Resumo
Legume species belonging to the genus Lupinus are annual herb plants. The majority of them are indigenous to the Americas. They are known for nitrogen-fixing symbioses with soil bacteria collectively called rhizobia. The aim of this study was to characterize a rhizobium strain isolated from Lupinus albescens using phenotypic, symbiotic and molecular approaches. Strain UFSM LA 1.3 was tested in vitro according to several parameters: colony size, color and growing rate; acid or alkaline reaction in yeast mannitol media supplemented with bromothymol blue; gum production. Molecular characterization was evaluated by PCR technique using primers BOX A1-R and sequence analysis of the 16S-23S rDNA intergenic region (ITS). ITS sequencing fragments showed genetic similarity with Bradyrhizobium sp. The polymorphism observed by BOX-PCR have shown that strain differs from the reference strain SEMIA 928 and SEMIA 938. The symbiotic efficiency under axenic conditions of UFSM LA 1.3 was 94.6%, without statistical differences compared to the mineral nitrogen fertilized control, to which was applied solution of 400 mg of ammonium nitrate.
Espécies de leguminosas pertencentes ao gênero Lupinus são plantas herbáceas anuais. A maioria é originária das Américas. Estas plantas estabelecem simbioses com bactérias do solo que realizam fixação biológica de nitrogênio coletivamente chamada de rizóbios. Caracterizou-se uma estirpe isolada de Lupinus albescens por meio de características fenotípicas, simbióticas e moleculares. A estirpe UFSM LA 1.3 foi testada in vitro de acordo com os parâmetros: tamanho de colônia; cor e taxa de crescimento; reação ácida ou básica em meio levedura manitol suplementado com azul de bromotimol; produção de goma. A caracterização molecular foi feita pela técnica de PCR usando os oligonucleotídeos BOX A1-R e seqüenciamento da região ITS. A análise da seqüência dos fragmentos da região intergênica (ITS) 16S-26S rDNA mostrou similaridade genética com Bradyrhizobium sp. O polimorfismo observado por BOX-PCR demonstrou que a estirpe difere das estirpes referência SEMIA 928 e SEMIA 938. A eficiência simbiótica de UFSM LA 1.3 foi de 94,6%, sem diferenças estatísticas comparada com o controle com fertilizante nitrogenado mineral que recebeu 400 mg de nitrato de amônio.
Resumo
Legume species belonging to the genus Lupinus are annual herb plants. The majority of them are indigenous to the Americas. They are known for nitrogen-fixing symbioses with soil bacteria collectively called rhizobia. The aim of this study was to characterize a rhizobium strain isolated from Lupinus albescens using phenotypic, symbiotic and molecular approaches. Strain UFSM LA 1.3 was tested in vitro according to several parameters: colony size, color and growing rate; acid or alkaline reaction in yeast mannitol media supplemented with bromothymol blue; gum production. Molecular characterization was evaluated by PCR technique using primers BOX A1-R and sequence analysis of the 16S-23S rDNA intergenic region (ITS). ITS sequencing fragments showed genetic similarity with Bradyrhizobium sp. The polymorphism observed by BOX-PCR have shown that strain differs from the reference strain SEMIA 928 and SEMIA 938. The symbiotic efficiency under axenic conditions of UFSM LA 1.3 was 94.6%, without statistical differences compared to the mineral nitrogen fertilized control, to which was applied solution of 400 mg of ammonium nitrate.
Espécies de leguminosas pertencentes ao gênero Lupinus são plantas herbáceas anuais. A maioria é originária das Américas. Estas plantas estabelecem simbioses com bactérias do solo que realizam fixação biológica de nitrogênio coletivamente chamada de rizóbios. Caracterizou-se uma estirpe isolada de Lupinus albescens por meio de características fenotípicas, simbióticas e moleculares. A estirpe UFSM LA 1.3 foi testada in vitro de acordo com os parâmetros: tamanho de colônia; cor e taxa de crescimento; reação ácida ou básica em meio levedura manitol suplementado com azul de bromotimol; produção de goma. A caracterização molecular foi feita pela técnica de PCR usando os oligonucleotídeos BOX A1-R e seqüenciamento da região ITS. A análise da seqüência dos fragmentos da região intergênica (ITS) 16S-26S rDNA mostrou similaridade genética com Bradyrhizobium sp. O polimorfismo observado por BOX-PCR demonstrou que a estirpe difere das estirpes referência SEMIA 928 e SEMIA 938. A eficiência simbiótica de UFSM LA 1.3 foi de 94,6%, sem diferenças estatísticas comparada com o controle com fertilizante nitrogenado mineral que recebeu 400 mg de nitrato de amônio.
Resumo
This study aimed i) to quantify the occurrence of Fusarium spp. and Trichoderma spp. in rhizospheric soil, with and without symptoms of Sudden Death Syndrome (SDS) in eight soybean genotypes; ii) morphologically identify isolates of Fusarium spp. from roots with SDS; iii) evaluate the antagonism between Trichoderma spp. and Fusarium spp. isolates from rhizospheric soil and roots from with and without SDS, respectively; and iv) characterize through the ITS1-5.8S-ITS2 region of rDNA the isolates of Trichoderma spp. with better performance in the direct confrontation. The sampling of soil and roots was performed in an experimental area located in Cruz Alta, RS, Brazil. In the laboratory, serial dilutions of soil samples, counting of the number of Colony Forming Units (UFCs/g-1 of rhizospheric soil) were performed as well as isolation for identification of isolates of Fusarium spp. and Trichoderma spp. and testing of direct confrontation. There were significant differences between the population of Trichoderma spp. in the rhizosphere of plants with and without symptoms of SDS. For the population of Fusarium spp., significant difference was observed only in the rhizosphere of plants without symptoms of SDS. In diseased roots the following species were identified: F. solani, F. avenaceum, F. graminearum, F. oxysporum and F. verticillioides. In the test of direct confrontation, eight
Este trabalho objetivou i) quantificar a ocorrência de Fusarium spp. e Trichoderma spp. em solo rizosférico, com e sem sintomas de Síndrome da Morte Súbita (SMS), em oito genótipos de soja; ii) identificar morfologicamente Fusarium spp. de raízes; iii) avaliar relações antagônicas entre Trichoderma e Fusarium, isolados de solo rizosférico e raízes de plantas com e sem sintomas de SMS, respectivamente e iv) caracterizar, através da região ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA, os isolados de Trichoderma spp. com melhor desempenho no teste de confrontação direta. As coletas de solo e raízes foram realizadas em uma área experimental localizada em Cruz Alta, RS, Brasil. Em laboratório, foram realizadas diluições seriais das amostras de solo, contagem do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs/g-1 de solo rizosférico) e isolamento para identificação de isolados de Fusarium spp. e Trichoderma spp. e teste de confrontação direta. Houve diferença significativa entre as populações de Trichoderma spp. em solo rizosférico de plantas com e sem sintomas de SMS. Para a população de Fusarium spp., foi constatada diferença significativa apenas em solo rizosférico de plantas sem sintomas da doença. Em raízes doentes, foram identificadas as espécies F. solani, F. avenaceum, F. graminearum, F. oxysporum e F. verticillioides. No teste de confrontação direta, oito isolados de Trichoderma spp. apresentaram
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This study aimed i) to quantify the occurrence of Fusarium spp. and Trichoderma spp. in rhizospheric soil, with and without symptoms of Sudden Death Syndrome (SDS) in eight soybean genotypes; ii) morphologically identify isolates of Fusarium spp. from roots with SDS; iii) evaluate the antagonism between Trichoderma spp. and Fusarium spp. isolates from rhizospheric soil and roots from with and without SDS, respectively; and iv) characterize through the ITS1-5.8S-ITS2 region of rDNA the isolates of Trichoderma spp. with better performance in the direct confrontation. The sampling of soil and roots was performed in an experimental area located in Cruz Alta, RS, Brazil. In the laboratory, serial dilutions of soil samples, counting of the number of Colony Forming Units (UFCs/g-1 of rhizospheric soil) were performed as well as isolation for identification of isolates of Fusarium spp. and Trichoderma spp. and testing of direct confrontation. There were significant differences between the population of Trichoderma spp. in the rhizosphere of plants with and without symptoms of SDS. For the population of Fusarium spp., significant difference was observed only in the rhizosphere of plants without symptoms of SDS. In diseased roots the following species were identified: F. solani, F. avenaceum, F. graminearum, F. oxysporum and F. verticillioides. In the test of direct confrontation, eight
Este trabalho objetivou i) quantificar a ocorrência de Fusarium spp. e Trichoderma spp. em solo rizosférico, com e sem sintomas de Síndrome da Morte Súbita (SMS), em oito genótipos de soja; ii) identificar morfologicamente Fusarium spp. de raízes; iii) avaliar relações antagônicas entre Trichoderma e Fusarium, isolados de solo rizosférico e raízes de plantas com e sem sintomas de SMS, respectivamente e iv) caracterizar, através da região ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA, os isolados de Trichoderma spp. com melhor desempenho no teste de confrontação direta. As coletas de solo e raízes foram realizadas em uma área experimental localizada em Cruz Alta, RS, Brasil. Em laboratório, foram realizadas diluições seriais das amostras de solo, contagem do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs/g-1 de solo rizosférico) e isolamento para identificação de isolados de Fusarium spp. e Trichoderma spp. e teste de confrontação direta. Houve diferença significativa entre as populações de Trichoderma spp. em solo rizosférico de plantas com e sem sintomas de SMS. Para a população de Fusarium spp., foi constatada diferença significativa apenas em solo rizosférico de plantas sem sintomas da doença. Em raízes doentes, foram identificadas as espécies F. solani, F. avenaceum, F. graminearum, F. oxysporum e F. verticillioides. No teste de confrontação direta, oito isolados de Trichoderma spp. apresentaram