Resumo
O 17-E2 estimula a expressão de receptores endometriais, ER e OXTR. A ativação de OXTR leva à ativação de uma complexa cadeia de moléculas que resulta na síntese de PGF2. A hipótese do presente estudo é que as enzimas de sinalização e síntese de PGF2 são reguladas pelo 17-E2, no dia 15 (D15) após o estro. Objetivou-se determinar os efeitos do 17-E2 na localização e abundância de transcritos e proteínas-chave na sinalização e síntese de PGF2. Vacas Nelore multíparas, solteiras e cíclicas foram sincronizadas por aplicação de BE e inserção de dispositivo de P4. Após 8 dias realizou-se a remoção do dispositivo de P4 e aplicação de PGF2, seguido por 4 dias de observação de estro (D0=dia do estro). Entre D14 e D20 foram realizadas avaliações diárias das variáveis: área do CL (cm2), fluxo sanguíneo (%) e concentração plasmática de progesterona (P4). No D15 as vacas foram divididas em três grupos: Controle (C; não tratado), Placebo (P; 6mL de etanol 50%; IV) e Estradiol (E; 3mg 17-E2; 6mL de etanol 50%; IV). Subsequente aos tratamentos, biópsias uterinas foram coletadas nos tempos 0h (C); 4h (E4h e P7h) ou 7h (E7h e P7h). Amostras de sangue foram obtidas nos tempos 0h a 7h, para mensuração das concentrações PGFM no D15. O grupo E apresentou acentuada diminuição da área do CL, fluxo sanguíneo e concentração de P4 (P<0,05), comparado ao grupo P. Comparado ao grupo P, as vacas do grupo E anteciparam o dia da luteólise funcional e estrutural em 2 e 3 dias, respectivamente. O grupo E apresentou maior concentração de PGFM nos tempos 4h, 6h e 7h (P<0,05), comparado ao grupo P. A quantificação dos transcritos foi feita por qPCR. Na hora 4, a abundância dos genes ESR1, ESR2, PRKC, PRKC, PLA2G4, AKR1B1 e AKR1C4 foi menor nas amostras E4h, enquanto OXTR foi maior nas mesmas amostras comparando-se com as amostras P4h (P<0,05). A expressão gênica de PTGS2 não diferiu entre os grupos E4h e P4h (P>0,05). Na hora 7, as amostras E7h também apresentaram menor abundância de ESR1, PRKC, PRKC, AKR1B1 e AKR1C4 (P<0,05) e houve tendência para menor expressão de ESR2, comparado às amostras P7h. Contudo, não houve diferença na abundância de OXTR, PLA2G4 e PTGS2 entre as amostras E7h e P7h (P>0,05). A abundância da enzima PKC foi diminuída tanto nas amostras E4h como nas E7h, em relação às amostras P4h e P7h, respectivamente. O grupo E4h apresentou maior imunomarcação de PGR no epitélio glandular (P<0,05) e houve tendência para maior imunomarcação de PKC no epitélio luminal, comparado ao grupo P4h (P=0,08). Também houve tendência para menor imunomarcação de ER no epitélio glandular do grupo E4h comparado ao grupo E7h (P=0,1). Concluí-se que o mecanismo molecular pelo qual o 17-E2 estimulou a liberação de PGF2 é complexo e incluiu o estímulo da transcrição de OXTR e a inibição da transcrição das moléculas pertencentes à cascata de produção de PGF2. O possível mecanismo para a estimulação de PGFM por 17-E2 pode incluir o aumento da ativação de enzimas pré-existentes que participam na cascata de síntese de PGF2.
In cattle, 17-E2 stimulates expression of ER and OXTR in the endometrium. The activation of OXTR leads to the induction of a complex cascade of molecular activation resulting in PGF2 synthesis. The main hypothesis was that abundance and activity of proteins involved in PGF2 synthesis is regulated by 17-E2 on day 15 (D15) after estrus. The objective of this study was to determine the effects of 17-E2 on the abundance of key transcripts and the abundance and localization of proteins involved in PGF2 signaling and synthesis. Estrus of multiparous, non-lactating, and cyclic Nelore cows were synchronized by the administration of BE and insertion of a progesterone (P4)-releasing device. After 8 days, the P4 device was removed, PGF2 was injected and estrous behavior was observed for the next 4 days (D0 = day of estrus). Between D14 and D20, CL area (cm2), blood flow (%), and plasma P4 concentrations (P4) were evaluated daily. On D15 cows were assigned randomly to one of three groups: Control (C, untreated), Placebo (P; 6mL of ethanol 50%, IV) or Estradiol (E, 3mg 17-E2 diluted in 6mL of ethanol 50%, IV). After treatments, uterine biopsies were collected at times 0h (C), 4h (E4h and P7h) or 7h (E7h and P7h). Blood samples were obtained from 0h to 7h for the measurement of the PGFM concentrations on D15. The E Group presented a marked decrease in CL area and blood flow and P4 concentration compared to group P (P <0.05). Compared to group P, functional and structural luteolysis of group E was hastened 2 and 3 days, respectively. Group E presented greater concentrations of PGFM at 4h, 6h, and 7h (P <0.05), compared to the group P. Transcript abundance was determined by qPCR. At 4 hours, the abundance of ESR1, ESR2, PRKC, PRKC, PLA2G4, AKR1B1, and AKR1C4 genes was lower in the E4h samples, while that of OXTR was greater in the same samples compared to the P4h (P <0.05). Abundance of PTGS2 was not different between groups E4h and P4h (P> 0.05). At 7 hours, E7h also showed lower abundance of ESR1, PRKC, PRKC, AKR1B1, and AKR1C4 (P <0.05) and there was a tendency for lower ESR2 expression, compared to samples P7h. However, there was no difference in the abundance of OXTR, PLA2G4, and PTGS2 between E7h and P7h samples (P> 0.05). The abundance of the enzyme PKC was decreased in both, E4h and E7h samples, relative to the samples P4h and P7h, respectively. Group E4h showed a more intense PGR immunostaining in the glandular epithelium (P <0.05) and there was a tendency for greater PKC immunostaining in the luminal epithelium, compared to the P4h group (P = 0.08). There was also a tendency for reduced ER immunostaining in the glandular epithelium of the E4h group compared to the E7h group (P = 0.1). It was concluded that the molecular mechanism by which 17-E2 stimulates the release of PGF2 is complex and included the stimuli of OXTR transcription and the inhibition of transcription of molecules of the PGF2-synthesis cascade. A possible mechanism for 17-E2-stimulated PGFM may include increased activaty of pre-existing enzymes that participate in the PGF2-synthesis cascade.