Desenvolvimento e aplicações do ovário artificial em caprinos / Development and applications of artificial ovary in goats

O presente artigo aborda de forma resumida as bases gerais da biotécnica de Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais (MOIFOPA) com ênfase nos estudos relativos ao desenvolvimento de um ovário artificial na espécie caprina. A importância do ovário artificial para a elucidação da foliculogênese inicial, testes de drogas sobre a dinâmica folicular e a sua potencial utililização para a produção in vitro de embriões em larga escala respeitando-se o bem-estar animal é destacada. (AU)

The present paper summarizes the basic aspects of the biotechnology of manipulation of oocytes enclosed in ovarian preantral follicles emphasizing the studies to develop an artificial ovary in goat species.. The importance of the artificial ovary for the understanding of early folliculogenesis, evaluation the effects of different drugs on follicular dynamics and its potential use for the in vitro production of embryos in large scale ensuring the animal welfare is highlighted.(AU)

Desenvolvimento e aplicações do ovário artificial em caprinos / Development and applications of artificial ovary in goats

O presente artigo aborda de forma resumida as bases gerais da biotécnica de Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais (MOIFOPA) com ênfase nos estudos relativos ao desenvolvimento de um ovário artificial na espécie caprina. A importância do ovário artificial para a elucidação da foliculogênese inicial, testes de drogas sobre a dinâmica folicular e a sua potencial utililização para a produção in vitro de embriões em larga escala respeitando-se o bem-estar animal é destacada.

The present paper summarizes the basic aspects of the biotechnology of manipulation of oocytes enclosed in ovarian preantral follicles emphasizing the studies to develop an artificial ovary in goat species.. The importance of the artificial ovary for the understanding of early folliculogenesis, evaluation the effects of different drugs on follicular dynamics and its potential use for the in vitro production of embryos in large scale ensuring the animal welfare is highlighted.

Teste de toxicidade e criopreservação de folículos pré-antrais ovinos isolados utilizando Glicerol, Etilenoglicol, Dimetilsulfóxido e Propanodiol / Toxicity test and cryopreservation of sheep isolated preantral follicles using glycerol, ethylen glycol, dimethil sulfoxyde and propanediol

O objetivo deste estudo foi avaliar foliculos pré-antrais (FOPA) ovinos isolados após sua exposição e criopreservação utilizando glicerol (GLI), etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) a 1,5 e 3,0 M. Cada par ovariano de 5 ovelhas sem raça definida foi coletado em abatedouro local e submetido ao isolamento folicular. Da suspensão obtida, uma aliquota foi imediatamente destinada à análise da viabilidade folicular com o auxílio do corante vital azul de trypan. O restante da suspensão foi dividida em 16 aliquotas de 0,9 mL, suspensas (v/v) em MEM+ com EG, DMSO, GLI ou PROH a 1,5 ou 3,0 M, para teste de toxicidade e criopreservação. Após o término de cada tratamento, a viabilidade folicular foi analisada e os FOPA considerados viáveis se não corados ou não viáveis, quando corados. A análise dos dados mostrou que após o teste de toxicidade e criopreservação, em todos os crioprotetores e em ambas as concentrações, a percentagem de FOPA viáveis foi significativamente reduzida quando comparada ao controle. No teste de toxicidade, quando os crioprotetores foram comparados entre si nas mesmas concentrações, foram observadas percentagens signifIcativamente menores de FOPA viáveis no PROH 3,0 M (38,9%), apresentando-se, portanto, mais tóxico quando comparado aos demais crioprotetores. Após criopreservação, obteve-se percentagens significativamente maiores de foliculos pré-antrais viáveis quando o EG e o DMSO foram utilizados. Em conclusão, FOPA ovinos isolados podem ser criopreservados com sucesso utilizando-se D MSO e EG a 1,5 e 3,0 M.(AU)

The aim of this study was to evaluate isolated sheep preantral follicles (PF) after exposure and cryopreservation using glycerol (GLI), ethylene glycol (EG), propanediol (PROH) or dimethyl sulfoxide (DMSO) at 1.5 and 3.0 M. Each ovarian pair from 5 mixed breed adult sheeps was obtained at a local slaughterhouse and submited to follicular isolation. From the obtained suspension, one aliquot was immediately analysed with trypan blue. The remaining suspension was divided in 16 aliquots of 0.9 mL, suspended in (v /v) in MEM+with EG, DMSO, GLI or PROH at 1.5 or 3.0 M to the toxicity test and cryopreservation. After the end of each treatment, the follicular viability was analysed and the PF were classified as viable if not dyed or not viable if dyed with trypan blue. The analysis of the results showed that after the toxicity test and cryopreservation, using all cryoprotectants and at both concentrations, the percentage of viable PF was significandy reduced when compared to the control. At the toxicity test, when the cryoprotectants were compared at the same concentrations, the lowest percentage of viable preantral follicles was obtained when 3.0 M PRO H (38,9%) was used, being, more toxic when compared to the others cryoprotectants. After cryopreservation, significantly higher percentual of viable PF was observed when the EG and DMSO were used. In conclusion, sheep PF can be cryopreserved successfully using DMSO and EG at 1.5 and 3.0 M.(AU)

Efeito da solução á base de água de coco e do meio essencial mínimo sobre a ativação e crescimento in vitro de folículos primordiais caprinos

O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de Meio Essencial Mínimo (MEM), Solução à Base de Água de Coco (SBAC) e MEM adicionado de SBAC sobre a viabilidade, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos após o cultivo in vitro de córtex ovariano. Fragmentos de córtex foram cultivados in vitro por 1 e 5 dias em MEM, SBAC ou MEM adicionado de 5, 10, 20, 50, 80, 90 ou 95% de SBAC na presença de BSA, ITS, penicilina, estreptomicina, anfotericina, glutamina, piruvato e hipoxantina. No dia 0 e após 1 e 5 dias de cultivo, os fragmentos foram fixados para análise histológica. Os folículos foram classificados em primordiais ou em desenvolvimento, bem como em normais ou atrésicos de acordo com a sua morfologia. O diâmetro folicular foi avaliado antes e após o cultivo e a atividade mitótica das células da granulosa (CG) foi avaliada por imunolocalização do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA). Após 5 dias de cultivo, concomitante com o aumento do percentual dos folículos em desenvolvimento, o percentual de folículos primordiais foi reduzido (P<0,05) em todos os meios. A redução de folículos primordiais ocorreu com o aumento do período de cultivo de 1 para 5 dias. Após 5 dias, as maiores taxas de ativação foram observadas após cultivo em MEM e MEM adicionado de 5 e 10% de SBAC. Contudo, a adição de SBAC nas proporções de 20%, ou superior, reduziu a ativação e a viabilidade folicular após 5 dias de cultivo. Independentemente do meio, houve aumento (P<0,05) do diâmetro folicular no dia 5 em relação aos dias 0 e 1. A análise imunohistoquímica mostrou que o PCNA está geralmente ausente em folículos primordiais de córtex cultivado e não-cultivado. Contudo, após 5 dias de cultivo as células da granulosa dos folículos em desenvolvimento expressam PCNA. Em conclusão, folículos primordiais caprinos são ativados e mantêm-se viáveis após cultivo in vitro em MEM ou MEM adicionado com baixas proporções (10% ou menos) de SBAC. Entretanto, a adição de SBAC ao MEM não aumentou a viabilidade, a ativação e o crescimento de populações de folículos primordiais inclusos em fragmentos de córtex de ovários caprinos