Efeito de diferentes concentrações de hormônio folículo-estimulante recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados / Effect of different concentrations of recombinant follicle stimulating hormone on the in vitro development of preantral follicles isolated from goats and sheeps

Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) caprinos e ovinos isolados. Folículos pré-antrais (≥ 150 µ m) foram isolados de fragmentos do córtex ovariano de cabras e ovelhas e cultivados individualmente por 24 dias em α-MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de antibióticos e 50µg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo avaliou-se a morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, o cultivo com FSHr apresentou percentuais de folículos morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), ocorrendo uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi semelhante em todos os tratamentos, observando-se um decréscimo a partir do 12º dia (P<0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em caprinos, a adição de FSHr aumentou a taxa de crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, em ovinos, isso só foi observado no tratamento com 1000 ng/mL de FSHr. No que se refere à formação de antro, em ambas as espécies, não houve diferença significativa entre os tratamentos com FSHr e o controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, pôde-se concluir que FOPA caprinos e ovinos são capazes de manter a sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este hormônio teve um papel importante na taxa de crescimento folicular em ambas as espécies.

The aim of this work was to evaluate the effects of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) on the in vitro development of isolated caprine and ovine preantral follicles. Preantral follicles (≥ 150 micron) were isolated from fragments of goats and sheeps ovarian cortex and individually cultured for 24 days in α-MEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin -selenium (ITS), 1% antibiotics and 50 mg / mL ascorbic acid, in the absence (control) or presence of FSHR (100 or 1000 ng / mL) at 39 ° C with 5% CO2 in air. Follicular morphology, growth and antral cavity formation were assessed throughout the culture. The results showed that addition of rFSH to the medium had no effect on the percentages of caprine morphologically normal follicles until day 12 as compared with the control, but a decrease was observed on day 18 with the use of the hormone (p<0.05) only rFSH (1000 ng/mL). Regarding ovine follicles, percentages of normal follicles were significantly reduced from day 12 onwards in all treatments, which led to similar results. Growth rates were increased in caprine follicles by use of rFSH (100 and 1000 ng/ml) in comparison to the control (p<0,05). In ovine follicles, such effect was observed only when rFSH was used at 1000 ng/ml. With respect to antral cavity formation, no diference among treatments was observed for both species. The analysis of chromatin configuration revealed that all oocytes remained at the germinal vesicle stage. In conclusion, caprine and ovine preantral follicles are capable to survive and develop to the antral stage in vitro without FSH. However, this hormone is important for increasing follicular growth rates in both species.

Efeito de diferentes concentrações de hormônio folículo-estimulante recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados / Effect of different concentrations of recombinant follicle stimulating hormone on the in vitro development of preantral follicles isolated from goats and sheeps

Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) caprinos e ovinos isolados. Folículos pré-antrais ( 150 µm) foram isolados de fragmentos do córtex ovariano de cabras e ovelhas e cultivados individualmente por 24 dias em -MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina-transferrina-selênio (ITS), 1% de antibióticos e 50 µg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo avaliou-se a morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, o cultivo com FSHr apresentou percentuais de folículos morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), ocorrendo uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi semelhante em todos os tratamentos, observando-se um decréscimo a partir do 12º dia (P<0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em caprinos, a adição de FSHr aumentou a taxa de crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, em ovinos, isso só foi observado no tratamento com 1000 ng/mL de FSHr. No que se refere à formação de antro, em ambas as espécies, não houve diferença significativa entre os tratamentos com FSHr e o controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, pôde-se concluir que FOPA caprinos e ovinos são capazes de manter a sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este hormônio teve um papel importante na taxa de crescimento folicular em ambas as espécies.(AU)

The aim of this work was to evaluate the effects of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) on the in vitro development of isolated caprine and ovine preantral follicles. Preantral follicles ( 150 micron) were isolated from fragments of goats and sheeps ovarian cortex and individually cultured for 24 days in-MEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin -selenium (ITS), 1% antibiotics and 50 mg / mL ascorbic acid, in the absence (control) or presence of FSHR (100 or 1000 ng / mL) at 39 ° C with 5% CO2 in air. Follicular morphology, growth and antral cavity formation were assessed throughout the culture. The results showed that addition of rFSH to the medium had no effect on the percentages of caprine morphologically normal follicles until day 12 as compared with the control, but a decrease was observed on day 18 with the use of the hormone (p<0.05) only rFSH (1000 ng/mL). Regarding ovine follicles, percentages of normal follicles were significantly reduced from day 12 onwards in all treatments, which led to similar results. Growth rates were increased in caprine follicles by use of rFSH (100 and 1000 ng/ml) in comparison to the control (p<0,05). In ovine follicles, such effect was observed only when rFSH was used at 1000 ng/ml. With respect to antral cavity formation, no diference among treatments was observed for both species. The analysis of chromatin configuration revealed that all oocytes remained at the germinal vesicle stage. In conclusion, caprine and ovine preantral follicles are capable to survive and develop to the antral stage in vitro without FSH. However, this hormone is important for increasing follicular growth rates in both species.(AU)