Resumo
A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotecnologia importante para auxiliar na disseminação da genética de animais de interesse zootécnico, resultando em maior produtividade do rebanho. Entretanto, animais Bos taurus apresentam pior resultado na PIVE em relação aos Bos indicus em condições de clima tropical, possivelmente por serem mais suscetíveis ao estresse e apresentarem metabolismo diferente, o qual pode influir de forma negativa na competência dos ovócitos. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi quantificar a abundância de mRNA de genes relacionados ao estresse térmico (HSPA5), estresse oxidativo (SOD2, GPX3), metabolismo de glicose (SLC2A3) e apoptose (CASP3, FOSL1) em ovócitos e células do cumulus (CC) de doadoras das raças Gir (n=10), Holandês (n=7) e ½ Sangue Gir-Holandês (n=12) ao final das estações de verão e inverno. Para isto, cada doadora foi submetida à 4 sessões consecutivas de aspiração folicular (OPU) com 72 horas de intervalo entre elas. Após a OPU, os complexos cumulus-ovócito (COCs) foram classificados de acordo com qualidade (graus 1, 2, 3 e 4) sendo os graus 1 e 2, e suas respectivas CC utilizados para análise molecular. A expressão dos genes SLC2A3, HSPA5, SOD2 e FOSL1 para CCs e ovócitos, GPX3 para CCs e CASP3 para ovócitos foi quantificada por PCR em tempo real. Animais zebuínos e mestiços apresentaram maior média de COCs viáveis recuperados (3,3±0,3 e 3,6±0,6, respectivamente) em relação aos taurinos (1,3±0,3). A estação de inverno provocou redução na média de COCs totais em zebuínos (7,5±0,7 vs. 5,9±0,9) e mestiços (17,8±3,4 vs. 11,2±0,5), em quanto o verão foi prejudicial para taurinos (2,7±0,9 vs. 4,2±1,9). Com relação a expressão dos genes, as estações do ano não apresentaram efeito sob nenhuma das raças. Ao avaliar a diferença na expressão dos genes entre as raças, independente da estação do ano, os genes HSPA5 e SLC2A3 em ovócitos apresentaram maior expressão em Holandês em relação aos ovócitos de doadoras ½ sangue Gir-Holandês. Para as CC não foi observada diferença na expressão dos genes entre as raças. Conclui-se que a estação do ano apresenta influência na quantidade de COCs recuperados, mas não na expressão de genes relacionados ao estresse. Além disso, ovócitos de animais taurinos apresentam maior expressão de genes relacionados ao estresse em relação às outras raças, sem que haja diferença na expressão desses genes em células do cumulus.
In vitro embryo production (IVEP) is an important biotechnology to assist in the geneticdissemination of animals of zootechnical interest, resulting in greater productivity of the herd. However, Bos taurus show worse results in IVEP compared with Bos indicus in tropical climate conditions, possibly because they are more susceptible to stress and presents different metabolism, which can negatively influence the oocyte competence. Thus, the objective with this work was to quantify the mRNA of genes related to heat stress (HSPA5), oxidative stress (GPX3, SOD2), glucose metabolism (SLC2A3) and apoptosis (CASP3, FOSL1) in oocytes and cumulus cells (CC) of Gir (n=10), Holstein (n=7) and ½ Holstein-Gir (n=12) donors at the end of summer and winter seasons. For this, each donor was submitted to 4 consecutive follicular aspiration session (OPU) with 72-hour interval between them. After OPU, the cumulus-oocyte complexes (COCs) were classified according to the quality (grades 1, 2, 3 and 4) with grades 1 and 2, and their respective CC used for molecular analysis. The expression of SLC2A3, HSPA5, SOD2 and FOSL1 genes for CCs and oocytes, GPX3 for CCs and CASP3 for oocytes was quantified by real-time PCR. Zebu and crossbred animal had higher average of viable COCs recovered (3.3±0.3 and 3.6±0.6, respectively) compared to Taurine (1.3±0.3). The winter season caused a reduction in the average of total COCs in zebu (7.5±0.7 vs. 5.9±0.9) and crossbred (17.8±3.4 vs. 11.2±0.5), while the summer was harmful for Taurine (2.7±0.9 vs. 4.2±1.9). Regarding the gene expression, the season had no effect on any breed. Assessing the difference in gene expression between breeds, regardless of the season, the HSPA5 and SLC2A3 genes in oocyte showed greater expression in Holstein compared to oocytes from ½ Holstein-Gir donors. For CCs, no difference was observed in gene expression between breeds. It is concluded that the season has an influence on the amount of COCs recovered, but not on the expression of stress-related genes. In addition, oocytes from Taurine animals show greater expression of stress-related genes than other breeds, with no difference in the expression of these genes in cumulus cells.