Resumo
No presente trabalho foi feito uma análise qualitativa de cálcio, ferro e zinco em spots de proteínas de amostras de tecido hepático de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) por Fluorescência de Raios-X de Radiação Síncroton, após a separação das proteínas por Eletroforese Bidimensional em Gel de Poliacrilamida (2D-PAGE). Os espectros de fluorescência obtidos indicaram a presença de cálcio, ferro e zinco em doze, seis e oito spots protéicos das amostras de fígado, respectivamente. Os íons metálicos detectados nas amostras estão distribuídas principalmente em proteínas de massa molar menor que 45 kDa e com pI na faixa de 4,5 a 9,0. Além do cálcio, ferro e zinco foram detectados a presença de enxofre e fósforo, elementos não metálicos, que podem ser constituintes da estrutura das proteínas. As concentrações de cálcio, ferro e zinco ligados às proteínas foram determinadas por FAAS após a mineralização ácida dos spots protéicos, encontrando-se concentrações na faixa de 1,08 a 5,80 mg g-1, 2,02 a 8,03 mm g-1 e 1,60 a 8,55 mg g-1, respectivamente
An investigation was made into calcium, iron and zinc in protein spots in samples of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) liver tissue obtained after protein separation by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and subsequent qualitative and quantitative evaluation by synchrotron radiation X-ray fluorescence (SRXRF) and graphite furnace atomic absorption spectrometry (FAAS). An analysis of the fluorescence spectra indicated the presence of calcium, iron and zinc in twelve, six and eight liver protein spots, respectively. The metal ions found were distributed mainly in proteins with a molar mass of less than 40.00 kDa and more than 12.00 kDa, with pI in the range of 4.70 to 9.40. The only exception was a spot presenting protein with a molar mass of 10.10 kDa. In addition to calcium, iron and zinc, sulfur and phosphorus ? which are non-metals that may be part of the protein structure, were also detected. After microwave-assisted acid mineralization of the proteins spots, a FAAS estimation of the concentration of calcium, iron and zinc bound to these proteins indicated a range of 1.08 to 5.80 mg g-1, 2.02 to 8.03 mg g-1 e 1.60 to 8.55 mg g-1, respectively
Resumo
O objetivo do presente trabalho foi determinar a concentração de zinco em amostras de tecido de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) produzidas no Laboratório de Nutrição de Peixes/FMVZ-UNESP/Botucatu-SP/Brasil e alimentadas com rações contendo fonte orgânica e inorgânica de zinco. Na etapa de preparação, as amostras de tecido muscular foram liofilizadas e moídas criogenicamente até obtenção de partículas menores que 60 ?m e a extração do zinco feita por mineralização ácida utilizando-se ácido sulfúrico concentrado e peróxido de hidrogênio 30% (m/m) em banho termostatizado de ultrassom. As determinações de zinco foram feitas por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS) utilizando temperaturas de secagem de 90oC - 250oC, temperatura de pirólise de 1400oC, temperatura de atomização de 2400oC e temperatura de limpeza de 2800oC. Foi utilizado como modificador químico nitrato de paládio injetado junto com as amostras e tungstênio como modificador permanente. Considerando as amostras de tecido muscular de Tilápia do Nilo analisadas foram encontradas concentrações de zinco na faixa de 3,70 a 19,00 mg kg-1. A exatidão e precisão do método de determinação de zinco proposto foi validado utilizando padrão certificado Fish Protein DORM-4 NRC
The aim of this paper was to determine the zinc concentrations in muscle samples of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) produced at the Laboratory of Fish Nutrition/ FMVZ-UNESP / Botucatu-SP / Brazil and fed diets containing inorganic and organic zinc source. In the samples preparation step, the samples were lyophilized and ground steak cryogenically to produce particles smaller than 60 ?m and the zinc extraction was carried out by acid mineralization using concentrated sulfuric acid and hydrogen peroxide in thermostatically batch ultrasonic. The zinc determinations were carried out by GFAAS, at a drying temperature of 90oC - 250oC, pyrolysis temperature of 1400oC, atomization temperature of 2400oC, and cleaning temperature of 2800oC. Palladium nitrate was used as a chemical modifier coinjected with the samples, and tungsten as a permanent modifier. Among the muscle tissue samples of Nile Tilapia analyzed zinc concentrations were found to range in 3,7 to 19,00 mg kg-1. The accuracy and precision of the proposed method of zinc determination was validated using certified standard Fish Protein 4 NRC DORM