Resumo
Erliquias são bactérias Gram negativas classificadas na ordem Rickettsiales e 162 família Anaplasmataceae. Dentre as seis espécies descritas, destacamos Ehrlichia 163 canis que é o agente etiológico da Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma doença 164 grave e endêmica no Brasil, e E. chaffeensis que é o agente etiológico da Erliquiose 165 Monocítica Humana (EMH), uma zoonose emergente difundida na América do Norte. 166 A partir de avanços no campo da biologia molecular um grupo de proteínas que 167 apresentam sequências de repetições de aminoácidos (tandem repeat protein-TRP) 168 foram identificadas e caracterizadas. As proteínas TRP19 e TRP32 apresentaram-se 169 conservadas entre diferentes isolados de E. canis e E. chaffeensis respectivamente. 170 Contudo, a TRP36 de E. canis demonstrou divergência entre isolados, tornando-a 171 excelente alvo para identificar diferentes genótipos da bactéria. Essas proteínas são 172 importantes e excelentes para o diagnóstico das erliquioses. O presente estudo 173 objetivou avaliar a aplicabilidade das TRPs no diagnóstico da EMC em população 174 canina suspeita em área endêmica, verificar se existem diferenças clínicas e 175 hematológicas em cães infectados pelos diferentes genótipos, determinar a 176 distribuição dos diferentes genótipos de E. canis no Brasil e investigar cães 177 sororreagentes ao antígeno de E. chaffeensis. A TRP19 mostrou ser excelente 178 ferramenta para o diagnóstico sorológico de EMC em área endêmica para erliquiose 179 canina. Não observamos diferenças clínicas em cães infectados pelos genótipos 180 distintos de E. canis. TRP19 apresentou correlação positiva com a variável proteína 181 e correlação negativa com hematócrito e plaquetas. USTRP36 mostrou forte 182 correlação positiva com proteínas. Ainda, o diagnóstico baseado em TRP19 mostrou 183 associação com anemia, trombocitopenia e hiperproteinemia. De modo geral, os 184 genótipos americano e brasileiro de E. canis estão amplamente distribuídos pelo 185 Brasil, com exceção da região Sul do Brasil onde a soro-ocorrência é baixa. Reação 186 sorológica frente ao genótipo da TRP36 Costa Rica e à proteína TRP32, específica 187 de E. chaffeensis,foi observado pela primeira vez no Brasil
Ehrlichias are Gram negative bacteria classified in the order Rickettsiales and 196 family Anaplasmataceae. Among the six described species, we highlight Ehrlichia 197 canis, which is the etiological agent of Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME), a 198 serious and endemic disease in Brazil, and E. chaffeensis, which is the etiological 199 agent of Human Monocytic Ehrlichiosis (HME), an emerging zoonosis widespread in 200 North America. From advances in the field of molecular biology, a group of proteins 201 that have sequences of amino acid repetitions (tandem repeat protein-TRP) were 202 identified and characterized. The TRP19 and TRP32 proteins were conserved among 203 different isolates of E. canis and E. chaffeensis respectively. However, the TRP36 of 204 E. canis showed divergence between isolates, making it an excellent target to identify 205 different genotypes of the bacterium. These proteins are important and excellent for 206 the diagnosis of ehrlichiosis. The present study aimed to evaluate the applicability of 207 TRPs in the diagnosis of CME in a suspected canine population in an endemic area, 208 to verify whether there are clinical and hematological differences in dogs infected by 209 different genotypes, to determine the distribution of different E. canis genotypes in 210 Brazil and to investigate dogs seroreactive to the E. chaffeensis antigen. TRP19 211 proved to be an excellent tool for the serological diagnosis of CME in an endemic 212 area for canine ehrlichiosis. Clinical differences in dogs infected by distinct E. canis 213 genotypes were not found. TRP19 showed a positive correlation with the protein 214 variable and a negative correlation with hematocrit and platelets. USTRP36 showed 215 a strong positive correlation with proteins. In addition, the diagnosis based on TRP19 216 showed an association with anemia, thrombocytopenia and hyperproteinemia. In 217 general, the American and Brazilian E. canis genotypes are widely distributed in 218 Brazil, except for the southern region of Brazil where the serum occurrence is low. 219 Serological reaction to the TRP36 Costa Rica genotype and TRP32 protein was 220 observed for the first time in Brazil.
Resumo
A ocorrência de anticorpos contra o vírus da cinomose canina (CDV), parvorvírus e Ehrlichia spp. em carnívoros selvagens cativos foram avaliados em um jardim zoológico no Centro Oeste do Brasil. As amostras foram coletadas entre os anos de 2007 e 2014 de 45 carnívoros, incluindo espécies das famílias Canidae, Felidae, Procyonidae e Mustelidae. Os anticorpos foram avalidos pelo teste de vírus neutralização (VN) para CDV (ponto de corte: 8), inibição da hemaglutinação (HI) para parvovírus (ponto de corte: 80), reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para Ehrlichia spp. (ponto de corte 40) e ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA) para Ehrlichia canis. Anticorpos contra CDV e parvovírus foram detectados em 75% dos canídeos e felídeos (12/16). Procionídeos foram negativos para CDV, no entanto, um mustelídeos (Galictis cuja) foi positivo. Um Chrysocyon brachyurus e um Cerdocyon thous apresentaram anticorpos reativos para antígeno de E. canis. A alta frequência de anticorpos para o CDV e parvovirus sugere o contato dos carnívoros com ambos antígenos, no entanto, os animais responderam satisfatoriamente, visto que não a registros de doença clínica entre os carnívoros do Zoo-UFMT. A baixa frequência de anticorpos anti-Ehrlichia pode ser resultante da ausência de parasitismo por carrapatos. Outros estudos são necessários para compreender se a localização do Zoo-UFMT e a presença de animais domésticos em suas proximidades contribuíram para a propagação destes agentes infecciosos.
The occurrence of antibodies against canine distemper virus (CDV), parvovirus and Ehrlichia spp. in wild captive carnivores was evaluated in a zoological park in midwestern Brazil. Serum samples were collected between 2007 and 2014 from 45 carnivores, including the families Canidae, Felidae, Procyonidae and Mustelidae. Antibodies were evaluated by virus neutralization (VN) assay for CDV (cut-off: 8 VNU), hemagglutination inhibition (HI) test for parvovirus (cut-off: 80 HIU), indirect immunofluorescent assay (IFA) for Ehrlichia spp. (cut off: 40) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for Ehrlichia canis. Antibodies against CDV and parvovirus were detected in 75% of Canidae and Felidae (12/16). Procyonidae were negative for CDV, although one Mustelidae (Galictis cuja) was positive. One Chrysocyon brachyurus and one Cerdocyon thous presented antibodies reactive to E. canis antigens. The high antibodies rates to CDV and parvovirus suggest the contact with both pathogens, however since no clinical history of disease are registered in the Zoo-UFMT, we can presume that carnivores have responded satisfactorily against the antigens. The low serological rates observed against Ehrlichia spp. may be resulted to the low occurrence of ticks among carnivores. Additional studies are necessary to understand if the localization of the Zoo-UFMT and the close presence of domestic animals to the zoo contributes for the propagation of CDV, parvovirus and Ehrlichia in the area.