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1.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212953

Resumo

Tumores nas glândulas mamárias caninas representam a neoplasia mais comum em cadelas. Este tipo de tumor em cadelas é muito semelhante quanto ao comportamento biológico, resposta a agentes citotóxicos e características histológicas comparadas aos tumores apresentados em humanos, mas sua taxa de incidência é três vezes maior que em mulheres. Em relação aos tratamentos, muitas vezes é necessária a utilização da quimioterapia para erradicar metástases, no entanto, a maioria dos tumores caninos é apenas moderadamente sensível à quimioterapia. Nesse contexto, o atual cenário favorece ensaios terapêuticos pré-clinicos e pesquisas voltadas para novos tratamentos anti-câncer. Nesse sentido, o uso de células-tronco amnióticas tem se destacado neste campo. Desta forma, caracterizamos células de membrana amniótica canina, onde verificamos que estas apresentavam expressão para marcadores de células mesenquimais. Além disso, apresentaram capacidade de diferenciação em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e, quando injetadas in vivo, não apresentaram potencial tumorigênico. Posteriormente, avaliamos a matriz extracelular de carcinomas mamários canino do tipo tubular e sólido. Verificamos que o carcinoma sólido apresentou maior grau de malignidade devido a suas características histológicas e com os componentes presentes em sua matriz extracelular. Por fim, avaliamos os efeitos do tratamento com doxorrubicina (DOXO) em associação com células-tronco de membrana amniótica canina (AMC) sobre células de carcinoma inflamatório mamário canino (IPC-366), e células de carcinoma sólido mamário canino (TCM). Para isso, quatro grupos experimentais foram analisados: grupo controle sem tratamento; grupo I com DOXO, grupo II com AMC e grupo III associação de DOXO com AMC. Verificamos que nas células IPC-366, o grupo associação de DOXO com AMC em células apresentou melhores resultados em relação à redução do crescimento celular e na expressão de proteínas relacionadas à proliferação e angiogênese. Já nas células TCM verificamos que o tratamento com células AMC, sendo ou não associada à DOXO, possui a capacidade de prender as células no ciclo celular na fase de repouso fazendo com que as mesmas apresentem redução em seu crescimento e proliferação celular.


The tumors on the canine mammary glands represent the most common neoplasm in bitches. This type of tumor in bitches responds to cytotoxic agents in a very similar biological way when compared to tumors presented in humans. Besides that, they have the same histological characteristics, but its incidence rate is three times higher in bitches than in women. Regarding treatments, chemotherapy is often required to eradicate metastases, however, most canine tumors are only moderately sensitive to chemotherapy. In this context, the current scenario favors pre-clinical therapeutic trials and research aimed at new anticancer treatments. In this sense, the use of amniotic stem cells has been outstanding in this field. So, we characterized canine amniotic membrane cells. At this characterization we verified that they had expression for markers of mesenchymal cells, and present differentiation capacity in osteogenic, adipogenic and chondrogenic lines. When injected in vivo, did not present tumorigenic potential. Subsequently, we evaluated the extracellular matrix of canine mammary carcinomas of the tubular and solid type. We verified that solid carcinoma showed a higher degree of malignancy due to its histological characteristics and the components present in its extracellular matrix. Finally, we evaluated the effects of doxorubicin treatment (DOXO) in combination with canine amniotic membrane (AMC) stem cells on canine mammary inflammatory carcinoma cells (IPC-366), and solid canine mammary carcinoma cells. For this, four experimental groups were analyzed: control group without treatment; group I with DOXO, group II with AMC and group III association of DOXO with AMC. We found that at the IPC-366 cells, the association group of DOXO with AMC in cells presented better results regarding to the reduction of cell growth and expression of proteins related to proliferation and angiogenesis. In the TCM cells, we found that treatment with AMC cells, whether associated with DOXO, can bind the cells in the cell cycle during the resting phase, promoting the cell growth decrease and proliferation. Keywords: Amniotic membrane. Canine breast cancer. Doxorubicin. Neoplasm. Stem cells.

2.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203578

Resumo

As células tronco possuem a capacidade de auto renovação ilimitada e de se manterem indiferenciadas durante um período prolongado de tempo, até se diferenciarem em uma linhagem celular específica. Devido as dificuldades encontradas na utilização de células embrionárias por questões éticas, de segurança e histocompatibilidade e a limitada plasticidade das células tronco adultas, as células tronco fetais, derivadas de tecidos extraembrionários, aparecem no cenário terapêutico como uma alternativa promissora. Uma vez que apresentam alta capacidade de proliferação e expansão in vitro, além de sua característica imunogênica, por se encontrarem na interface materno fetal. Por conta destas características, a membrana amniótica surgiu como uma nova e importante fonte de células tronco em diferentes espécies. Neste trabalho, foram utilizados 8 fetos de coelhos para a coleta da membrana amniótica. A membrana foi isolada pela técnica de explante, as amostras foram cultivadas em meio DMEM-HIGH, e posteriormente criopreservadas nas passagens P4 e P8 para realizar os experimentos. Em cultivo, essas células apresentaram aderência a placa, alta capacidade de proliferação e morfologia semelhante à fibroblastos. Na caracterização imunofenotípica, houve expressão de marcadores de citoesqueleto, de células mesenquimais, proliferação, pluripotência e para precursores de células hematopoiéticas, embora não tenha ocorrido a expressão de marcadores de células hematopoiéticas (CD-45) e de células precursoras neuronais. Quando induzidas a diferenciação in vitro, as células amnióticas tiveram capacidade de se diferenciarem nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. Além disso, quando injetadas em camundongos nude, não foi verificada a formação de tumor. Nossos resultados demostram que células de membrana amniótica de coelho podem ser consideradas células tronco mesenquimais com possibilidade de serem utilizadas no futuro na terapia celular.


Stem cells are capable of unlimited self renewal and to remain undifferentiated for a prolonged period of time up to differentiate into a specific cell lineage. Due to the difficulties in the use of embryonic cells due ethical reasons, security and histocompatibility, and in the other hands, the limited plasticity of adult stem cells, fetal stem cells, derived from extraembryonic tissues, appear in the therapeutic setting as a promising alternative. They have high capacity of proliferation and in vitro expansion, as well as immunogenic properties, since they are at the maternal-fetal interface. Due to these characteristics, the amniotic membrane has emerged as an important new source of stem cells in different species. In this work, we used 8 fetuses of rabbits to collect amniotic membrane. The membrane was isolated by the explant technique. Samples were cultured in DMEM-HIGH, and cryopreserved in the passages P4 and P8 in order to perform the experiments. In culture, these cells exhibited adhesion to the dishes, high proliferative capacity and fibroblast-like morphology. In immunophenotypic characterization, there was expression of markers related to cell cytoskeleton, mesenchymal stem cells, proliferation, pluripotency, and hematopoietic precursor cells. And there was no expression of hematopoietic cell markers (CD-45) and neuronal precursor cells. When induced to in vitro differentiation, the amniotic cells were able to differentiate in osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. Furthermore, when injected into nude mice, tumor formation has not been verified. Our results demonstrate that rabbit amniotic membrane cells can be considered mesenchymal stem cells with possibility to be used in the future in cell therapy.

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