Resumo
Objetivou-se determinar a concentração do inibidor tecidual de metaloprotease-1 (TIMP-1) e do ácido hialurônico (AH) em membranas amnióticas (MAs) caninas criopreservadas por diferentes períodos. Os resultados de defeitos corneais de cães reparados com MAs armazenadas por diferentes períodos também foram avaliados. Dez MAs foram utilizadas em meio modificado de Dulbecco e glicerina (1:1) a 80°C. As MAs foram criopreservadas por curto (estocadas por 2-50 dias), médio (92-210 dias), ou longo prazo (256-357 dias). A TIMP-1, e o AH foram quantificados por ELISA. Registros de 21 olhos de cães submetidos ao transplante de MA para reparar perfurações ou ulcerações corneais foram revisados. Os dados obtidos entre as avaliações das MAs das doadoras e os resultados clínicos foram comparados estatíticamente entre os períodos. Possíveis correlações entre os tempos de estocagem e com os resultados obtidos nos olhos reparados com MAs de diferentes períodos também foram avaliados (P<0,05). Os níveis do TIMP-1 foram maiores comparando-se, MAs estocadas a curto prazo com as de médio (p=0,02) e a longo prazo (p=0,0009). As concentrações de AH não diferiram entre os tempos de estocagem (p=0,18). As concentrações do TIMP-1 se correlacionaram negativamente com o tempo de estocagem (r=-0,65; p<0,0001), enquanto que as de AH não (r=-0,15; p=0,41). Defeitos reparados com MAs estocadas a curto prazo se epitelizaram mais cedo que aqueles reparados com MAs estocadas a médio (p<0,01) e longo prazo (p=0,02). Ademais, observou-se correlação entre a concentração de TIMP-1 e a epitelização corneal (r=0,62; p=0,002). A opacidade corneal foi considerada moderada em 55% dos casos. Todavia, observou-se correlação negativa entre opacidade corneal e a concetração de AH nas MAs (r=- 0,47; p=0,03). Boa visão foi observada em mais pacientes com úlceras profundas e descemetoceles que em olhos com perfuração (p=0,004). Diante dos resultados, conclui-se que a concentração da TIMP-1 de MAs caninas diminuem significativamente em um ano, enquanto que as de AH não se alteram. Defeitos corneais complicados reparados com MA criopreservadas por curto prazo cicatrizam mais cedo e tendem a serem mais transparentes, porém, resultados variando de satisfatório a ótimo são obtidos em olhos reparados com MAs preservadas a médio e longo prazo.
This study aimed to determine the concentrations of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) and hyaluronic acid (HA) in canine amniotic membranes (AMs) cryopreserved for different time points. The outcomes of complicated corneal defects of dogs repaired with AM stored for the same time points were also evaluated. Ten canine AMs were stored in Dulbeccos´s Modified Eagle Medium with glycerol (1:1) at 80°C. AMs were cryopreserved for short (stored for 2- 50 days), medium (92-210 days), or long term (256-357 days). TIMP-1 and HA were quantified by ELISA. Twenty-one dogs that had an AM transplantation to restore deep or perforating corneal wounds were selected. Data obtained between donor AM evaluations and clinical results were compared statistically between storage times and with the results obtained in the eyes repaired with AMs stored for different periods (P<0.05). TIMP-1 levels decreased in AMs stored for medium (P=0.02) and long term (P=0.0009). HA concentrations did not differ among the storage time (P=0.18). TIMP-1 concentration in AMs correlated with storage time (R=0.65, P<0.0001), while HA concentration did not (R=0.15, P= 0.41). Corneal defects repaired with AM cryopreserved for short term healed sooner than the ones repaired with the ones stored for medium (P<0.01) and long term (P=0.02). Additionally, TIMP-1 levels in AMs correlated negatively with the epithelization time (R=0.62, P=0.002). Graft opacity was severe in 55% of cases. However, the HA levels in AMs correlated negatively with the opacification score (R =0.47, P= 0.03). Good vison was observed in more patients that presented deep ulcers and descemetoceles, than in the ones with perforations (P=0.004). From our results is possible to conclude that TIMP-1 concentration in canine AMs significantly decreases over a year, while HA concentrations do not change during the same period. Our results also suggest that the concentration of TIMP-1 and HA are correlated with the epithelial healing time and the corneal transparency, respectively. Additionally, it may be assumed that complicated corneal defects repaired with AMs cryopreserved for short term healed sooner, however, satisfactory to optimal outcomes are achieved even in the eyes repaired with AMs stored for longer periods.
Resumo
Objetivou-se estudar os efeitos da administração tópica da tafluprosta a 0.0015% e da brinzolamida a 1% sobre a pressão intraocular (PIO) e o diâmetro pupilar (DP) em cães saudáveis. Dois experimentos com intervalo de 10 dias foram realizados. Onze cães foram tratados com 1 gota de tafluprosta às 8h30 e 20h30, ou brinzolamida às 8h30, 14h30 e 20h30 durante 4 dias e nos olhos contralaterais foram instilados uma única gota de solução salina e classificado como olho controle A PIO e o DP foram mensurados às 8h00, 11h00, 14h00, 17h00 e 20h00 durante dois dias (basal), quatro dias de tratamento e um de pós-tratamento. Ao final de quatro dias, a tafluprosta e a brinzolamida foram capazes de reduzir de forma significativa a PIO em 2 e 1,42 mmHg respectivamente ao período basal. Comparações entre os fármacos demostrou que, ao final dos quatro dias de tratamento, a tafluprosta apresentou redução de 0,62 mmHg em relação à brinzolamida (p>0,05). Ao final do período, o valor médio da PIO dos olhos tratados com brinzolamida reduziu 0,90 mmHg, em comparação aos olhos controle (p<0,05 ao terceiro e quarto dia). Relativamente à tafluprosta, a redução foi de 3,06 mmHg (p<0,001). Comparativamente ao período basal, observou-se redução de 0,34 mm no DP nos olhos tratados com brinzolamida e de 2,55 mm com tafluprosta. Todavia, ao final do período de tratamento, o valor médio do DP dos olhos tratados com brinzolamida reduziu 0,18 mm, frente aos 3,25 mm após instilações de tafluprosta, em comparação aos olhos controle. Comparações entre os fármacos, demonstraram que o tratamento com tafluprosta ensejou redução de 2,23 mm comparativamente ao DP dos olhos tratados com brinzolamida (p < 0,001). Conclui-se que três instilações diárias de brinzolamida 1% ou duas instilações de tafluprosta 0.0015% em cães saudáveis reduzem a PIO e o DP de forma significativa, sugerindo novos experimentos com a utilização dos fármacos em animais com glaucoma e hipertensão intraocular. Apesar de apresentar valores mais baixos, não se observou significância estatística entre tafluprosta e brinzolamida, relativamente a redução da PIO. A redução do DP induzida pela brinzolamida, pode não apresentar relevância clínica, não se recomendando que o fármaco seja prescrito para indução de miose.
This study aimed to evaluate the effects of topical administration of 0.0015% tafluprost and 1% brinzolamide on intraocular pressure (IOP) and pupil diameter (PD) in healthy dogs. Two experiments were carried out after a washout period of 10 days. Eleven dogs were treated with 1 drop of tafluprosta at 8:30 a.m. and 8:30 p.m., and brinzolamide at 8:30 a.m., 14:30 and 20.30 p.m. for 4 days. IOP and PD were measured at 8 and 11 a.m.; 2, 5, and 8 p.m for two days (baseline), 4 days of treatment, and 1 of post-treatment. Following 4 days, tafluprosta and brinzolamide were able to reduce IOP by 2 and 1.42 mmHg, respectively, compared to baseline. Comparisons between drugs showed a reduction of 0.62 mm Hg at the end of 4 days of treatment period (P > 0.05). At the end of this period, the average IOP of eyes treated with brinzolamide reduced only 0.90 mmHg, in comparision to the control eyes (P < 0,05 at 3rd and 4rd days); while tafluprosta reduced IOP by 3.6 mmHg (P < 0.001). Comparisons between baseline and treated eyes, showed reductions of PD by 0.34 (brinzolamide) 2.55 mm (tafluprosta). However, at the end of this period, comparisons with the control eyes showed that the average PD of the brinzolamide treated eyes decreased only 0.18 mm vs. 3.25 mm seen in tafluprost treated eyes. It can be concluded that for 4 days of treatment with 0.0015% tafluprosta and 1% brinzolamide were able to decrease significantly the IOP and the OS and can be indicated for the treatment of glaucoma and ocular hipertension. Although slighter values of IOP were observed in eyes treated with tafluprost, statistical significance were not seen when both drugs were compared. The decrease in PD induced by brinzolamide may not be clinically relevant, suggesting that the drug is not recommended to induce miosis in the dog.