Resumo
O controle de nematoides gastrintestinais de pequenos ruminantes é realizado convencionalmente com a administração de anti-helmínticos sintéticos e semissintéticos. Entretanto, o uso inadequado de determinado anti-helmíntico, seleciona indivíduos que possuem a capacidade de sobreviver a esse quimioterápico tornando essencial a busca por métodos alternativos. Os produtos derivados de plantas têm sido amplamente investigados quanto ao seu potencial anti-helmíntico sobre Haemonchus contortus. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos dos óleos essenciais de quimiotipos carvona (CV) e citral (CT) de Lippia alba sobre H. contortus. A caracterização química foi feita por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG/MS). O efeito anti-helmíntico dos óleos essenciais foi avaliado no teste de eclosão de ovos (TEO) e teste de motilidade de nematoides adultos (TMA), utilizando um isolado de H. contortus multirresistente, Kokstad. Foi realizada microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) dos ovos e adultos de H. contortus e microscopia eletrônica de varredura (MEV) dos adultos após tratamento com os óleos para observações qualitativas de seus efeitos. Os resultados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e comparados pelo teste Tukey (P>0,05). A concentração inibitória de 50% (CE50) para o TEO foi calculada a partir do programa SPSS 17.0 program for Windows. Os resultados demonstraram a existência de dois quimiotipos, CV e CT do óleo essencial de L. alba (La). O quimiotipo CV do óleo essencial de L. alba (LaCV) apresentou 70,2% de CV e o quimiotipo CT do óleo essencial de L. alba (LaCT) estava constituído por 20,40% e 29,49% de neral e geranial, respectivamente. No TEO, a CE50 de LaCV e LaCT foi de 0,2 e 0,3mg/mL, respectivamente. No TMA, após 12h de exposição ao LaCV e LaCT, 100% dos nematoides adultos estavam imóveis. A MCVL evidenciou alterações na motilidade da larva dentro do ovo provocada por LaCV, enquanto que LaCT impediu a formação da larva. Nos adultos expostos aos dois óleos foram observadas aparentes alterações na porção anterior, em nível de esôfago. Na MEV foram observadas alterações morfológicas na porção anterior, cápsula bocal e na porção medial. Conclui-se que os dois óleos essenciais de L. alba causaram aparentes alterações morfológicas e inibiram a eclosão de ovos, assim como a motilidade de nematoides adultos de H. contortus. Porém é importante avaliar o efeito in vivo, para identificar níveis seguros de eficácia e toxicidade antes de confirmar sua utilização como antihelmíntico.
The control of gastrointestinal nematodes in small ruminants is carried out conventionally with the administration of synthetic and semi-synthetic anthelmintics. However, the inappropriate use of a certain anthelmintic, selects individuals who have the capacity to survive this chemotherapy, making the search for alternative methods essential. Plant derived products have been extensively investigated for their anthelmintic potential on H. contortus. The aim of the present study was to evaluate the effects of the essential oils of Lippia alba chemotypes carvone (CV) and citral (CT) on H. contortus. Chemical characterization was done by means of gas chromatography coupled to mass spectrometry (CG/MS). The anthelmintic effect of essential oils was assessed in the egg hatch test (EHT) and adult nematode motility test (ANMT), using a multidrug-resistant H. contortus isolate, Kokstad. Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of eggs and adults of H. contortus and scanning electron microscopy (SEM) of adults was performed after treatment with oils for qualitative observations of their effects. The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) and compared by the Tukey test (P> 0.05). The 50% inhibitory concentration (EC50) for EHT was calculated using the SPSS 17.0 program for Windows. The results demonstrated the existence of two chemotypes, CV and CT of the essential oil of L. alba (La). The chemotype CV of the essential oil of L. alba (LaCV) presented 70.2% of CV and the chemotype CT of the essential oil of L. alba (LaCT) was constituted by 20.40% and 29.49% of neral and geranial, respectively. In the EHT, the EC50 of LaCV and LaCT was 0.2 and 0.3 mg/mL, respectively. In ANMT, after 12h of exposure to LaCV and LaCT, 100% of adult nematodes were immobile. CLSM showed changes in the larval motility inside the egg caused by LaCV, while LaCT promoted changes in the larva formation. In adults exposed to both oils, apparent changes were observed in the anterior portion, at the level of the esophagus. In SEM, morphological changes were observed in the anterior portion, mouthpiece and medial portion. It is concluded that the two oils of L. alba, chemotypes CV and CT, caused apparent morphological changes and inhibited the hatching of eggs, as well as the motility of adult H. contortus nematodes. However, it is important to evaluate the effect in vivo to identify safe levels of efficacy and toxicity before confirming its use as an anthelmintic.