Resumo
O estado da Bahia apresenta uma extensa faixa litorânea, com vários estuários e baías, que favorecem o estabelecimento de cultivos de moluscos bivalves. Para essa atividade, é necessário conhecer a biologia e a ecologia das espécies, assim como de organismos associados a estes, alguns dos quais podem causar enfermidades e consequentemente prejuízos à atividade de cultivo. Dentre os patógenos de moluscos bivalves estão os protozoários dos gêneros Perkinsus Levine, 1978 (Perkinsozoa) e Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa), sendo que o primeiro pode causar mortalidades em massa. Neste estudo teve-se por objetivos: (1) identificar as espécies nativas de ostras no estado da Bahia; (2) verificar a presença de Perkinsus em cada espécie, assim como a sua prevalência, intensidade de infecção e a correlação com a salinidade e (3) avaliar as alterações causadas por Perkinsus beihaiensis e Nematopsis sp. em camundongos Swiss (Mus musculus), via infecção experimental, para avaliação do potencial zoonótico desses protozoários. Para o primeiro objetivo, foram coletadas 320 ostras em 12 estações amostrais no centro-sul da Bahia, em bancos naturais de ostras, estruturas artificiais e em cultivos. A identificação foi feita com uso das ferramentas moleculares PCR, PCR-RFLP, sequenciamento de DNA e análise filogenética. Exceto pelo tamanho, não foram observadas diferenças morfológicas entre as espécies. As análises genéticas evidenciaram a presença de duas espécies de ostras na região: Crassostrea rhizophorae e C. gasar (= C. brasiliana). Para o segundo objetivo, 240 ostras Crassostrea spp. foram coletadas em oito locais do litoral sul da Bahia. As amostras foram submetidas ao cultivo Meio Fluido de Tioglicolato de Ray (RFTM), técnica histológica, PCR e sequenciamento de DNA. Perkinsus beihaiensis foi detectada nas duas espécies de ostras, com prevalência média de 82,8% via análise histológica e de 65,2% via RFTM em C. rhizophorae e de 70,5% e 35,7%, respectivamente, em C. gasar. A prevalência mais baixa foi observada em C. gasar e esta pode ter sido influenciada pelo hábitat e pela salinidade. Em ambas as espécies, este patógeno localizou-se principalmente no epitélio gástrico e intestinal, onde ocasionou, em casos de infecção severa, reação hemocitária. Tanto a prevalência quanto o nível de infecção estiveram positivamente correlacionados com a salinidade (r = > 0,8; p<0,05), que variou de 18 a 36, considerando-se todos os locais. Para avaliar os possíveis efeitos de P. beihaiensis e de Nematopsis sp. no humano, foi realizado um bioensaio com camundongos Swiss. Foram preparados pools da ostra C. rhizophorae, que foram submetidos à digestão péptica e depois inoculados nos camundongos por via intraperitoneal. Foram utilizados três grupos (G1-G3) com oito animais cada, que foram eutanasiados em intervalos de 15 (G1), 30 (G2) e 45 (G3) dias após a inoculação, sendo que do total, 6 animais eram o controle. Os camundongos foram monitorados durante todo o experimento quanto a sinais clínicos. Foram coletadas amostras de tecidos de vários órgãos, que foram analisados via histologia, RFTM e por ferramentas moleculares. Nos animais inoculados observou-se alteração de peso do baço e do fígado, além da presença de nódulos, principalmente no fígado. Na análise microscópica por RFTM evidenciou-se P. beihaiensis, com prevalência de até 100% em alguns animais. Esse patógeno foi associado a alterações nos nódulos linfoides do intestino (Placas de Peyer). Oocistos de Nematopsis sp. foram observados no fígado, causando infiltrado inflamatório. Os resultados sugerem um potencial zoonótico de ambos os patógenos. Com base nisso, recomenda-se monitoramentos costeiros mais frequentes e atenção para a qualidade sanitária das ostras para o consumo humano.
The State of Bahia has an extensive coastline, with several estuaries and bays, which favor the establishment of cultivation of bivalve molluscs. For this activity, it is necessary to know the biology and ecology of the species, as well as organisms associated with them, some of which can cause diseases and consequently damage to the cultivation activity. Among the bivalve mollusc´s pathogens is the protozoan Perkinsus Levine, 1978 (Perkinsozoa) and Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa), being that the former can cause mass mortalities. In Brazil, four species of this genus have already been recorded. In this study, the objectives were: (a) to identify native oyster species in the state of Bahia; (2) to verify the presence of Perkinsus in each species, as well as their prevalence, infection intensity and correlation with salinity; and (3) to evaluate the changes caused by Perkinsus beihaiensis and Nematopsis sp. in Swiss mice (Mus musculus), via experimental infection, in order to evaluate the zoonotic potential of these protozoa. For the first objective, 320 oysters were collected in 12 sampling stations, in natural oyster beds, in artificial structures and in crops. Identification was made using the molecular tools PCR, PCR-RFLP, DNA sequencing and phylogenetic analysis. Except for size, no morphological differences were observed between species. Genetic analysis revealed the presence of two species of oysters: Crassostrea rhizophorae and C. gasar (= C. brasiliana). For the second objective, 240 oysters Crassostrea spp. were collected from eight sites on the south coast of Bahia. Samples were submitted to Ray thioglycollate culture (RFTM), histological technique, PCR and DNA sequencing. Perkinsus beihaiensis was detected in both species of oysters, with a mean prevalence of 82.8% via histological analysis and of 65.2% via RFTM in C. rhizophorae and 70.5% and 35.7%, respectively, in C. gasar. The lowest prevalence was observed in C. gasar and this may have been influenced by habitat and by salinity. In both species, the pathogen was mainly located in the gastric and intestinal epithelium, where it caused, in cases of severe infection, hemocyte response. Both the prevalence and the level of infection were positively correlated with salinity (r => 0.8, p <0.05), which ranged from 18 to 36, considering all sites. To evaluate the possible effects of P. beihaiensis and Nematopsis sp. on humans, a bioassay was performed with Swiss mice. Pools of the C. rhizophorae were prepared, which were subjected to peptic digestion and then inoculated into the mice by intraperitoneal route. Three groups (G1-G3) with eight animals each were used, which were euthanized at intervals of 15 (G1), 30 (G2) and 45 (G3) days after inoculation, of which 6 animals were the control. Mice were monitored throughout the experiment for clinical signs. Samples of tissues from various organs were collected, which were analyzed by histology, RFTM and by molecular tools. In the inoculated animals, it was observed a change in spleen and liver weight, besides the presence of nodules, mainly in the liver. Microscopic analysis by RFTM revealed P. beihaiensis, with prevalence of up to 100% in some animals. This pathogen was associated with changes in intestinal lymphoid nodules (Peyer's patches). Oocysts of Nematopsis sp. were observed in the liver, causing inflammatory infiltrate. Therefore, the results suggest a zoonotic potential of both pathogens. Based on this, more frequent coastal monitoring and attention to the sanitary quality of oysters for human consumption is recommended.