ATP-bioluminescence assay as an alternative for hygiene-monitoring procedures of stainless steel milk contact surfaces

ATP-bioluminescence assay was used to evaluate the cleaning and sanitizing procedures of stainless steel milk contact surfaces. Surfaces of a raw milk transportation tank, a raw milk cooling storage tank, an equalization pasteurizing tank, a pasteurized milk storage tank and a pasteurized milk packaging tank, as well as a milk centrifuge were evaluated. The Relative Light Unit (RLU) using a commercial luminometer and mesophilic aerobic counts (CFU.cm-2) on surfaces were determined. There were no significant differences (p>0.05) in RLU on the assessed surfaces before and after the cleaning and sanitizing procedures. Also, there were no significant differences (p>0.05) in CFU.cm-2 on the surfaces before the cleaning and sanitizing procedures, whereas different bacterial numbers were found on surfaces after the hygiene procedures. The surfaces of the milk centrifuge, raw milk cooling tank and milk packaging tank showed the largest mesophilic aerobic numbers after the hygiene, reaching 2.21, 2.18, and 1.21 log10, respectively. The results demonstrated that there is no agreement among the techniques for classification of hygienic conditions of the evaluated surfaces, showing a non-direct relation between RLU and CFU.cm-2. The ATP-bioluminescence method showed that 100% of the surfaces were under inadequate hygiene conditions, while the plate count method detected only 50%, based on the APHA's recommendation, and 33%, based on the WHO's recommendation. High variations in RLU measurements were observed, suggesting the need for more than only one surface analysis. The ATP-bioluminescence is not a direct replacement for microbiological testing, but provides complementary information and should be used as part of an integrated strategy.

A técnica do ATP-bioluminescência avaliou os procedimentos de higienização de superfícies em aço inoxidável dos tanques de transporte de leite cru, de estocagem de leite cru resfriado, de equilíbrio de um pasteurizador, de estocagem de leite pasteurizado e para embalagem de leite pasteurizado e, ainda, a superfície interna de uma centrífuga de leite quanto à determinação de Unidades Relativas de Luz (URL) e da contagem de mesófilos aeróbios (UFC.cm-2). Não houve diferença significativa (p>0.05) na medida de URL nas superfícies antes e depois do procedimento de higienização. Também, não houve diferença significativa (p>0.05) no número de UFC.cm-2 nas superfícies antes da higienização. No entanto, contagens bacterianas diferentes foram constatadas após este procedimento. As superfícies da centrífuga e dos tanques de leite resfriado e para embalagem de leite apresentaram as maiores contagens após a higienização, atingindo 2,21, 2,18, e 1,21 log10, respectivamente. Os resultados mostram que não há concordância entre os métodos na classificação das condições higiênicas das superfícies, indicando que não há relação direta entre RLU e UFC.cm-2. A técnica do ATP-bioluminescência indicou que 100% das superfícies estavam em condições higiênicas inadequadas, enquanto a contagem bacteriana indicou apenas 50% de acordo com as recomendações da APHA e 33% de acordo com OMS. Variações elevadas nas medidas de URL sugerem a necessidade de se realizar mais de uma análise na mesma superfície. A técnica do ATP-bioluminescência não deve simplesmente substituir os testes microbiológicos mas ser usada para se obter informações complementares para avaliar as condições higiênicas das superfícies para o processamento de leite.

Production of pectin lyase by Penicillium griseoroseum in bioreactors in the absence of inducer

Penicillium griseoroseum was grown in bioreactors on mineral medium supplemented with yeast extract and sucrose. The influence of inoculum and carbon source concentrations, aeration and pH on pectin lyase (PL) production, as well as the capacity of P. griseoroseum to produce PL when grown on sugar cane syrup as carbon source were evaluated. Inoculum concentration did not influence PL production. Production was higher in non-aerated than in aerated medium. The best results were obtained using 60 mM sucrose at pH 6.3-7.2. Production using cane syrup 25% (v/v), without yeast extract supplement, was equal to that obtained under the conditions cited above.

Penicillium griseoroseum foi cultivado em biorreatores em meio mineral suplementado com extrato de levedura e sacarose. As influências das concentrações do inóculo e da fonte de carbono, da aeração e do pH do meio de cultivo sobre a produção de pectina liase (PL), bem como a capacidade de P. griseoroseum em produzir PL quando cultivado em caldo de cana diluído foram avaliadas. A concentração do inóculo não influenciou significativamente a produção de PL. O cultivo do fungo em biorreatores não aerados favoreceu a produção da PL em detrimento aos biorreatores com injeção de ar. Maior produção de PL foi obtida com o cultivo de P. griseoroseum em meio com pH 6,3 - 7,2, adicionado de 60 mM de sacarose. Quando cultivado em caldo de cana diluído, 25% (v/v), sem suplementação com extrato de levedura, a atividade máxima de PL alcançada foi igual as das condições citadas acima.