Antimicrobial resistance and virulence gene profiles in P. multocida strains isolated from cats

Cats are often described as carriers of Pasteurella multocida in their oral microbiota. This agent is thought to cause pneumonia, conjunctivitis, rhinitis, gingivostomatitis, abscess and osteonecrosis in cats. Human infection with P. multocida has been described in several cases affecting cat owners or after cat bites. In Brazil, the cat population is approximately 21 million animals and is increasing, but there are no studies of the presence of P. multocida in the feline population or of human cases of infection associated with cats. In this study, one hundred and ninety-one healthy cats from owners and shelters in São Paulo State, Brazil, were evaluated for the presence of P. multocida in their oral cavities. Twenty animals were positive for P. multocida, and forty-one strains were selected and characterized by means of biochemical tests and PCR. The P. multocida strains were tested for capsular type, virulence genes and resistance profile. A total of 75.6% (31/41) of isolates belonged to capsular type A, and 24.4% (10/41) of the isolates were untypeable. None of the strains harboured toxA, tbpA or pfhA genes. The frequencies of the other genes tested were variable, and the data generated were used to build a dendrogram showing the relatedness of strains, which were clustered according to origin. The most common resistance profile observed was against sulfizoxazole and trimethoprim-sulphamethoxazole.(AU)

Molecular epidemiology of Listeria monocytogenes isolated from different sources in Brazil / Epidemiologia molecular de Listeria monocytogenes isoladas de diferentes fontes no Brasil

Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen that primarily affects pregnant women, neonates, the elderly and immune-compromised individuals, and it may cause abortion, septicemia, and meningitis. From the 13 capsular groups described, serotypes 4b, 1/2b and 1/2a are most closely related to human infection. For this reason, serotyping has limited value as an epidemiological tool; thus, improved discriminatory typing methods are required to enhance knowledge of L. monocytogenes contamination and infection. The aim of this study was to characterize the genetic diversity of L. monocytogenes isolates in the pork processing industry in Sao Paulo, Brazil and human infection isolates by ERICPCR and single enzyme AFLP. Serotypes 1/2c and 4b were frequent among isolates from pork and slaughterhouse/market environments, whereas serotypes 4b and 1/2a were observed among human isolates. ERIC-PCR and AFLP revealed 34 and 31 distinct profiles, respectively, which had tendencies of separation according to serogroup and isolate origin. The genetic profiles from slaughterhouse and market environments suggest the possibility of different sources of Listeria contamination in the environment, although in certain cases, continuous contamination caused by the persistence of clonal strains is also a possibility.(AU)

Listeria monocytogenes é um importante patógeno de origem alimentar que afeta principalmente grávidas, neonatos, idosos e indivíduos imunocomprometidos, e pode causar abortamento, septicemia e meningite. Dos 13 grupos capsulares descritos, os sorotipos 4b, 1/2b e 1/2a são os mais relacionados à infecção humana. Por esta razão, a sorotipagem possui valor limitado como ferramenta epidemiológica e, dessa forma, métodos mais discriminatórios são necessários para melhorar o conhecimento sobre a contaminação e a infecção por L. monocytogenes. O objetivo deste estudo foi caracterizar a diversidade genética de isolados de L. monocytogenes da indústria de processamento de carne suína noEstado de São Paulo, Brasil, e compará-los a isolados de casos de infecção humana através do ERIC-PCR e AFLP com uma única enzima. Os sorotipos 1/2c e 4b foram frequentes em carne suína e ambientes de abatedouros e mercados, enquanto os sorotipos 4b e 1/2a foram observados nos isolados de humanos. ERIC-PCR e AFLP resultaram em 34 e 31 perfis distintos, respectivamente, com uma tendência a separar de acordo com o sorogrupo e a origem do isolado. Os perfis genéticos de ambiente dos abatedouros e mercados sugerem a possibilidade de diferentes origens de contaminação por Listeria nos ambientes estudados, porém, em alguns casos, é possível que ocorra a persistência de cepas clonais causando contaminação contínua.(AU)

Molecular typing of Clostridium perfringens isolated from swine in slaughterhouses from São Paulo State, Brazil

Clostridium perfringens is an anaerobic Gram-positive bacterium known as common pathogen for humans, for domestic and wildlife animals. Although infections caused by C. perfringens type C and A in swine are well studied, just a few reports describe the genetic relationship among strains in the epidemiological chain of swine clostridioses, as well as the presence of the microorganism in the slaughterhouses. The aim of the present study was to isolate C. perfringens from feces and carcasses from swine slaughterhouses, characterize the strains in relation to the presence of enterotoxin, alpha, beta, epsilon, iota and beta-2 toxins genes, using polymerase chain reaction (PCR) and comparing strains by means of Pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Clostridium perfringens isolation frequencies in carcasses and finishing pig intestines were of 58.8% in both types of samples. According to the polymerase chain reaction assay, only alfa toxin was detected, being all isolates also negative to enterotoxin and beta2 toxin. Through PFGE technique, the strains were characterized in 35 pulsotypes. In only one pulsotype, the isolate from carcass sample was grouped with fecal isolate of the same animal, suggesting that the risk of cross-contamination was low. Despite the high prevalence of C. perfringens in swine carcasses from the slaughterhouses assessed, the risk of food poisoning to Brazilian pork consumers is low, since all strains were negative to cpe-gene, codifying enterotoxin.

Clostridium perfringens é uma bactéria Gram positiva anaeróbica, conhecida por infectar os seres humanos, animais domésticos e de vida selvagem. Apesar de as infecções causadas por C. perfringens tipo C e A em suínos serem bastante estudadas, poucos relatos descrevem a relação genética entre as linhagens envolvidas na cadeia epidemiológica da clostridiose suína, bem como a presença do microorganismo em abatedouros. O objetivo do presente estudo foi isolar C. perfringens a partir das fezes e carcaças de suínos no abatedouro, caracterizar os isolados quanto à presença dos genes codificadores de enterotoxina, toxina alfa, beta, épsilon, iota e beta 2 através da PCR e comparar os isolados através da eletroforese em campo pulsado (PFGE). A frequência de isolamento do agente em carcaças e em intestinos de suínos foi de 58,8% para ambos os tipos de amostras. De acordo com a reação em cadeia pela polimerase, somente a toxina alfa foi detectada, sendo todos os isolados negativos para toxina beta2 e enterotoxina. Através da técnica de PFGE, as cepas foram caracterizadas em 35 pulsotipos, sendo que, em apenas um caso, um isolado de amostras de carcaças foi agrupado no mesmo pulsotipo do isolado de fezes do mesmo animal, indicando que a possibilidade de contaminação cruzada no processamento da carcaça foi baixa. Apesar da alta prevalência de C. perfringens em carcaças de suínos provenientes dos abatedouros avaliados, o risco de intoxicação alimentar para os consumidores de carne suína brasileira é baixo, já que todas as cepas foram negativas para o gene cpe, codificador de enterotoxina.

Molecular typing of Clostridium perfringens isolated from swine in slaughterhouses from São Paulo State, Brazil

Clostridium perfringens is an anaerobic Gram-positive bacterium known as common pathogen for humans, for domestic and wildlife animals. Although infections caused by C. perfringens type C and A in swine are well studied, just a few reports describe the genetic relationship among strains in the epidemiological chain of swine clostridioses, as well as the presence of the microorganism in the slaughterhouses. The aim of the present study was to isolate C. perfringens from feces and carcasses from swine slaughterhouses, characterize the strains in relation to the presence of enterotoxin, alpha, beta, epsilon, iota and beta-2 toxins genes, using polymerase chain reaction (PCR) and comparing strains by means of Pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Clostridium perfringens isolation frequencies in carcasses and finishing pig intestines were of 58.8% in both types of samples. According to the polymerase chain reaction assay, only alfa toxin was detected, being all isolates also negative to enterotoxin and beta2 toxin. Through PFGE technique, the strains were characterized in 35 pulsotypes. In only one pulsotype, the isolate from carcass sample was grouped with fecal isolate of the same animal, suggesting that the risk of cross-contamination was low. Despite the high prevalence of C. perfringens in swine carcasses from the slaughterhouses assessed, the risk of food poisoning to Brazilian pork consumers is low, since all strains were negative to cpe-gene, codifying enterotoxin.

Clostridium perfringens é uma bactéria Gram positiva anaeróbica, conhecida por infectar os seres humanos, animais domésticos e de vida selvagem. Apesar de as infecções causadas por C. perfringens tipo C e A em suínos serem bastante estudadas, poucos relatos descrevem a relação genética entre as linhagens envolvidas na cadeia epidemiológica da clostridiose suína, bem como a presença do microorganismo em abatedouros. O objetivo do presente estudo foi isolar C. perfringens a partir das fezes e carcaças de suínos no abatedouro, caracterizar os isolados quanto à presença dos genes codificadores de enterotoxina, toxina alfa, beta, épsilon, iota e beta 2 através da PCR e comparar os isolados através da eletroforese em campo pulsado (PFGE). A frequência de isolamento do agente em carcaças e em intestinos de suínos foi de 58,8% para ambos os tipos de amostras. De acordo com a reação em cadeia pela polimerase, somente a toxina alfa foi detectada, sendo todos os isolados negativos para toxina beta2 e enterotoxina. Através da técnica de PFGE, as cepas foram caracterizadas em 35 pulsotipos, sendo que, em apenas um caso, um isolado de amostras de carcaças foi agrupado no mesmo pulsotipo do isolado de fezes do mesmo animal, indicando que a possibilidade de contaminação cruzada no processamento da carcaça foi baixa. Apesar da alta prevalência de C. perfringens em carcaças de suínos provenientes dos abatedouros avaliados, o risco de intoxicação alimentar para os consumidores de carne suína brasileira é baixo, já que todas as cepas foram negativas para o gene cpe, codificador de enterotoxina.

Avaliação de ferramentas para monitoria da infecção por P. multocida em suínos / Assessment of tools for monitoring infection by P. multocida in pigs

Pasteurella multocida é um importante patógeno para suínos, causando rinite atrófica progressiva, pneumonia, pleurite, e septicemia. Para implantação de estratégias de controle e prevenção desta infecção, torna-se necessário o conhecimento a respeito do perfil de disseminação do agente em condições naturais e em diferentes tipos de sistema de produção. Tendo em vista a inexistência de técnicas sorológicas padronizadas para esta finalidade na espécie suína, o presente estudo teve por objetivos avaliar em um grupo de 90 animais a influência de diferentes sítios de coleta de amostra na detecção de animais portadores de P. multocida através da PCR e comparar estes dados a detecção de anticorpos na espécie suína através de um kit de ELISA comercial registrado para detecção de anticorpos contra P. multocida em aves. Foram coletados suabes de cavidade nasal, suabes de tonsila e sangue de 90 animais em idade de abate provenientes de dois sistemas de produção de suínos. Dentre os 90 animais, 14 (15,55%) foram positivos para detecção de P. multocida em suabes nasais e nenhum foi positivo em suabe de tonsila. Através do ELISA, 25 (27,77%) animais apresentaram anticorpos contra o agente. Através da análise de comparação de proporção, houve diferença significativa em relação à metodologia de diagnóstico nos diferentes testes realizados considerando-se valor de p < 0,0001 e intervalo de confiança de 95%. Ou seja, a freqüência de positivos foi significativamente maior no teste de ELISA, seguido pela reação em cadeia pela polimerase em suabes nasais, sugerindo que a cavidade nasal é o sitio primário de colonização dos animais por este agente e que o ELISA testado pode ser facilmente adaptado para avaliação do perfil sorológico do agente na espécie suína

Pasteurella multocida is an important pathogen for pigs, causing progressive atrophic rhinitis, pneumonia, pleurisy, and septicemia. For implementation of strategies to control and prevent infections, it is necessary to know about the profile of agent spread in natural conditions and in different types of production system. Given the lack of standardized serological techniques for this purpose, this study aims to evaluate the influence of different methods and sites of sample collection in the detection of animals with P. multocida by polymerase chain reaction (PCR) and ELISA. We evaluated different pairs of primers specific for the agent and the reaction that have lower detection threshold will be used in the evaluation of the study sites. Swabs were collected from the nasal cavity, tonsil and also blood of 90 animals. Among these, 14 (15.55%) were positive for Pasteurella multocida by polymerase chain reaction (PCR), all of which were nasal swabs. There are no positive animals among the tonsil swabs. In the ELISA, 25 (27.77%) were positive, and of these, three (3.33%) were positive in both the polymerase chain reaction and the ELISA and the remaining 22 (24.44%) was positive by ELISA and negative by polymerase chain reaction. Using comparison of proportion analysis, was observed a significant differences in the methodology of diagnosis in different tests considering p-value <0.0001 and a confidence interval of 95%. Concluding, the frequency of positives was significantly higher in ELISA than by the polymerase chain reaction