Fluorescent probes: an advance on the evaluation of structural and functional sperm integrity / Sondas fluorescentes: um avanço na avaliação da integridade estrutural e funcional de espermatozoides

The semen quality is a determining factor for obtaining good results with reproductive biotechnologies, such as artificial insemination (AI). Thus, the evaluation of sperm parameters is essential to determine the fertility of gametes. Assessment techniques that best predict in vitro fertility of sperm have been relentlessly pursued with the purpose of ensuring better results after AI. However, until now, no evaluation methodology alone was efficient for this purpose. Then it is recommended to associate the use of these techniques to better predict the fertilizing ability of spermatozoa. In recent years a great number of new strategies were developed for semen evaluation, with the highlighted use of fluorescent probes. These techniques have limited use due to unfamiliarity with their employment. The aim of this paper is to review the advances on semen evaluation and prediction of their fertilising ability, with emphasis on those based on fluorescent probes.

A qualidade do sêmen é um fator determinante para se obter bons resultados com a utilização de biotécnicas reprodutivas como a inseminação artificial (IA). Desta forma, torna-se essencial a avaliação dos parâmetros espermáticos que determinem a fertilidade destes gametas. Técnicas de avaliação que melhor predigam a fertilidade in vitro dos espermatozoides têm sido buscadas incessantemente, a fim de garantir melhores resultados após IA. Entretanto, até o momento, nenhuma metodologia de avaliação mostrouse efi ciente para este fim, quando utilizada isoladamente, sendo recomendado o emprego conjunto destas técnicas para a melhor predição da capacidade fertilizante dos espermatozoides. Nos últimos anos uma série de novas estratégias foram desenvolvidas para avaliação de sêmen, dentre as quais se destaca o emprego das sondas fluorescentes. Estas técnicas são utilizadas com limitações em função do desconhecimento de seu emprego. Esta revisão tem como objetivo abordar os avanços na avaliação do sêmen e a predição de sua capacidade fertilizante, com ênfase nas que se baseiam no uso de sondas fluorescentes.

Crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos

Aiming to evaluate the effect of different concentrations of ethylene glycol or acetamide cryoprotectants on in vitro viability of ram frozen spermatozoa, were used six semen-pools from four Santa Inês crossbred males. After approval, the ejaculate-pool was diluted in Tris egg-yolk plus glycerol (G1=5%; control), ethylene glycol (3%=G2; G3=5%) or acetamide (G4=2%; G5=7%), loaded in straws (0.25mL; 100x106 sperm) and frozeng. Thawed samples (37oC/30 seconds) were evaluated for progressive motility (PM), vigor, plasma membrane integrity (PMi), mitochondrial membrane potential (MMP) and acrosome integrity (ACi). It was found that the PM of G1 was higher (P 0.05) than G3, G4 and G5, and that the vigor of G1, G2 and G3 was higher (P 0.05) than G4 and G5. The PMi of G1 was higher (P 0.05) than G2, G3, G4 and G5, as well as G2 and G3 (P 0.05) where high than G4 and G5. MMP and ACi were not different (P>0.05) among groups. It is concluded that ethylene glycol (3 and 5%) and acetamide (2 and 7%) don't are effectives in protecting ram spermatozoa subjected to freezing.

Objetivando-se avaliar o efeito de diferentes concentrações dos crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos, foram utilizados seis pools de sêmen de quatro reprodutores mestiços da raça Santa Inês. Após aprovação, o pool dos ejaculados foi diluído em Tris-gema, acrescido de glicerol (G1=5%; controle), etileno glicol (G2=3%; G3=5%) ou acetamida (G4=2%; G5=7%), envasado em palhetas (0,25mL; 100x106 espermatozoides) e congelado. As amostras descongeladas (37oC/30 segundos) foram avaliadas quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade da membrana plasmática (iMP), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e integridade do acrossoma (iAC). Constatou-se que a MP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G3, G4 e G5, e que o vigor dos G1, G2 e G3 foi maior (P 0,05) do que o dos G4 e G5. A iMP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G2, G3, G4 e G5, assim como os G2 e G3 foram superiores (P 0,05) a G4 e G5. O PMM e a iAC não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Conclui-se que o etileno glicol (3 e 5%) e a acetamida (2 e 7%) não são eficazes para a proteção dos espermatozoides ovinos submetidos à congelação.

Crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos

Aiming to evaluate the effect of different concentrations of ethylene glycol or acetamide cryoprotectants on in vitro viability of ram frozen spermatozoa, were used six semen-pools from four Santa Inês crossbred males. After approval, the ejaculate-pool was diluted in Tris egg-yolk plus glycerol (G1=5%; control), ethylene glycol (3%=G2; G3=5%) or acetamide (G4=2%; G5=7%), loaded in straws (0.25mL; 100x106 sperm) and frozeng. Thawed samples (37oC/30 seconds) were evaluated for progressive motility (PM), vigor, plasma membrane integrity (PMi), mitochondrial membrane potential (MMP) and acrosome integrity (ACi). It was found that the PM of G1 was higher (P 0.05) than G3, G4 and G5, and that the vigor of G1, G2 and G3 was higher (P 0.05) than G4 and G5. The PMi of G1 was higher (P 0.05) than G2, G3, G4 and G5, as well as G2 and G3 (P 0.05) where high than G4 and G5. MMP and ACi were not different (P>0.05) among groups. It is concluded that ethylene glycol (3 and 5%) and acetamide (2 and 7%) don't are effectives in protecting ram spermatozoa subjected to freezing.

Objetivando-se avaliar o efeito de diferentes concentrações dos crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos, foram utilizados seis pools de sêmen de quatro reprodutores mestiços da raça Santa Inês. Após aprovação, o pool dos ejaculados foi diluído em Tris-gema, acrescido de glicerol (G1=5%; controle), etileno glicol (G2=3%; G3=5%) ou acetamida (G4=2%; G5=7%), envasado em palhetas (0,25mL; 100x106 espermatozoides) e congelado. As amostras descongeladas (37oC/30 segundos) foram avaliadas quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade da membrana plasmática (iMP), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e integridade do acrossoma (iAC). Constatou-se que a MP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G3, G4 e G5, e que o vigor dos G1, G2 e G3 foi maior (P 0,05) do que o dos G4 e G5. A iMP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G2, G3, G4 e G5, assim como os G2 e G3 foram superiores (P 0,05) a G4 e G5. O PMM e a iAC não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Conclui-se que o etileno glicol (3 e 5%) e a acetamida (2 e 7%) não são eficazes para a proteção dos espermatozoides ovinos submetidos à congelação.

Crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos

Aiming to evaluate the effect of different concentrations of ethylene glycol or acetamide cryoprotectants on in vitro viability of ram frozen spermatozoa, were used six semen-pools from four Santa Inês crossbred males. After approval, the ejaculate-pool was diluted in Tris egg-yolk plus glycerol (G1=5%; control), ethylene glycol (3%=G2; G3=5%) or acetamide (G4=2%; G5=7%), loaded in straws (0.25mL; 100x106 sperm) and frozeng. Thawed samples (37oC/30 seconds) were evaluated for progressive motility (PM), vigor, plasma membrane integrity (PMi), mitochondrial membrane potential (MMP) and acrosome integrity (ACi). It was found that the PM of G1 was higher (P 0.05) than G3, G4 and G5, and that the vigor of G1, G2 and G3 was higher (P 0.05) than G4 and G5. The PMi of G1 was higher (P 0.05) than G2, G3, G4 and G5, as well as G2 and G3 (P 0.05) where high than G4 and G5. MMP and ACi were not different (P>0.05) among groups. It is concluded that ethylene glycol (3 and 5%) and acetamide (2 and 7%) don't are effectives in protecting ram spermatozoa subjected to freezing.

Objetivando-se avaliar o efeito de diferentes concentrações dos crioprotetores etileno glicol ou acetamida na viabilidade in vitro de espermatozoides congelados de ovinos, foram utilizados seis pools de sêmen de quatro reprodutores mestiços da raça Santa Inês. Após aprovação, o pool dos ejaculados foi diluído em Tris-gema, acrescido de glicerol (G1=5%; controle), etileno glicol (G2=3%; G3=5%) ou acetamida (G4=2%; G5=7%), envasado em palhetas (0,25mL; 100x106 espermatozoides) e congelado. As amostras descongeladas (37oC/30 segundos) foram avaliadas quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade da membrana plasmática (iMP), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e integridade do acrossoma (iAC). Constatou-se que a MP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G3, G4 e G5, e que o vigor dos G1, G2 e G3 foi maior (P 0,05) do que o dos G4 e G5. A iMP do G1 foi superior (P 0,05) à dos G2, G3, G4 e G5, assim como os G2 e G3 foram superiores (P 0,05) a G4 e G5. O PMM e a iAC não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Conclui-se que o etileno glicol (3 e 5%) e a acetamida (2 e 7%) não são eficazes para a proteção dos espermatozoides ovinos submetidos à congelação.

Espermatozoides caprinos criopreservados em meio à base de leite desnatado acrescido de glutationa reduzida

Aiming to evaluate in vitro effect of different concentrations of glutathione reduced (GSH) in skimmed-milk and glycerol 7% it was used semen from five Boer bucks. After collect and evaluation, a pool of samples was diluted in skimmed-milk and glycerol 7% plus antioxidant: G1) Control; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 and G4) GSH 7mM mL-1. Samples were frozen in straws (0.25mL) and stored at -196°C. After thawing, samples were subjected to integrity of the plasma membrane (iMP) and acrosomal (iAc), mitochondrial membrane potential (MMP), kinematic and ultrastructure analysis. Control and GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups did no differ (P>0.05) in iMP, iAc, PMM and kinematic parameters. In the ultrastructural analysis, percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intact did not differ (P>0.05) between groups. However, Control group had higher percentage (P 0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups. Higher percentage (P 0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7mM mL-1). It can be concluded that the GSH (2, 5 and 7mM mL-1) addition in skimmed-milk diluent to freeze goat semen did not preserve sperm integrity.

Visando avaliar o efeito da adição de glutationa reduzida (GSH) ao diluente de congelação de sêmen caprino à base de leite desnatado, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores Boer. Após colheita e avaliação, procedeu-se à formação do pool dos ejaculados e diluição em leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes: G1) Controle; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 e G4) GSH 7mM mL-1. As amostras foram congeladas em palhetas (0,25mL) e armazenadas a -196°C. Após descongelação, avaliou-se a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética e ultraestrutura. Os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM mL-1) não diferiram (P>0,05) em iMP, iAc, PMM e cinética. Na análise ultraestrutural, os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos. Todavia, o grupo Controle apresentou maior porcentual (P 0,05) de gametas com axonema íntegros do que os de GSH (2, 5 e 7mM mL-1). Maior porcentagem (P 0,05) de espermatozoides com mitocôndrias íntegras foi observada no grupo Controle do que nos de GSH (5 e 7 mM mL-1). Conclui-se que a adição de GSH (2, 5 e 7mM mL-1) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado, não preserva a integridade dos espermatozoides.

Oxidative stress profile in goats supplemented or not with selenium and vitamin E and submitted to scrotal insulation / Perfil de marcadores do estresse oxidativo em caprinos suplementados ou não com selênio e vitamina E e submetidos à insulação escrotal

To evaluate the effect of supplementation with selenium and vitamin E in the diet of goats induced to scrotal insulation (SI) on the profile of biochemical markers of systemic oxidative metabolism 12 animals were randomly divided into two groups: G1 - no supplementation G2 - supplemented with selenium (0.1 mg / kg body weight of sodium selenite) and vitamin E (0.3 IU / kg body weight). At the end of the adjustment period of 30 days, the scrotal insulation (SI) was performed with the placement of plastic bags in the testes for 18 days. Supplementation with Se + vitamin E began 60 days before induction of SI and maintained for 42 days after the end of SI, corresponding to post-insulation (PSI). Blood samples were obtained by jugular venipuncture to obtain total blood for analysis of reduced glutathione (GSH) and plasma for analysis of thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) and determination of ferric reducing ability of plasma (FRAP). No effect of dietary supplementation with Se + vitamin E on the profile of all the variables studied, but there was systemic oxidative action understood by a significant decrease of GSH during the SI, with a gradual increase in the PSI period, as well as lower average of FRAP observed during the SI and the highest average in the period from PSI. It was concluded that analysis of the activity of reduced glutathione (GSH) and concentrations of

Para avaliar o efeito da suplementação com selênio e vitamina E na dieta de caprinos induzidos à insulação escrotal (IE) sobre o perfil de indicadores bioquímicos do metabolismo oxidativo sistêmico foram utilizados 12 animais, os quais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: G1 - sem suplementação; G2 - suplementados com selênio (0,1 mg/Kg de peso vivo de selenito de sódio) e vitamina E (0,3 UI/Kg de peso vivo). Ao término do período de adaptação de 30 dias, realizou-se a indução da insulação escrotal (IE) com colocação de bolsas plásticas nos testículos por período de 18 dias. A suplementação com Se e Vitamina E teve início 60 dias antes da indução da IE e mantida durante 42 dias após o término da IE, correspondendo à fase pós-insulação (PIE). Amostras de sangue foram obtidas por venopunção jugular para obtenção de sangue total para análise de glutationa reduzida (GSH) e plasma para análise de substância reativa ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e determinação da habilidade de redução férrica plasmática (HRFP). Não houve efeito da suplementação dietética com Se e Vitamina E sobre o perfil do conjunto de variáveis estudadas, porém verificou-se ação oxidativa sistêmica compreendida pela diminuição significativa da GSH no período da IE, com aumento gradativo no período PIE, bem como menores valores médios da variável HRFP observados no período da IE e maiores médias no pe

Espermatozoides caprinos criopreservados em meio à base de leite desnatado acrescido de glutationa reduzida

Aiming to evaluate in vitro effect of different concentrations of glutathione reduced (GSH) in skimmed-milk and glycerol 7% it was used semen from five Boer bucks. After collect and evaluation, a pool of samples was diluted in skimmed-milk and glycerol 7% plus antioxidant: G1) Control; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 and G4) GSH 7mM mL-1. Samples were frozen in straws (0.25mL) and stored at -196°C. After thawing, samples were subjected to integrity of the plasma membrane (iMP) and acrosomal (iAc), mitochondrial membrane potential (MMP), kinematic and ultrastructure analysis. Control and GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups did no differ (P>0.05) in iMP, iAc, PMM and kinematic parameters. In the ultrastructural analysis, percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intact did not differ (P>0.05) between groups. However, Control group had higher percentage (P 0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups. Higher percentage (P 0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7mM mL-1). It can be concluded that the GSH (2, 5 and 7mM mL-1) addition in skimmed-milk diluent to freeze goat semen did not preserve sperm integrity.

Visando avaliar o efeito da adição de glutationa reduzida (GSH) ao diluente de congelação de sêmen caprino à base de leite desnatado, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores Boer. Após colheita e avaliação, procedeu-se à formação do pool dos ejaculados e diluição em leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes: G1) Controle; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 e G4) GSH 7mM mL-1. As amostras foram congeladas em palhetas (0,25mL) e armazenadas a -196°C. Após descongelação, avaliou-se a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética e ultraestrutura. Os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM mL-1) não diferiram (P>0,05) em iMP, iAc, PMM e cinética. Na análise ultraestrutural, os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos. Todavia, o grupo Controle apresentou maior porcentual (P 0,05) de gametas com axonema íntegros do que os de GSH (2, 5 e 7mM mL-1). Maior porcentagem (P 0,05) de espermatozoides com mitocôndrias íntegras foi observada no grupo Controle do que nos de GSH (5 e 7 mM mL-1). Conclui-se que a adição de GSH (2, 5 e 7mM mL-1) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado, não preserva a integridade dos espermatozoides.

Different methods and techniques in sperm evaluation: a brief review / Diferentes métodos e técnicas na avaliação espermática: uma breve revisão

Fertilization is a process that is influenced by intrinsic and extrinsic factors, and use of biotechnologies can both enhance and decrease the rates found in the field. Evaluation of semen sample can contribute to maximizing results of pregnancy, however, practices developed for analysis in professional practice fertilizer underestimate the potential of sperm cells, necessitating the use of methods and techniques that more reliably investigate the fertilizing ability of sperm cell, such as objective assessment of motility, fluorescent techniques to identify preserved membranes and even more accurate tests such as transmission electron microscopy. Therefore, this review aims to clarify what methods and techniques have been developed and used in the analysis of spermatozoa of domestic animals.

A fecundação é um processo que sofre interferência de fatores intrínsecos e extrínsecos, e a utilização de biotécnicas pode tanto aprimorar ou diminuir os índices obtidos a campo. A avaliação da amostra seminal pode contribuir para a maximização dos resultados de prenhez. Entretanto, as práticas desenvolvidas para análise na prática profissional subestimam o potencial fertilizante da célula esper-mática, sendo necessária a utilização de métodos e técnicas que investiguem com maior confiabilidade a capacidade fertilizante da célula espermática, como a avaliação objetiva da motilidade, técnicas fluorescentes para identificar membranas preservadas e, ainda mais precisas, como a microscopia eletrônica de transmissão. Desta forma, com esta breve revisão objetivou-se discorrer sobre métodos e técni-cas que vêm sendo desenvolvidos e utilizados na análise de espermatozóides de animais domésticos.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Semen sorting / Sexagem de sêmen

Many factors have been associated to the variation on the rate of mammal male and female births, such as nutrition, season of the year, diseases, gonadotropin and steroid hormone concentrations, insemination moment, social status, stress, age and parity. The possibility of influencing in animal sex aiming to produce, preferentially, the birth of males or females will bring great economic benefit to producers of farm animals, besides avoiding the disappearance of animals and races threatened by extinction, increasing its numbers by artificial insemination (AI) with sexed semen. This paper had the objective to relate the main techniques used to sort sperm cells (X or Y) and the viability of these gametes in the samples of domestic animal semen.

Numerosos fatores têm sido associados à variação no número de nascimentos de machos e fêmeas dos mamíferos, como nutrição, estação do ano, doenças, concentração de gonadotropinas e hormônios esteróides, momento de inseminação, status social, estresse, idade e paridade. A possibilidade de influenciar no sexo do animal com o objetivo de produzir, preferencialmente, o nascimento de machos ou de fêmeas trará grande benefício econômico aos sistemas de criação, além de evitar o desaparecimento de animais ou raças ameaçadas de extinção, aumentando o seu número por meio da inseminação artificial (IA) com sêmen sexado. Objetivou-se com essa revisão abordar as principais técnicas utilizadas para separação de células espermáticas (X ou Y) e a viabilidade destes gametas em amostras de sêmen dos animais domésticos.

Adição de piruvato de sódio e trolox ao diluidor utilizado para congelação de sêmen de garanhões férteis e subférteis

The objective of this research was to evaluate the effect of pyruvate and trolox on the thawed sperm quality. For freezing, antioxidants were added to INRA 82-HEPES extender to protect sperm from the deleterious effects of oxidative stress, according to the treatments: T1= INRA82-HEPES without antioxidants; T2= INRA82-HEPES + 2mM of pyruvate and T3= INRA82-HEPES + 120 mM de trolox. The thawed semen samples were evaluated according to the total (MT) and progressive (MP) motility, integrity of plasma and acrossomal membrane, DNA integrity, membrane stability and mitochondrial membrane potential (m). It was observed that the addition of pyruvate resulted in a significantly higher total sperm motility (P 0.05) to those obtained with trolox (9.17 and 14.5%, respectively). It can be concluded that the addition of pyruvate improves sperm motility (18.92 and 19.0%, respectively) in samples from fertile and sub-fertile stallions submitted to freezing.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do piruvato e trolox (forma solúvel da vitamina E) sobre a qualidade espermática pós-descongelamento. Assim, com o intuito de proteger as células espermáticas dos efeitos deletérios da criopreservação,foram considerados os seguintes tratamentos: T1 (Controle)= INRA82-HEPES sem antioxidantes; T2= INRA82-HEPES + 2mM de piruvato e T3= INRA82-HEPES + 120mM de trolox. As amostras de sêmen descongeladas foram avaliadas quanto à motilidade total (MT) e progressiva (MP),a integridades de membrana plasmática e acrossômica, integridade do DNA, à estabilidade de membrana e ao potencial de membrana mitocondrial (m). A adio de piruvato proporcionou resultados superiores (P 0,05) àqueles obtidos com trolox na motilidade espermática total (9,17 e 14,5%, respectivamente). A adição de piruvato incrementa a motilidade espermática (18,92 e 19,0%, respectivamente) em garanhões férteis e subférteis submetidos à congelação.

Adição de piruvato de sódio e trolox ao diluidor utilizado para congelação de sêmen de garanhões férteis e subférteis

The objective of this research was to evaluate the effect of pyruvate and trolox on the thawed sperm quality. For freezing, antioxidants were added to INRA 82-HEPES extender to protect sperm from the deleterious effects of oxidative stress, according to the treatments: T1= INRA82-HEPES without antioxidants; T2= INRA82-HEPES + 2mM of pyruvate and T3= INRA82-HEPES + 120 mM de trolox. The thawed semen samples were evaluated according to the total (MT) and progressive (MP) motility, integrity of plasma and acrossomal membrane, DNA integrity, membrane stability and mitochondrial membrane potential (m). It was observed that the addition of pyruvate resulted in a significantly higher total sperm motility (P 0.05) to those obtained with trolox (9.17 and 14.5%, respectively). It can be concluded that the addition of pyruvate improves sperm motility (18.92 and 19.0%, respectively) in samples from fertile and sub-fertile stallions submitted to freezing.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do piruvato e trolox (forma solúvel da vitamina E) sobre a qualidade espermática pós-descongelamento. Assim, com o intuito de proteger as células espermáticas dos efeitos deletérios da criopreservação,foram considerados os seguintes tratamentos: T1 (Controle)= INRA82-HEPES sem antioxidantes; T2= INRA82-HEPES + 2mM de piruvato e T3= INRA82-HEPES + 120mM de trolox. As amostras de sêmen descongeladas foram avaliadas quanto à motilidade total (MT) e progressiva (MP),a integridades de membrana plasmática e acrossômica, integridade do DNA, à estabilidade de membrana e ao potencial de membrana mitocondrial (m). A adio de piruvato proporcionou resultados superiores (P 0,05) àqueles obtidos com trolox na motilidade espermática total (9,17 e 14,5%, respectivamente). A adição de piruvato incrementa a motilidade espermática (18,92 e 19,0%, respectivamente) em garanhões férteis e subférteis submetidos à congelação.

Effect of diet supplementation with Selenium and Vitamin E on the seminal parameters of goats induced to scrotal insulation - DOI: 10.4025/actascianimsci.v30i1.3620 / Suplementação dietética com Selênio e Vitamina E nos parâmetros seminais de caprinos induzidos à insulação escrotal - DOI: 10.4025/actascianimsci.v30i1.3620

This study evaluated the effect of Selenium and Vitamin E supplementation on the semen parameters of goats induced to scrotal insulation (SI). Twelve animals were used, distributed randomly in two groups (G1 = Control; G2 = Selenium and Vitamin E). Two months after the start of diet supplementation on G2 animals, it was realized SI was induced during 18 days. After this period (SI), supplementation was maintained during 42 days, corresponding to the post-insulation phase (PSI). For semen analysis, six semen collections were performed (before, during and after SI). There was no effect of Selenium and Vitamin E supplementation on the quanti-qualitative characteristics of the semen. With the exception of semen volume, a significant effect (p 0.05) was observed between collection days for both groups (G1 and G2), with reduction in motility, vigor, sperm concentration, acrosome and DNA integrity. After 42 days of SI, normal values were observed for motility and sperm vigor, acrosome and DNA integrity in one animal per group. It can be concluded that the high temperature of the testes of goats subjected to SI alters semen parameters; Selenium and Vitamin E supplementation on goats, in a concentration of 0.1 mg and 0.3 mg kg-1 BW-1, respectively, was not sufficient to minimize the deleterious effects of induced scrotal insulation

Avaliou-se o efeito da suplementação alimentar com Selênio e Vitamina E sobre os parâmetros seminais de caprinos submetidos à insulação escrotal (IE). Utilizaram-se 12 animais distribuídos, aleatoriamente, em grupos-controle (G1) e Selênio e Vitamina E (G2). Dois meses após o início da suplementação alimentar nos animais do G2, realizou-se IE durante 18 dias. Após este período (IE), a suplementação foi mantida por mais 42 dias (fase pós-insulação escrotal, PIE). Para análise seminal, foram efetuadas seis colheitas de sêmen (antes, durante e após a IE). Não foi observado efeito da suplementação com Selênio e Vitamina E nas características quanti-qualitativas do sêmen. Com exceção do volume seminal, foi observada diferença significativa (p 0,05) entre os dias de colheita para ambos os grupos, com redução de motilidade, vigor, concentração espermática, integridade do acrossoma e de DNA. Decorridos 42 dias da IE, observou-se normalidade de motilidade, vigor espermático, integridade de acrossoma e de DNA em um animal de cada grupo. Conclui-se que a temperatura elevada nos testículos de caprinos submetidos à IE altera os parâmetros seminais; a suplementação com Selênio e Vitamina E, nas concentrações de 0,1 e 0,3 mg kg-1 PV, respectivamente, não é suficiente para minimizar os efeitos deletérios da insulação escrotal induzida.

Incubation time effect after thawing on the viability of cryopreserved ovine sperm with Tris-Yolk supplemented with vitamin C and Trolox / Efeito do tempo de incubação pós-descongelação sobre a viabilidade de espermatozóides ovinos criopreservados com Tris-Gema suplementado com vitamina C e Trolox

The aim of this study was to evaluate the effect of the incubation time after thawing on the viability of ovine sperm cryopreserved in Tris-yolk diluent supplemented with vitamin C and Trolox. Semen samples of four Santa Ines rams were collected with an artificial vagina and evaluated according to motility and vigor. The semen samples´ pool was submitted to dilution with Tris-yolk supplemented with antioxidant substances in accordance with the experimental group: G1) Tris-yolk (Control Group); G2) Tris-yolk + 600µM/L of vitamin C; G3) Tris-yolk + 60µM/L of Trolox and G4) Tris-yolk + 600µM/L of vitamin C + 60µM/L of Trolox. After this, the straws (0.25 mL) with 100 x 106 spermatozoa were transferred to a freezing machine using the fast curve (- 0.5 ºC/minute, from 25 ºC to 5 ºC, and - 12.5 ºC/minute, from 5 ºC to -120 ºC) and after to reaching -120 ºC the straws were immersed and stored in liquid nitrogen (-196 ºC). After thawing at 37 ºC during 30 seconds, the semen samples were transferred to dry test tubes previously warmed (37 ºC) and kept at this temperature, where they were analyzed at 0, 30 and 60 minutes of incubation according to progressive motility (PM), vigor, acrosome and DNA integrity (AI) and oxidative stress (SOX). Significant differences were evidenced (P 0.05) between incubation time to PM, AI and SOX, as well as between experimental groups to AI and SOX par

Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito do tempo de incubação pós-descongelação sobre a viabilidade de espermatozóides ovinos criopreserva¬dos em diluente Tris-Gema suplementado com vitamina C e Trolox. Amostras de sêmen de quatro reprodutores ovinos da raça Santa Inês foram colhidas com auxílio de vagina artificial e, após efetuadas as avaliações (motilidade, vigor), procedeu-se à formação do pool de amostras, o qual foi submetido ao procedimento de diluição com Tris-Gema acrescido de antioxidantes de acordo com o grupo experimental: G1) Tris-Gema (Grupo controle); G2) Tris-Gema + 600µM/L de vitamina C; G3) Tris-Gema + 60µM/L de Trolox e G4) Tris-Gema + 600µM/L de vitamina C + 60µM/L de Trolox. A seguir, as palhetas (0,25 mL) contendo 100 x 106 espermatozóides foram colocadas em máquina de congelação utilizando a curva rápida (- 0,5 ºC/ min, de 25 ºC a 5 ºC, e a - 12,5 ºC/ min, de 5 ºC a -120 ºC) e, após atingir - 20 ºC, as palhetas foram imersas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC durante 30 segundos, as amostras de sêmen foram transferidas para tubos de ensaio previamente aquecidos (37 ºC) e mantidas nesta temperatura, onde foram analisadas a 0, 30 e 60 min de incubação quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade de acrossoma (IA) e de DNA, e estresse oxidativo (EOX). Constataram-se diferenças significativas (P 0,05) entre os

Histomorphometry of the testicular parenchyma of adult dogs treateds with ivermectin / Histomorfometria do parênquima testicular de cães adultos tratados com ivermectina

The aim of this research was to evaluate through histomorphometric study, the testicular parenchyma, the daily spermatic production and the efficiency of the spermatogenic process in undefined breed (NDB) adult dogs submitted to five subcutaneous administrations of ivermectin, weekly. Seven adult dogs were divided into two groups: Control (n=4) and Treated (n=3). The treated dogs received 600µg of ivermectin/kg of body weight and control dogs received saline solution at 0.9% of Sodium Chloride. The dogs were weighed weekly to in order to follow the body weight and to calculate the dose of ivermectin. At the end of the experimental period, the dogs were weighet, anesthetized and castrated. The testes were weighed and submitted to analysis through the quantitative and qualitative histology. The testicular parenchyma, the daily spermatic production and the efficiency of the spermatogenic process of the dogs had no toxic or degenerative effects after the application of ivermectin. All of these were observed through the maintenance of the daily spermatic production, the intrinsic income of spermatogenesis (PED/g/t) and the testicular parenchyma structure. Based on the quantitative morphometric evaluations of the spermatogenic process and structure of the testis parenchyma, it is possible to use up to 600µg of ivermectin/kg of body weight in NDB dogs on the helminth control without c

Avaliou-se, através da histomorfometria, o parênquima testicular, a produção espermática diária e a eficiência do processo espermatogênico em cães adultos sem raça definida (SRD), submetidos a cinco administrações subcutâneas de ivermectina, a intervalos semanais. Foram utilizados sete cães adultos, os quais foram divididos em dois grupos: Controle (n=4) e Tratado (n=3). Os cães do grupo Tratado receberam ivermectina, por via subcutânea, na dosagem de 600µg/kg de peso corporal, enquanto os cães do grupo Controle receberam solução fisiológica a 0,9% de Cloreto de sódio. Os cães foram pesados semanalmente para acompa-nhamento do peso corporal e cálculo da dose de ivermectina. No final do período experimental, os cães foram pesados, anestesiados e castrados. Os testículos fo-ram pesados e submetidos à análise através de histologia quantitativa e qualitativa. O parênquima testicular e o processo espermatogênico dos cães não evidenciaram efeito tóxico ou degenerativo resultante da aplicação de ivermectina, observados através da manutenção da produção espermática diária, do rendimento intrínseco da espermatogênese (PED/g/t), e da estrutura do parênquima testicular. Com base nas avaliações morfométricas quantitativas do processo espermatogênico e na es-trutura do parênquima testicular, é possível utilizar a administração de até 600µg de ivermectina/kg de peso corporal em cães SRD no c

Efeito do diluidor baken modificado na longevidade espermática de cão

Têm-se relatado diversos trabalhos relacionados com a biotecnologia do sêmen de cão, comprovando o interesse noaperfeiçoamento das raças, além de diminuição de custos, uma vez que a tecnologia do sêmen permite reduzir o número demachos em um canil. O diluidor baken é utilizado no resfriamento do sêmen de eqüino e de asinino. No entanto, ainda nãose tem relato de seu uso na preservação do sêmen da espécie canina. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliara eficácia do diluidor baken modificado no resfriamento do sêmen de cão. Para isso, foram coletados sêmen de quatro cães,sem raça definida, e avaliados os parâmetros de motilidade e integridade de membrana. Observou-se que a membranaespermática, assim como a motilidade individual progressiva, mantiveram-se preservadas até 48 horas de resfriamento. Omeio baken modificado constitui diluidor eficaz no procedimento de refrigeração de sêmen de cão.

Ultrasonographic evaluation of the fetal development of Santa Ines breed ovine / Avaliação ultra-sonográfica do desenvolvimento fetal de ovinos da raça Santa Inês

Aiming the accompaniment of the fetal development, the quantification of the fetus number and the establishment of the correlation between gestational age and fetal measures of the biparietal diameter (DBP) and abdominal diameter (DA) in sheeps of the Santa Ines breed, ultrasound exams (US) were carried out every two weeks, in 40 females, using transductors of 6 and 8 MHz, transrectal and transabdominal, according to the gestational phase. The results showed that the best period to evaluate fetal development through DBP and DA was between 80 and 129 days of gestation. When correlated with fetal age, the DBP presented R2 equal to 0.637 and 0.628 and the DA was R2 equal to 0.631 and 0.670 to the simple and double gestation, respectively (P 0,05). It was concluded that US is an essential tool for the evaluation of the fetal development, as well as the fetal measures can be used to predict gestational age.

Com o objetivo de efetuar o monitoramento do desenvolvimento fetal, quantificar o numero de fetos e estabelecer correlação entre a idade gestacional e as medidas fetais do diâmetro biparietal (DBP) e diâmetro abdominal (DA) em ovelhas da raça Santa Inês, foram realizados exames ultrassonográficos (US), quinzenalmente, em 40 fêmeas, utilizando transdutor de 6 e 8 MHz, por via endoretal e transabdominal, de acordo com a fase gestacional. Os resultados obtidos demonstraram que o melhor período para avaliação do desenvolvimento fetal, através das medidas de DBP e DA, foi entre os dias 80 e 129 de gestação. Quando correlacionados com a Idade fetal, o DBP apresentou R2 igual a 0,637 e 0,628 e o DA obteve R2 igual a 0,631 e 0,670, para gestação simples e dupla, respectivamente (P 0,05). Conclui-se que a US é uma ferramenta imprescindível para o monitoramento do desenvolvimento fetal, bem como as medidas fetais podem ser utilizadas para predizer a idade gestacional.

Influência da variação individual na congelabilidade do sêmen e fertilidade in vivo de ovinos deslanados

Aiming to evaluate the individual influence of hair rams on freezability levels of its ejaculates and fertility rate after fixed time laparoscopic artificial insemination (ILTF) were used nine rams and 80 hair ewes, pre-selected. Ten samples of semen from each ram were frozen using Fiser extender. The females were submitted to estrus synchronization by Crestar® program, when were used 1/4 of ear implant impregnated with 0.75 mg of Norgestomet, associated to 0.75 mL of Norgestomet + 15 mg of Estradiol valerate, Lm. When the implants were removed, ten days later insertion, it was Lm. injected, 250 I.U. of eCG and 60l-lg of cloprostenol. The ewes were inseminated by laparoscopy in fixed time 55 to 60 hours after implants withdrawal, using 75 millions of overall spermatozoa/ewe. The pregnancy diagnosis was made by ultrasonography, 40 days after ILTF. The rams classified as high, intermediate and low freezability had 80.00%, 70.00% and 53.33% of approved ejaculates, respectively. There was no statistical difference (P>0.05) on post-thaw individual progressive motility among groups of high, intermediate and low semen freezability. The pregnancy rate did not show statistical difference (P>0.05) using semen from different freezability levels rams. It was observed fertility variation by ram (P 0.05), despite their freezability sensitivity. ln conclusion, there is individual var

Objetivando avaliar a influência individual do carneiro deslanado sobre o grau de congelabilidade dos seus ejaculados e a taxa de fertilidade após inseminação artificial laparoscópica em tempo fixo (ILTF), foram utilizados nove reprodutores e 80 ovelhas deslanadas, previamente selecionados. Dez amostras de sêmen de cada reprodutor foram congeladas utilizando o diluidor Fiser. As fêmeas foram submetidas à sincronização do estro utilizando o programa Crestar®, quando se utilizou 1/4 do implante auricular impregnado com 0,75 mg de Norgestomet, associado à administração de 0,75 mg de Norgestomet + 1,5 mg de Valerato de estradiol, via i.m. No momento da retirada dos implantes, dez dias após sua colocação, administrou-se 250 U.1. de eCG e 50IJg de c1oprostenol, por via i.m. As ovelhas foram inseminadas por laparoscopia em tempo fixo, entre 55 e 50 horas após a remoção dos implantes, utilizando-se 75 milhões de espermatozoides totais/ovelha. O diagnóstico de gestação foi realizado através de exame ultra-sonográfico, 40 dias após a ILTF. Os reprodutores classificados como de alta, média e baixa congelabilidade apresentaram 80,00%, 70,00% e 53,33% de seus ejaculados aprovados, respectivamente. Não houve diferença significativa (P>0,05) na motilidade individual progressiva (MIP), pós-descongelação, entre os grupos de alta, média e baixa congelabilidade do sêmen. A taxa de gestação não