Identificação de bactérias no sêmen de ovinos em diferentes sistemas de criação e o efeito do uso de Kilol-L® / Identification of bacteria in the semen in different breeding systems and the effect of Kilol-L®

O objetivo deste trabalho foi identificar e quantificar as bactérias do sêmen fresco de ovino, avaliar o uso do higienizante Kilol-L® antes da coleta do sêmen e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma. Foram selecionados 24 ovinos machos, clinicamente sadios, com idade média de quatro anos, da raça Santa Inês, agrupados em dois sistemas de criação: a pasto (n=12) e confinamento (n=12). Dos 120 ejaculados coletados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos isolados com maior frequência foram Staphylococcus spp., Bacillus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Listeria spp.e Escherichia coli. Dos antibióticos testados, a amicacina e a gentamicina foram 100% eficazes para Bacillus spp. e E. coli. O ceftiofur foi efetivo para todas as bactérias isoladas, exceto Rodococcus equi. Streptococcus spp. foram sensíveis à ampicilina e eritromicina, Staphylococcus spp. foram sensíveis à gentamicina. O uso Kilol-L® reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) do ejaculado sem prejudicar a sua qualidade. Dos antibióticos testados, ceftiofur e gentamicina foram os mais efetivos frente às cepas bacterianas isoladas. Dessa forma, a utilização desses antibióticos no meio diluidor do sêmen ovino é uma alternativa para controlar o crescimento bacteriano.

The objective of this study was to identify and quantify bacteria from fresh ram semen, evaluate the use of sanitizer Kilol-L® prior to semen collection, and test the sensitivity of bacterial strains against antibiotics. We selected 24 Santa Inês rams clinically healthy, at 4 years of aged, and grouped them into two systems: on pasture (n=12) and confined (n=12). The microbiological results indicated that of the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth, representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacteria were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp., and Streptococcus spp. From the tested antibiotics, amicacin and gentamicin were 100% effective for Bacillus spp. and E. Coli. Ceftiofur was effective for all isolates except for Rodococcus equi. Streptococcus spp. were susceptible to ampicillin and erythromycin and Staphylococcus spp. were sensitive to gentamycin. The use of Kilol-L® reduced the number of Colony Forming Units (CFU/mL) from ejaculate without damaging semen quality. From the tested antibiotics, ceftiofur and gentamicin were more effective against the isolated bacterial strains; thus the use of these antibiotics in the ram semen extender is an alternative to control bacterial growth.

Identificação de bactérias no sêmen de ovinos em diferentes sistemas de criação e o efeito do uso de Kilol-L® / Identification of bacteria in the semen in different breeding systems and the effect of Kilol-L®

O objetivo deste trabalho foi identificar e quantificar as bactérias do sêmen fresco de ovino, avaliar o uso do higienizante Kilol-L® antes da coleta do sêmen e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma. Foram selecionados 24 ovinos machos, clinicamente sadios, com idade média de quatro anos, da raça Santa Inês, agrupados em dois sistemas de criação: a pasto (n=12) e confinamento (n=12). Dos 120 ejaculados coletados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos isolados com maior frequência foram Staphylococcus spp., Bacillus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Listeria spp.e Escherichia coli. Dos antibióticos testados, a amicacina e a gentamicina foram 100% eficazes para Bacillus spp. e E. coli. O ceftiofur foi efetivo para todas as bactérias isoladas, exceto Rodococcus equi. Streptococcus spp. foram sensíveis à ampicilina e eritromicina, Staphylococcus spp. foram sensíveis à gentamicina. O uso Kilol-L® reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) do ejaculado sem prejudicar a sua qualidade. Dos antibióticos testados, ceftiofur e gentamicina foram os mais efetivos frente às cepas bacterianas isoladas. Dessa forma, a utilização desses antibióticos no meio diluidor do sêmen ovino é uma alternativa para controlar o crescimento bacteriano.(AU)

The objective of this study was to identify and quantify bacteria from fresh ram semen, evaluate the use of sanitizer Kilol-L® prior to semen collection, and test the sensitivity of bacterial strains against antibiotics. We selected 24 Santa Inês rams clinically healthy, at 4 years of aged, and grouped them into two systems: on pasture (n=12) and confined (n=12). The microbiological results indicated that of the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth, representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacteria were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp., and Streptococcus spp. From the tested antibiotics, amicacin and gentamicin were 100% effective for Bacillus spp. and E. Coli. Ceftiofur was effective for all isolates except for Rodococcus equi. Streptococcus spp. were susceptible to ampicillin and erythromycin and Staphylococcus spp. were sensitive to gentamycin. The use of Kilol-L® reduced the number of Colony Forming Units (CFU/mL) from ejaculate without damaging semen quality. From the tested antibiotics, ceftiofur and gentamicin were more effective against the isolated bacterial strains; thus the use of these antibiotics in the ram semen extender is an alternative to control bacterial growth.(AU)

Influência de sistemas de refrigeração sobre a qualidade do sêmen ovino criopreservado em palhetas / influence of cooling systems o the quality of ovine semen cryopreserved in straws

Avaliaram-se diferentes sistemas de refrigeração do sêmen ovino, através da aferição e comparação das curvas obtidas e seus efeitos sobre a qualidade do sêmen criopreservado. Ao final da refrigeração, os parâmetros espermáticos motilidade, vigor, defeitos morfológicos, viabilidade e estado acrossomal foram analisados. Para a avaliação pós-descongelação mais dois testes foram acrescentados: avaliação da integridade de membrana plasmática (IMP) e teste de exaustão com quatro horas de incubação a +37ºC. A refrigeração foi realizada em refrigerador doméstico e num balcão horizontal. Para controlar a queda de temperatura desses equipamentos, colocaram-se as palhetas entre bolsas plásticas contendo água aquecida a +32ºC, constituindo quatro sistemas: RS (refrigerador sem bolsa), RC (refrigerador com bolsa), BS (balcão sem bolsa) e BC (balcão com bolsa), os quais resultaram em quatro taxas de refrigeração: -1,4ºC/min, -0,4ºC/min, -2,9ºC/ min e -0,45ºC/min, para RS, RC, BS e BC, respectivamente. Após a refrigeração, observou-se diferença na motilidade espermática (P<0,05), em que BS apresentou menor média. O sistema BS obteve a menor média de vivos íntegros e também a maior de mortos íntegros ao final da refrigeração, diferindo de RC e BC. Quanto aos defeitos morfológicos pós-refrigeração, BS apresentou maior média (P<0,05), ao passo que RC e BC apresentaram as menores médias. Não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos na descongelação e ao final do teste de exaustão. Concluiu-se que as diferentes taxas de refrigeração afetaram o sêmen no final da fase de refrigeração, mas não após a descongelação.

Different types of cooling systems of ram semen were evaluated by the measurement and comparison of cooling rates and their effects on the post-thawing quality. Motility, vigor, morphology damages, viability and acrosomal status were tested at the end of 90 minutes of cooling and post-thawing. Regarding post-thawed semen, the same parameters were used, in addition to the assessment of the integrity of the plasmatic membrane, and the resistance test by the incubation of semen at +37ºC for 4 hours. Semen refrigeration was carried out in a domestic refrigerator and in a horizontal refrigerator. To control the temperature drop of semen in both equipments, the slats were disposed between plastic bags containing water at +32ºC, constituting four combinations of cooling procedures: RS (refrigerator without bag), RC (refrigerator with bag), BS (horizontal refrigerator without bag) and BC (horizontal refrigerator with bag), resulting in four cooling rates: -1.4ºC/min, -0.4ºC/min, -2.9°C/min and -0.45ºC/min, for RS, RC, BS and BC, respectively. At the end of the cooling period, BS treatment showed the lowest percentage of sperm motility (P<0.05), the lowest mean of live spermatozoa with intact acrosome, and the highest mean of dead spermatozoa with intact acrosome (P<0.05). As for morphological defects, BS treatment had the highest mean whereas the systems RC and BC resulted in the lowest means. There was no significant difference among treatments in relation to frozen-thawed semen at the end of the resistant test. It was concluded that the different cooling rates affected ram semen at the end of cooling stage but not at post-thawing.

Influência de sistemas de refrigeração sobre a qualidade do sêmen ovino criopreservado em palhetas / influence of cooling systems o the quality of ovine semen cryopreserved in straws

Avaliaram-se diferentes sistemas de refrigeração do sêmen ovino, através da aferição e comparação das curvas obtidas e seus efeitos sobre a qualidade do sêmen criopreservado. Ao final da refrigeração, os parâmetros espermáticos motilidade, vigor, defeitos morfológicos, viabilidade e estado acrossomal foram analisados. Para a avaliação pós-descongelação mais dois testes foram acrescentados: avaliação da integridade de membrana plasmática (IMP) e teste de exaustão com quatro horas de incubação a +37ºC. A refrigeração foi realizada em refrigerador doméstico e num balcão horizontal. Para controlar a queda de temperatura desses equipamentos, colocaram-se as palhetas entre bolsas plásticas contendo água aquecida a +32ºC, constituindo quatro sistemas: RS (refrigerador sem bolsa), RC (refrigerador com bolsa), BS (balcão sem bolsa) e BC (balcão com bolsa), os quais resultaram em quatro taxas de refrigeração: -1,4ºC/min, -0,4ºC/min, -2,9ºC/ min e -0,45ºC/min, para RS, RC, BS e BC, respectivamente. Após a refrigeração, observou-se diferença na motilidade espermática (P<0,05), em que BS apresentou menor média. O sistema BS obteve a menor média de vivos íntegros e também a maior de mortos íntegros ao final da refrigeração, diferindo de RC e BC. Quanto aos defeitos morfológicos pós-refrigeração, BS apresentou maior média (P<0,05), ao passo que RC e BC apresentaram as menores médias. Não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos na descongelação e ao final do teste de exaustão. Concluiu-se que as diferentes taxas de refrigeração afetaram o sêmen no final da fase de refrigeração, mas não após a descongelação.(AU)

Different types of cooling systems of ram semen were evaluated by the measurement and comparison of cooling rates and their effects on the post-thawing quality. Motility, vigor, morphology damages, viability and acrosomal status were tested at the end of 90 minutes of cooling and post-thawing. Regarding post-thawed semen, the same parameters were used, in addition to the assessment of the integrity of the plasmatic membrane, and the resistance test by the incubation of semen at +37ºC for 4 hours. Semen refrigeration was carried out in a domestic refrigerator and in a horizontal refrigerator. To control the temperature drop of semen in both equipments, the slats were disposed between plastic bags containing water at +32ºC, constituting four combinations of cooling procedures: RS (refrigerator without bag), RC (refrigerator with bag), BS (horizontal refrigerator without bag) and BC (horizontal refrigerator with bag), resulting in four cooling rates: -1.4ºC/min, -0.4ºC/min, -2.9°C/min and -0.45ºC/min, for RS, RC, BS and BC, respectively. At the end of the cooling period, BS treatment showed the lowest percentage of sperm motility (P<0.05), the lowest mean of live spermatozoa with intact acrosome, and the highest mean of dead spermatozoa with intact acrosome (P<0.05). As for morphological defects, BS treatment had the highest mean whereas the systems RC and BC resulted in the lowest means. There was no significant difference among treatments in relation to frozen-thawed semen at the end of the resistant test. It was concluded that the different cooling rates affected ram semen at the end of cooling stage but not at post-thawing.(AU)

Coleta de sêmen ovino em estação ou decúbito lateral utilizando diferentes eletroejaculadores / Semen collection in rams standing up or in lateral recumbency using different electroejaculators

O experimento teve como objetivo avaliar e comparar dois eletroejaculadores (EEr): um automático (A – Biocom Ltda., Uberaba, MG) e outro manual (M – Duboi, Campo Grande, MS), utilizando dois métodos de contenção: estação (E) e decúbito lateral (D). Foram utilizados doze carneiros: Santa-Inês (n=9), Ile-de-France (n=2) e Texel (n=1). O sêmen foi coletado duas vezes por semana e as coletas realizadas três vezes em cada grupo (AD – automático em decúbito; AE – automático em estação; MD – manual em decúbito e ME – manual em estação) resultando em doze coletas. Antes e depois das coletas de sêmen, amostras de sangue foram coletadas para análise dos níveis plasmáticos de cortisol com objetivo de verificação do estresse entre os grupos e indivíduos. Procedeu-se à avaliação das coletas pelo tempo em segundos para obtenção da fração seminal, tempo de duração da fração seminal e porcentagem de carneiros que expuseram o pênis. Os parâmetros avaliados referentes ao sêmen foram: volume, aspecto, motilidade espermática progressiva, turbilhonamento, vigor espermático, número total de espermatozoides no ejaculado e morfologia espermática. Em 7,1% de todas as coletas não houve ejaculação, sendo que o grupo submetido ao tratamento AD (20%) foi responsável pela maior fração das coletas sem ejaculação (P0,05). No entanto, houve diferença entre indivíduos (P<0,05). As coletas de sêmen nos animais em decúbito demandaram menor tempo para atingir a fração seminal e também proporcionaram maior duração da fração seminal (P<0,05). O grupo MD obteve menor tempo em atingir a fração seminal e produziu um maior volume de sêmen quando comparado ao grupo AE (P<0,05). Os dados do experimento permitem concluir que o EEr automático e manual apresentaram resultados semelhantes, assim como as posições de coleta, decúbito ou estação.

The objective of the experiment was to evaluate and compare two electroejaculators: an automatic one (A – Biocom Ltda., Uberaba, MG) and a manual one (M – Duboi, Campo Grande, MS), using two methods of physical restrain: standing (E) or lateral recumbency (D). Twelve rams were used: Santa Inês (n=9), Ile-de-France (n=2) and Texel (n=1). Semen were collected twice a week and each animal had the semen collected three times in each group (AD – automatic in recumbency, AE – automatic in station, MD – manual in recumbency, and ME – manual in station) resulting in 12 collections. Blood samples were obtained before and after the semen collections to measure changes in circulating cortisol in order to measure stress among groups and individuals. The collections were evaluated per the time in seconds to obtain seminal fraction, time of seminal fraction and percentage of rams that exposed the penis. The collected semen parameters evaluated were: volume, aspect, progressive motility, wave motion, sperm vigor, total number of spermatozoa and sperm morphology. In 7.1% of the collections, there was no ejaculation, moreover, group AD was responsible for most of the collections without ejaculation (20%)(P0.05) relating to cortisol level after collections. However, there was difference among individuals (P<0.05). The collections in lateral recumbency were faster regarding achievement of seminal fraction and provided more time length for seminal fraction. The MD group required a shorter time length to achieve the seminal fraction and produced a greater volume of ejaculate in comparison to the AS group. It can be concluded by these results that both eletroejaculators (automatic and manual) had similar results as well as both methods of physical restrain (standing and lateral recumbency).