% [52,05-56,51] e 37,70% [34,54-40,86]. Nos circuitos produtores, a prevalência de rebanhos e animais foram respectivamente: circuito1: 77,74% [72,44-82,45] e 41,13% [34,07-48,20]; circuito 2: 82,50% [77,53-86,76] e 47,29% [39,33-55,25]; circuito 3: 59,49%[53,42-65,35] e 34,89% [27,70-42,09]; circuito 4: 66,06% [60,12-71,65] e 48,09% [41,29-54,89]; circuito 5: 34,77% [29,19-40,67] e 22,96% [14,33-31,60]; circuito 6: 27,60% [22,44-33,24] e 28,59 [18,70-38,48]; circuito 7: 40,08% [34,04-46,35] e 24,43 [15,31-33,56]. As variáveis relacionadas à característica da população animal e ao manejo zootécnico dos rebanhos foram associadas à soropositividade à Leptospira spp no estado do Paraná. A visualização espacial dos rebanhos sororeagentes na SAM permitiu identificar as regiões noroeste/norte e sudoeste como as áreas de maior ocorrência e risco da enfermidade no estado. Estes resultados indicam que a leptospirose está amplamente distribuída no estado do Paraná e que fatores de risco relacionados às características das propriedades e ao manejo estão associados à infecção. Foi realizado o acompanhamento sorológico, molecular e tentativas de isolamento em amostras de urina de um único rebanho bovino de leite naturalmente infectado pela Leptospira spp, constituído por 50 fêmeas em idade reprodutiva, localizado na região norte do estado do Paraná. Os animais apresentavam histórico de abortamentos e infertilidades e não haviam sido vacinados contra a leptospirose. Entre novembro/2009 a abril/2011, foram realizadas cinco coletas de sangue e urina em intervalos regulares de quatro meses. Para a realização da SAM, foram colhidas amostras de sangue das 50 fêmeas do rebanho. Dentre estas, foram colhidas amostras de urina de 20 fêmeas com títulos de anticorpos ? 100 na SAM para a realização da nested-PCR (n-PCR) e cultura para isolamento bacteriano. Adicionalmente, duas coletas de urina foram realizadas em cinco animais que apresentaram títulos de anticorpos ? 100 na SAM para a realização da n-PCR. Os produtos amplificados na n-PCR foram sequenciados e a i

Associação da leptospirose com lesões renais macroscópicas tipo white spots em suínos aparentemente sadios, abatidos em frigorífico da região norte do estado do paraná

A leptospirose suína é uma zoonose de grande significado econômico, responsável por elevadas perdas econômicas devido ao comprometimento no desempenho reprodutivo dos animais acometidos. Entretanto, suínos de terminação infectados por leptospiras são considerados freqüentemente como portadores sãos e quando levados ao abate, estes animais podem passar despercebidos pelo Serviço de Inspeção Veterinária. Diversos autores consideram as lesões macroscópicas nos rins, conhecidas como “white spots”, como a única indicação de leptospirose em suínos. O objetivo deste trabalho foi associar a leptospirose em suínos aparentemente sadios, abatidos em frigorífico da região norte do Estado do Paraná com as lesões renais macroscópicas tipo “white spots”. Foram colhidas amostras de rim e sangue intracardíaco de 120 animais com lesões renais macroscópicas tipo “white spots” e de 120 sem lesões renais macroscópicas tipo “white spots”, utilizados como controle. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste do Qui-Quadrado (?²) ou Exato de Fisher. Para detectar anticorpos contra Leptospira spp, todos os soros foram submetidos a prova de soroaglutinação microscópica (SAM). Considerando a diluição 1:100 como ponte de corte da reação, não foi encontrada associação entre a SAM e as lesões renais macroscópicas tipo “white spots” (p=0,27). Todos os soros não reagentes na diluição 1:100 foram novamente diluídos a 1:20, 1:40 e 1:80. Considerando todos os soros com títulos de anticorpos ? 20 na SAM, foi encontrada associação entre a SAM e as lesões renais macroscópicas tipo “white spots” (p=0,0021). Os exames histopatológicos, corados pelo HE, realizados em cortes de rins do grupo com lesões “white spots” mostrou alterações estruturais em 118 (98,33%) suínos e em 84 (70,00%) animais do grupo sem lesões “white spots”. Foi verificada a associação entre os exame histopatológicos e as lesões renais macroscópicas tipo “white spots” (p=0,0001). Os resultados deste trabalho indicam que a Leptospira spp pode ser considerada uma das responsáveis pelas lesões macroscópicas tipo “white spots” em suínos, aparentemente sadios, abatidos em frigorífico, com títulos ? 20 na prova de soroaglutinação microscópica