Different methods and techniques in sperm evaluation: a brief review / Diferentes métodos e técnicas na avaliação espermática: uma breve revisão

Fertilization is a process that is influenced by intrinsic and extrinsic factors, and use of biotechnologies can both enhance and decrease the rates found in the field. Evaluation of semen sample can contribute to maximizing results of pregnancy, however, practices developed for analysis in professional practice fertilizer underestimate the potential of sperm cells, necessitating the use of methods and techniques that more reliably investigate the fertilizing ability of sperm cell, such as objective assessment of motility, fluorescent techniques to identify preserved membranes and even more accurate tests such as transmission electron microscopy. Therefore, this review aims to clarify what methods and techniques have been developed and used in the analysis of spermatozoa of domestic animals.

A fecundação é um processo que sofre interferência de fatores intrínsecos e extrínsecos, e a utilização de biotécnicas pode tanto aprimorar ou diminuir os índices obtidos a campo. A avaliação da amostra seminal pode contribuir para a maximização dos resultados de prenhez. Entretanto, as práticas desenvolvidas para análise na prática profissional subestimam o potencial fertilizante da célula esper-mática, sendo necessária a utilização de métodos e técnicas que investiguem com maior confiabilidade a capacidade fertilizante da célula espermática, como a avaliação objetiva da motilidade, técnicas fluorescentes para identificar membranas preservadas e, ainda mais precisas, como a microscopia eletrônica de transmissão. Desta forma, com esta breve revisão objetivou-se discorrer sobre métodos e técni-cas que vêm sendo desenvolvidos e utilizados na análise de espermatozóides de animais domésticos.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Semen sorting / Sexagem de sêmen

Many factors have been associated to the variation on the rate of mammal male and female births, such as nutrition, season of the year, diseases, gonadotropin and steroid hormone concentrations, insemination moment, social status, stress, age and parity. The possibility of influencing in animal sex aiming to produce, preferentially, the birth of males or females will bring great economic benefit to producers of farm animals, besides avoiding the disappearance of animals and races threatened by extinction, increasing its numbers by artificial insemination (AI) with sexed semen. This paper had the objective to relate the main techniques used to sort sperm cells (X or Y) and the viability of these gametes in the samples of domestic animal semen.

Numerosos fatores têm sido associados à variação no número de nascimentos de machos e fêmeas dos mamíferos, como nutrição, estação do ano, doenças, concentração de gonadotropinas e hormônios esteróides, momento de inseminação, status social, estresse, idade e paridade. A possibilidade de influenciar no sexo do animal com o objetivo de produzir, preferencialmente, o nascimento de machos ou de fêmeas trará grande benefício econômico aos sistemas de criação, além de evitar o desaparecimento de animais ou raças ameaçadas de extinção, aumentando o seu número por meio da inseminação artificial (IA) com sêmen sexado. Objetivou-se com essa revisão abordar as principais técnicas utilizadas para separação de células espermáticas (X ou Y) e a viabilidade destes gametas em amostras de sêmen dos animais domésticos.

Different methods and techniques in sperm evaluation: a brief review / Diferentes métodos e técnicas na avaliação espermática: uma breve revisão

Fertilization is a process that is influenced by intrinsic and extrinsic factors, and use of biotechnologies can both enhance and decrease the rates found in the field. Evaluation of semen sample can contribute to maximizing results of pregnancy, however, practices developed for analysis in professional practice fertilizer underestimate the potential of sperm cells, necessitating the use of methods and techniques that more reliably investigate the fertilizing ability of sperm cell, such as objective assessment of motility, fluorescent techniques to identify preserved membranes and even more accurate tests such as transmission electron microscopy. Therefore, this review aims to clarify what methods and techniques have been developed and used in the analysis of spermatozoa of domestic animals.

A fecundação é um processo que sofre interferência de fatores intrínsecos e extrínsecos, e a utilização de biotécnicas pode tanto aprimorar ou diminuir os índices obtidos a campo. A avaliação da amostra seminal pode contribuir para a maximização dos resultados de prenhez. Entretanto, as práticas desenvolvidas para análise na prática profissional subestimam o potencial fertilizante da célula esper-mática, sendo necessária a utilização de métodos e técnicas que investiguem com maior confiabilidade a capacidade fertilizante da célula espermática, como a avaliação objetiva da motilidade, técnicas fluorescentes para identificar membranas preservadas e, ainda mais precisas, como a microscopia eletrônica de transmissão. Desta forma, com esta breve revisão objetivou-se discorrer sobre métodos e técni-cas que vêm sendo desenvolvidos e utilizados na análise de espermatozóides de animais domésticos.

Semen sorting / Sexagem de sêmen

Many factors have been associated to the variation on the rate of mammal male and female births, such as nutrition, season of the year, diseases, gonadotropin and steroid hormone concentrations, insemination moment, social status, stress, age and parity. The possibility of influencing in animal sex aiming to produce, preferentially, the birth of males or females will bring great economic benefit to producers of farm animals, besides avoiding the disappearance of animals and races threatened by extinction, increasing its numbers by artificial insemination (AI) with sexed semen. This paper had the objective to relate the main techniques used to sort sperm cells (X or Y) and the viability of these gametes in the samples of domestic animal semen.

Numerosos fatores têm sido associados à variação no número de nascimentos de machos e fêmeas dos mamíferos, como nutrição, estação do ano, doenças, concentração de gonadotropinas e hormônios esteróides, momento de inseminação, status social, estresse, idade e paridade. A possibilidade de influenciar no sexo do animal com o objetivo de produzir, preferencialmente, o nascimento de machos ou de fêmeas trará grande benefício econômico aos sistemas de criação, além de evitar o desaparecimento de animais ou raças ameaçadas de extinção, aumentando o seu número por meio da inseminação artificial (IA) com sêmen sexado. Objetivou-se com essa revisão abordar as principais técnicas utilizadas para separação de células espermáticas (X ou Y) e a viabilidade destes gametas em amostras de sêmen dos animais domésticos.

Teste de avaliação in vitro e criopreservação do sêmen de cão utilizando diferentes diluidores

Visando verificar o tempo de viabilidade das células espermáticas do cão, na temperatura de 38C, e comparar a eficiência dediferentes diluentes na sua criopreservação, foram realizadas 40 colheitas através da manipulação peniana para, no primeiroexperimento, realizar o teste de termorresistência (TIR) do sêmen fresco, onde se observou motilidade e vigor espermático,a cada 15 minutos, durante duas horas. No segundo experimento, as amostras obtidas foram diluídas em leite desnatado(LO), Tris+gema de ovo de galinha (TGG) e Tris+gema de ovo de codorna (TGC), refrigeradas a 5C e, em seguida, adicionadasde glicerol (7%), envasadas e congeladas (-196 ac). O TIR demonstrou que a motilidade e o vigor decaíram gradativamentee, após 45 minutos, observou-se uma redução mais acentuada destes parâmetros espermáticos. Em contrapartida, após ocongelamento, verificou-se motilidade de 11 ,92 %, 41 ,54 % e 50,00 % e 1 ,23, 2, 77 e 3,00 de vigor espermático, demonstrandodiferença significativa (P ~ 0,05) entre o primeiro grupo e os outros dois, que, por sua vez, não diferiram entre si, além de 17,00%, 11,35% e 10,95% de patologias do acrossoma, para os grupos LO, TGG e TGC, respectivamente. Conclui-se, portanto, queo sêmen da espécie canina até 45 minutos a 38C pode ser utilizado na inseminação artificial ou criopreservação e que odiluente Tris, acrescido de gema de ovo (galinha ou codorna), de

Teste de avaliação in vitro e criopreservação do sêmen de cão utilizando diferentes diluidores

Visando verificar o tempo de viabilidade das células espermáticas do cão, na temperatura de 38C, e comparar a eficiência dediferentes diluentes na sua criopreservação, foram realizadas 40 colheitas através da manipulação peniana para, no primeiroexperimento, realizar o teste de termorresistência (TIR) do sêmen fresco, onde se observou motilidade e vigor espermático,a cada 15 minutos, durante duas horas. No segundo experimento, as amostras obtidas foram diluídas em leite desnatado(LO), Tris+gema de ovo de galinha (TGG) e Tris+gema de ovo de codorna (TGC), refrigeradas a 5C e, em seguida, adicionadasde glicerol (7%), envasadas e congeladas (-196 ac). O TIR demonstrou que a motilidade e o vigor decaíram gradativamentee, após 45 minutos, observou-se uma redução mais acentuada destes parâmetros espermáticos. Em contrapartida, após ocongelamento, verificou-se motilidade de 11 ,92 %, 41 ,54 % e 50,00 % e 1 ,23, 2, 77 e 3,00 de vigor espermático, demonstrandodiferença significativa (P ~ 0,05) entre o primeiro grupo e os outros dois, que, por sua vez, não diferiram entre si, além de 17,00%, 11,35% e 10,95% de patologias do acrossoma, para os grupos LO, TGG e TGC, respectivamente. Conclui-se, portanto, queo sêmen da espécie canina até 45 minutos a 38C pode ser utilizado na inseminação artificial ou criopreservação e que odiluente Tris, acrescido de gema de ovo (galinha ou codorna), de