Resumo
The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100% sensitivity and 94% specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.
A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100% de sensibilidade e 94% de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.
Resumo
This investigation was conducted for one year in order to monitor the hygienic sanitary conditions of oysters (Crassostrea gigas) and saline waters from sea farms at the South Bay of Santa Catarina Island, by means of microorganism indicators. Oysters and saline waters samples were assayed by bacteria counting technique for coliforms at 35C, coliforms at 45C and Escherichia coli. Physical and chemical parameters were assessed in water samples (pH, salinity, turbidity and temperature) and oyster samples (pH). Positive correlations on coliform counts at 35C and at 45C, and E. coli were observed within saline waters and samples of oyster meat. Statistically significant differences on coliforms counting at 45ºC were observed among saline water samples collected from the region E. Physical-chemical parameters showed somewhat no statistical correlation with microorganism counting. Nonetheless, the influence of rainfall indices in the Great Florianopolis region over the bacteriological counting in saline waters and oysters could be observed. The coliforms counting at 45C in saline water samples complied with the parameters established by the Brazilian legislation, although the basic sanitation at bivalve shellfish growing sites and a regular bacteriological quality monitoring by using specific indicators are demanded for the culturing water and for growing oysters.
Esta investigação teve como objetivo efetuar o monitoramento da qualidade higiênico-sanitária em ostras (Crassostrea gigas) e águas salinas de fazendas marinhas da Baía Sul da Ilha de Santa Catarina, por meio de microrganismos indicadores, durante o período de um ano. As amostras de ostras e águas salinas foram submetidas a ensaios microbiológicos para enumeração de coliformes a 35C, coliformes a 45C e Escherichia coli. Foram avaliados os parâmetros físico-químicos de temperatura, salinidade, turbidez e pH nas águas e pH nas ostras. Foram observadas correlações positivas entre as contagens de coliformes a 35C, coliformes a 45C e E. coli nas amostras de águas salinas e de carne das ostras; e diferenças estatísticas significativas foram verificadas entre as contagens de coliformes a 45C nas amostras de águas salina provenientes da região E. Os parâmetros físico-químicos apresentaram pouca ou nenhuma correlação estatística com as contagens bacteriológicas. Considerando-se a Baía Sul em toda sua extensão, observou-se a influência do índice pluviométrico sobre as contagens bacteriológicas obtidas nas águas e nas ostras. As contagens de coliformes a 45C observadas nas águas salinas estavam de acordo com os parâmetros descritos na legislação brasileira, contudo, ressalta-se a importância da implantação de saneamento básico em regiões de cultivo de moluscos bivalves, assim como o