Resumo
Mormo é uma doença infectocontagiosa primeiramente relatada entre os séculos II e IV e que causa graves perdas econômicas para a equideocultura. O objetivo desse estudo foi caracterizar geneticamente isolados de Burkholderia mallei obtidos de equídeos com mormo nos estados de Pernambuco e Alagoas. Durante as necropsias dos animais soropositivos foram coletadas amostras das lesões piogranulomatosas. O material foi submetido ao isolamento bacteriano e confirmação pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional e tempo real. No total, seis isolados foram identificados nas propriedades de equinos nos dois estados, sendo cinco isolados do estado Pernambuco e um isolado de Alagoas. Os produtos das amplificações foram sequenciados e comparados ao banco de dados encontrado no National Center for Biotechnology Information (NCBI), onde foi possível observar similaridade com o isolado Turkey 10, relatado primeiramente na Turquia. Os isolados foram submetidos à Reação em Cadeia da Polimerase High Resolution Melting (PCR-HRM) para caracterização genética por meio da variação dos Single Nucleotide polymorphisms (SNPs) e posteriormente ao sequenciamento completo do genoma (WGS). O sequenciamento do genoma revelou uma correlação entre as cepas circulantes nos dois estados, com uma variação genética entre cepas isoladas de animais de Pernambuco. Foram descritos dois genótipos de Burkholderia mallei circulantes no Brasil, sendo o genótipo L3B2, anteriormente descrito para um isolado brasileiro e o genótipo L3B3Sb3Gp1SbGp1, ainda não descrito anteriormente no país. Este é a primeira descrição de um isolado com similaridade genética com outras cepas relatadas na Europa, sugerindo mais de um evento de introdução da doença no Brasil. A caracterização dos isolados de B. mallei circulantes é importante para o desenvolvimento e aprimoramento de técnicas de diagnóstico sorológico e desenvolvimento de marcadores moleculares específicos para detecção de cepas brasileiras, além de ser um meio de adicional no controle da doença, possibilitando estabelecer ligações entre os diversos casos e identificar cadeias de transmissão.
Glanders is an infectious-contagious disease first reported between the 2nd and 4th centuries and that causes serious economic losses for equidae culture. The aim of this study was to genetically characterize Burkholderia mallei isolates obtained from equine glanders in the states of Pernambuco and Alagoas. During necropsies of seropositive animals, samples of pyogranulomatous lesions were collected. The material was subjected to bacterial isolation and bacterial cultures were analyzed by conventional and real time Polymerase Chain Reaction (PCR) for confirmation. In total, six isolates were identified on horse farms in both states, five from Pernambuco state and one from Alagoas. The amplicons were sequenced and compared to the database found at the National Center for Biotechnology Information (NCBI), where it was possible to observe similarity with the Turkey 10 isolate, first reported in Turkey. In order to confirm the result, the isolates were submitted to Polymerase Chain Reaction - High Resolution Melting (PCR-HRM) for genetic characterization through the variation of Single Nucleotide polymorphisms (SNPs) and subsequently to complete genome sequencing (WGS). The complete genome sequencing revealed a correlation between the circulating strains between the two states, but a genetic variation was observed among strains isolated from animals from Pernambuco. Two genotypes of Burkholderia mallei circulating in Brazil have been described, being the L3B2 genotype previously described for a Brazilian isolate and the L3B3Sb3Gp1SbGp1 genotype, never previously described for contemporary strains in Brazil. This is the first current description of an isolate with genetic similarity to other strains reported in Europe, suggesting more than one event of introduction of the disease in Brazil. The characterization of circulating B. mallei isolates is important for the development and improvement of serological diagnostic techniques and the development of specific molecular markers for the detection of Brazilian strains, in addition to being an additional means of controlling the disease, making it possible to establish links between the different cases and identify transmission chains.
Resumo
A brucelose é uma doença infectocontagiosa de caráter crônico causada por bactérias do gênero Brucella spp. Objetivou-se desenvolver e padronizar uma técnica de Western Blotting para uso no sorodiagnóstico da brucelose bovina. Dois grupos foram utilizados: o grupo I com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos, sendo 30 positivas e 30 negativas no TFC e o grupo II com 383 amostras de amostras de campo, sendo 90 positivas e 293 negativas na TFC. O resultado da análise das amostras no Western Blotting revelou banda com peso molecular 20 kDa como sendo a banda mais reativo e propriedade para identificação e separação de animais com infecção natural dos animais vacinados. A sensibilidade e especificidade do WB quando comparadas com o AAT foi, respectivamente, 93% e 99%, e quando comparadas com a TFC foi respectivamente, 97% e 98%. O WB padronizado neste estudo poderá ser empregado teste confirmatório, pois se trata de um teste mais sensível e específico e com capacidade de diferenciação entre animais naturalmente infectados e vacinados.
Brucellosis is an infectious disease with a chronic characteristic caused by the bacteria Brucella spp. The aim of this study was to develop and standardize a Western Blotting technique for use in bovine brucellosis serodiagnosis. Two groups were used: group I with 60 samples of true positive and true negative animals being 30 positive and 30 negative in CFT and group II with 383 field samples being 90 positive and 293 negative in CFT. The analysis using WB technique revealed the molecular weight 20 kDa as the most characteristic and reactive area for identification and separation of animals with natural infection from vaccinated. The sensitivity and specificity of WB as compared to AAT were 93% and 99% respectively, and when compared to TFC respectively were 97% and 98%. The WB standardized in this study may be used as confirmatory test, because it is more sensitive and specific with capacity for differentiation between naturally infected and vaccinated animals.