Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Aplicações dos testes de integridade acrossômica e reação acrossômica induzida para touros da raça Nelore / Applications of acrosome integrity and induced acrosome reaction tests to Nelore bulls

O objetivo do trabalho foi avaliar o desempenho e a variabilidade de resultados das provas funcionais de integridade acrossômica (IA) e a reação acrossômica induzida (RAI) em touros jovens da raça Nelore, bem como verificar suas associações com outros parâmetros andrológicos. Foram avaliadas 16 amostras de sêmen congelado de touros jovens da raça Nelore utilizando-se esfregaços em lâminas pelo método de Azul Trypan / Giemsa. A média geral da integridade acrossômica pós-congelação foi de 85 ± 6%, com redução para 76 ± 8% após quatro horas de incubação em banho maria a 37º C com meio de TALP HEPES com albumina. Os testes de RAI tiveram diferenças acentuadas entre os touros do experimento, com média 18 ± 9 %, com números máximos e mínimos de 44% a 3%. Os resultados sugerem que ambos os indutores Heparina e Heparina + Lisofosfatidilcolina (LPC) foram eficientes e devem ser utilizados nas avaliações de RAI. Na comparação entre touros de alta a baixa RAI quanto a diversos parâmetros andrológicos, houve diferença (p<0,05) apenas para motilidade pré-congelação entre os grupos, com resultados superiores para os touros de baixa RAI (≤ 17%). Quanto as correlações dos parâmetros andrológicos e as provas funcionais da qualidade espermática (IA e RAI), somente a motilidade espermática esteve negativamente correlacionada a RAI (–0,51, p<0,05). Concluiu-se que os testes de integridade acrossômica e reação acrossômica induzida são importantes testes complementares para avaliação da qualidade funcional dos espermatozoides, uma vez que apresentam alta variabilidade entre touros e baixa associação com outros parâmetros andrológicos. Entretanto, os mesmos devem ser interpretados dentro dos limites de avaliação dos processos associados a qualidade espermática, e não como um indicador amplo e único da fertilidade ou capacidade fecundante de touros.

The aim of this study was to evaluate the performance and variability of the results of functional tests for assessing acrosome integrity and heparin-induced acrosome reaction (IAR) in young Nellore bulls, as well as to verify their associations with other andrological parameters. Smears were prepared from 16 frozen semen samples of young Nellore bulls and stained with Trypan blue/Giemsa. The overall average post-freezing acrosome integrity was 85 ± 6%, with a reduction to 76 ± 8% after 4 hours of incubation and no large variation between bulls. Marked differences between bulls of the experiment were observed for the heparin IAR tests, with an average of 18 ± 9% (range 44% to 3%). The results suggest that both heparin and heparin + lysophosphatidylcholine were efficient inducers that should be used together in IAR evaluations. Comparison of the different andrological parameters between bulls with high and low IAR showed a difference (p<0.05) only for pre-freezing motility, with superior results for low IAR bulls (≤ 17%). There were no correlations between the andrological parameters and functional tests of sperm quality (acrosome integrity and IAR). Only pre-freezing sperm motility was negatively correlated with IAR (–0.51, p<0.05). In conclusion, the acrosome integrity and IAR tests are important complementary tests to evaluate the functional quality of sperm since they exhibit high variability between bulls and low association with other andrological parameters. However, the tests should be interpreted within the limits of evaluation of the processes associated with sperm quality and not as a broad indicator of bull fertility or reproductive capacity.

Aplicações dos testes de integridade acrossômica e reação acrossômica induzida para touros da raça Nelore / Applications of acrosome integrity and induced acrosome reaction tests to Nelore bulls

O objetivo do trabalho foi avaliar o desempenho e a variabilidade de resultados das provas funcionais de integridade acrossômica (IA) e a reação acrossômica induzida (RAI) em touros jovens da raça Nelore, bem como verificar suas associações com outros parâmetros andrológicos. Foram avaliadas 16 amostras de sêmen congelado de touros jovens da raça Nelore utilizando-se esfregaços em lâminas pelo método de Azul Trypan / Giemsa. A média geral da integridade acrossômica pós-congelação foi de 85 ± 6%, com redução para 76 ± 8% após quatro horas de incubação em banho maria a 37º C com meio de TALP HEPES com albumina. Os testes de RAI tiveram diferenças acentuadas entre os touros do experimento, com média 18 ± 9 %, com números máximos e mínimos de 44% a 3%. Os resultados sugerem que ambos os indutores Heparina e Heparina + Lisofosfatidilcolina (LPC) foram eficientes e devem ser utilizados nas avaliações de RAI. Na comparação entre touros de alta a baixa RAI quanto a diversos parâmetros andrológicos, houve diferença (p<0,05) apenas para motilidade pré-congelação entre os grupos, com resultados superiores para os touros de baixa RAI (≤ 17%). Quanto as correlações dos parâmetros andrológicos e as provas funcionais da qualidade espermática (IA e RAI), somente a motilidade espermática esteve negativamente correlacionada a RAI (–0,51, p<0,05). Concluiu-se que os testes de integridade acrossômica e reação acrossômica induzida são importantes testes complementares para avaliação da qualidade funcional dos espermatozoides, uma vez que apresentam alta variabilidade entre touros e baixa associação com outros parâmetros andrológicos. Entretanto, os mesmos devem ser interpretados dentro dos limites de avaliação dos processos associados a qualidade espermática, e não como um indicador amplo e único da fertilidade ou capacidade fecundante de touros.(AU)

The aim of this study was to evaluate the performance and variability of the results of functional tests for assessing acrosome integrity and heparin-induced acrosome reaction (IAR) in young Nellore bulls, as well as to verify their associations with other andrological parameters. Smears were prepared from 16 frozen semen samples of young Nellore bulls and stained with Trypan blue/Giemsa. The overall average post-freezing acrosome integrity was 85 ± 6%, with a reduction to 76 ± 8% after 4 hours of incubation and no large variation between bulls. Marked differences between bulls of the experiment were observed for the heparin IAR tests, with an average of 18 ± 9% (range 44% to 3%). The results suggest that both heparin and heparin + lysophosphatidylcholine were efficient inducers that should be used together in IAR evaluations. Comparison of the different andrological parameters between bulls with high and low IAR showed a difference (p<0.05) only for pre-freezing motility, with superior results for low IAR bulls (≤ 17%). There were no correlations between the andrological parameters and functional tests of sperm quality (acrosome integrity and IAR). Only pre-freezing sperm motility was negatively correlated with IAR (–0.51, p<0.05). In conclusion, the acrosome integrity and IAR tests are important complementary tests to evaluate the functional quality of sperm since they exhibit high variability between bulls and low association with other andrological parameters. However, the tests should be interpreted within the limits of evaluation of the processes associated with sperm quality and not as a broad indicator of bull fertility or reproductive capacity.(AU)

Taxa de concepção com sêmen sexado ou convencional e viabilidade econômica em vacas / Girolandas Conception rate with sexed or conventional semen and economic viability in Girolando (Bos, taurus x Bos indicus) cows

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a taxa de concepção e a viabilidade econômica com uso do sêmen sexado em diferentes situações. O estudo foi conduzido na Estação Experimental Seropédica da Pesagro-RJ. Foram utilizadas 109 fêmeas Girolandas. A metodologia experimental consistiu da observação de cio, e as inseminações artificiais (IA) ocorreram segundo cada tratamento. Foram realizados dois experimentos e utilizou-se sêmen sexado ou sêmen convencional de um mesmo touro. A análise estatística foi feita por meio do teste do qui-quadrado. No primeiro experimento, foram comparadas as taxas de concepção com sêmen convencional (G1) e sêmen sexado (G2), com IAs 12 h após observação de cio. As taxas de concepção obtidas nos grupos G1 e G2 foram 53,85 e 17,86%, respectivamente (P < 0,05). No segundo experimento, foram comparadas as taxas de concepção com sêmen sexado, utilizando-se dois horários de inseminação: tradicional (G3) 12 h após a observação de cio; e atrasada (G4) 15 h após. As taxas de concepção obtidas foram 37,04 e 50%, respectivamente (P > 0,05). No Experimento 1, o custo da produção de fêmeas produzidas foi de R$52,00 (G1) e R$358,40 (G2); no Experimento 2, de R$172,80 (G3) e R$128,00 (G4). O sêmen convencional apresentou resultado superior ao sexado quando utilizado 12 h após a observação de cio e sem rigor no descongelamento. E o sêmen sexado apresentou resultados semelhantes ao convencional quando houve atraso das inseminações em três horas e mais o descongelamento em banho-maria a 35ºC.(AU)

The objective of this study was to evaluate the conception rate (CR) and economic viability with sexed semen in different situations. The experiment was carried out in the Experimental Station Seropedica of PESAGRO-RJ, on 109 Girolando (Bos taurus x Bos indicus) females. The experimental methodology consisted of estrus detection and artificial inseminations (AI) following each treatment. Two experiments were conducted using sexed or conventional semen from the same bull. The statistics analyses were performed using of Chi-square teste. In the first experiment comparisons were between CRs with sexed semen (G1) or conventional (G2), with AIs 12 h after estrus observation. The CRs in G1 and G2 were 53,85 and 17,86%, respectively (P < 0.05). In the second experiment, the comparisons were between CRs with sexed semen at two different times of AI: traditional (G3) 12 h after estrus detection; and late (G4) 15 h later. CRs results reveal 37,04 and 50,%, respectively (P > 0.05). In Experiment 1, the price of a female calf at birth was R$52,00 (in G1) and R$358,40 (G2). And in Experiment 2, R$172,80 (G3) and R$128,00 (G4). Observing criteria such as the precise manipulation of sexed semen, adequate selection of animals and the delay of 3 h in AIs, the use of sexed semen can show favorable cost benefit results in relation to female production through this biotechnique.(AU)

Taxa de concepção com sêmen sexado ou convencional e viabilidade econômica em vacas / Girolandas Conception rate with sexed or conventional semen and economic viability in Girolando (Bos, taurus x Bos indicus) cows

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a taxa de concepção e a viabilidade econômica com uso do sêmen sexado em diferentes situações. O estudo foi conduzido na Estação Experimental Seropédica da Pesagro-RJ. Foram utilizadas 109 fêmeas Girolandas. A metodologia experimental consistiu da observação de cio, e as inseminações artificiais (IA) ocorreram segundo cada tratamento. Foram realizados dois experimentos e utilizou-se sêmen sexado ou sêmen convencional de um mesmo touro. A análise estatística foi feita por meio do teste do qui-quadrado. No primeiro experimento, foram comparadas as taxas de concepção com sêmen convencional (G1) e sêmen sexado (G2), com IAs 12 h após observação de cio. As taxas de concepção obtidas nos grupos G1 e G2 foram 53,85 e 17,86%, respectivamente (P 0,05). No Experimento 1, o custo da produção de fêmeas produzidas foi de R$52,00 (G1) e R$358,40 (G2); no Experimento 2, de R$172,80 (G3) e R$128,00 (G4). O sêmen convencional apresentou resultado superior ao sexado quando utilizado 12 h após a observação de cio e sem rigor no descongelamento. E o sêmen sexado apresentou resultados semelhantes ao convencional quando houve atraso das inseminações em três horas e mais o descongelamento em banho-maria a 35ºC.

The objective of this study was to evaluate the conception rate (CR) and economic viability with sexed semen in different situations. The experiment was carried out in the Experimental Station Seropedica of PESAGRO-RJ, on 109 Girolando (Bos taurus x Bos indicus) females. The experimental methodology consisted of estrus detection and artificial inseminations (AI) following each treatment. Two experiments were conducted using sexed or conventional semen from the same bull. The statistics analyses were performed using of Chi-square teste. In the first experiment comparisons were between CRs with sexed semen (G1) or conventional (G2), with AIs 12 h after estrus observation. The CRs in G1 and G2 were 53,85 and 17,86%, respectively (P 0.05). In Experiment 1, the price of a female calf at birth was R$52,00 (in G1) and R$358,40 (G2). And in Experiment 2, R$172,80 (G3) and R$128,00 (G4). Observing criteria such as the precise manipulation of sexed semen, adequate selection of animals and the delay of 3 h in AIs, the use of sexed semen can show favorable cost benefit results in relation to female production through this biotechnique.

Endometritis diagnosis in repeat breeder cows from embryo transfer programs / Diagnóstico de endometrite em vacas repetidoras de estro provenientes de programas de transferência de embriões

Uterine flush technique was used for harvesting biological material and further bacteriological isolation to diagnose endometritis, as well as to determine if subclinical endometritis is causing reproductive failure in cows submitted to embryo transfer. Twenty repeat breeder females from embryo transfer programs, without reproductive pathology symptoms, were selected for the experiment. Samples of uterine flush were plated in aerobic and anaerobic culture systems. Identification of isolated microorganisms was performed with API Index® classification system. The technique presented satisfactory results, allowing recovery of aerobic and anaerobic bacteria recognized as being part of uterine flora in 80% of the animals. Even if the presence of bacteria level III that are not normally associated with endometritis (55%) was superior (p<0.05) to pathogenic bacteria level I (20%), bacteria that causes endometritis (level I and II) was isolated in 50% of the animals, and that might represent an important fertility decline factor.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a técnica de lavagem uterina como método para colheita de material biológico destinado a pesquisa bacteriológica, para o diagnóstico de endometrite bacteriana; e estimar se a mesma representa uma causa significativa de falha reprodutiva em animais submetidos à colheita de embriões. Para tanto, foram selecionadas 20 fêmeas repetidoras de estro oriundas de programas de transferência de embriões, na ausência de sintomatologia clínica de afecções reprodutivas. As amostras dos lavados uterinos foram semeadas em sistemas de cultivo aeróbio e anaeróbio, e o sistema API Index® de classificação bioquímica foi utilizado para a identificação das bactérias. A técnica apresentou-se satisfatória, permitindo a recuperação de bactérias da flora uterina em 80% dos animais. Apesar de a prevalência de gêneros bacterianos grau III não relacionados a endometrites (55%) ter sido superior (p<0.05) à presença de bactérias patogênicas grau I (20%), o isolamento de bactérias descritas como causadoras de endometrite (grau I e II) foi possível em 50% dos animais avaliados, o que pode representar um importante fator para o declínio de fertilidade nestes indivíduos.

Associação entre o perfil andrológico e a congelação de sêmen de touros da raça Nelore aos dois anos de idade, pré-selecionados pela classificação andrológica por pontos (CAP) / Relationship between andrologic profile and semen freezing in two-year-old Nelore bulls, pre select by breeding soundness evaluation (BSE)

Avaliaram-se as características andrológicas (n=163) e de congelação do sêmen (n=55) de touros jovens da raça Nelore e estudou-se a associação entre essas avaliações, visando à localização de marcadores para alta fertilidade e congelabilidade do sêmen. Registraram-se diferenças (P<0,05) no perfil andrológico dos animais entre os anos, com reflexo no sucesso de congelação do sêmen (P<0,05). Registraram-se 26,6 por cento e 26,1 por cento de descarte de ejaculados, respectivamente, pré e pós-congelação, em função dos aspectos físicos do sêmen. As médias gerais de motilidade espermática, vigor e viabilidade pré e pós-congelação foram de 66,4±5,7 por cento, 4,8±0,4 e 76,3±8,5 por cento e de 29,4±8,5 por cento, 4,6±0,6 e 34,5±11,1 por cento, respectivamente. A taxa de recuperação pós-congelação foi de 44,5±13,4 por cento. Registraram-se correlações (P<0,05) entre peso corporal e motilidade (0,43) e padrão de recuperação espermática pós-congelação (-0,50). Correlações significativas (P<0,05) entre o volume ejaculado e a motilidade espermática (0,28), defeitos espermáticos totais (-0,32) e padrão de recuperação espermática (-0,37) foram estimadas. A correlação entre a concentração espermática e o padrão de recuperação espermática pós-congelação foi de 0,42. Correlações significativas (P<0,05) entre o formato dos testículos e a circunferência escrotal (0,58), os defeitos espermáticos totais (0,33) e a área das glândulas vesiculares (0,43) foram observadas também.(AU)

Andrologic (n=163) and semen freezing (n=55) parameters from young Nelore bulls were evaluated for two consecutive years, as well as their associations searching for andrologic markers for high fertility and semen freezing. Differences in andrologic profiles (P<0.05) between years were registered, reflecting the success of semen freezing, even after andrologic selection. Percentages of 26.6 and 19.5 of discharged ejaculates, pre and post-freezing, respectively, were recorded, due to physical semen parameters. Overall sperm motility, vigor, and viability means were, respectively, 66.4±5.7 percent, 4.8±0.4, and 76.3±8.5 percent pre-freezing; and 29.4±8.5 percent, 4.6±0.6, and 34.5±11.1 percent post-freezing. The post-freezing recovery mean was 44.5±13.4 percent. Significant correlations (P<0.05) between body weight and pre-freezing sperm motility (0.43) and post-freezing sperm recovery standard (-0.50) were estimated. Correlations were also observed (P<0.05) between volume of ejaculate and age (0.50), sperm motility (0.28), total sperm defects (-0.32), and post-freezing sperm recovery standard (-0.37). The correlation between sperm concentration and post-freezing sperm recovery standard was 0.42. Significant correlations (P<0.05) between testes shape and scrotal circumference (0.58), and total sperm defects (0.33) and vesicular gland area (0.43) were also observed.(AU)

Avaliação ultra-sonográfica da dinâmica folicular e lútea em vacas da raça Guzerá / Ultrasonographic evaluation of follicular dynamics and luteal function in Guzerá cows

Caracterizaram-se o padrão de crescimento folicular e a função lútea ao longo do ciclo estral em vacas da raça Guzerá (n=5), multíparas, não-lactantes. Os animais utilizados apresentavam idade e condição corporal semelhantes e peso corporal médio de 518± 48.5kg. A dinâmica folicular foi monitorada diariamente a partir do dia da ovulação, durante dois ciclos consecutivos, utilizando-se um aparelho de ultra-sonografia equipado com uma probe linear retal de 5MHz. Amostras de sangue foram coletadas a cada 48h, a partir do momento da ovulação, durante os dois ciclos. O primeiro ciclo foi sincronizado pela administração de um luteolítico (cloprostenol), e o segundo foi natural. Os folículos foram identificados e mensurados; e os dados obtidos, registrados em função do dia do ciclo. O comprimento do ciclo estral foi de 19,10± 1,86 dias. Observou-se maior incidência de ciclos com três ondas de crescimento folicular (50 por cento), mas ciclos com duas (37,5 por cento) ou quatro ondas (12,5 por cento) também foram identificados. O diâmetro máximo dos folículos dominantes não ovulatórios foi de 11,60± 2,37 mm, e dos folículos ovulatórios de 14,4± 0,5 mm. A taxa de crescimento dos folículos dominantes da primeira, segunda, terceira e quarta onda foi de 1,48± 0,60; 0,81± 0,13; 1,10± 0,27 e 1,33mm/dia, respectivamente. A concentração máxima de progesterona no diestro foi de 5,50± 0,92ng/ml. A raça Guzerá apresenta características da dinâmica folicular semelhantes àquelas observadas em outras raças zebuínas, como a tendência ao maior número de ondas de crescimento associadas à menor taxa de crescimento, diâmetro máximo e persistência dos folículos dominantes das ondas intermediárias(AU)

The follicular growth pattern and luteal function during the estrous cycle were studied using multiparous, non-lactating Guzerá cows (n=5). The animals presented similar age, body score condition, and mean body weight of 518 ± 48.5kg. Follicular dynamics was daily monitored between ovulations during two consecutive estrous cycles, using an ultrasound device equipped with a linear rectal 5MHz transducer. Blood samples were collected each 48h after ovulation, during the evaluated cycles. The first cycle was synchronized using a luteolytic agent (cloprostenol), and the second estrous cycle was natural. Follicles were identified and measured, and data were individually recorded according to the day of the cycle. The mean length of the cycles was 19.10 ± 1.86 days. There was a higher incidence of cycles presenting three follicular growth waves (50 percent), but cycles presenting two (37.5 percent) or three (12.5 percent) waves were also observed. The maximum diameter of non-ovulatory follicles was 11.60± 2.37mm, and that of ovulatory follicles was 14.40± 0.50mm. The growth rate of dominant follicles during the first, second, third and fourth waves were 1.48 ± 0.60; 0.81 ± 0.13; 1.10 ± 0.27 and 1.33mm/day, respectively. Progesterone maximum concentration during diestrus was 5.50± 0.92ng/ml. These results show that the Guzera breed presents characteristics of the follicular dynamics similar to those observed in other Zebu breeds, like the trend to a higher number of follicular waves associated with lower growth rate, maximum diameter and persistence of the dominant follicles emerging during non-ovulatory waves(AU)

Concentração espermática e tempo de incubação na fecundação in vitro usando-se sêmen de touros da raça Guzerá / Sperm concentration and incubation period on in vitro fecundation using sperm of Guzera bulls

Estudou-se o efeito da concentração espermática e período de incubação e da interação dessas características sobre a fecundação in vitro (FIV) usando-se sêmen de touros Guzerá. Oócitos (n=1146) maturados in vitro foram divididos em tratamentos objetivando a FIV, em esquema fatorial 3×2×2 (três touros - A, B e C, duas concentrações espermáticas - 2 e 4×106 espermatozóides/ml e dois tempos de incubação 12 e 18 horas). Utilizaram-se espermatozóides viáveis obtidos por swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5% de CO2 e 95% de umidade, a 38,5°C. Após incubação, 50% dos oócitos foram fixados e corados para determinação das taxas de penetração, fecundação monoespermática e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da granulosa em meio CR2aa por oito dias, avaliando-se a taxa de clivagem e a produção de blastocisto. Houve maior taxa de penetração (P<0,05) na concentração de 4×106 espermatozóides/ml por 18 horas (64%), e não se observou diferença (P>0,05) entre os demais tratamentos. A taxa de poliespermia foi maior (P<0,05) na concentração espermática de 4×106, independente do tempo de incubação. Na concentração espermática mais alta, a taxa de poliespermia foi maior no tempo de incubação de 18 horas (P<0,05). O touro A apresentou menor (P<0,05) taxa de poliespermia em relação aos demais. Ainda, no touro A a taxa de clivagem foi maior (P<0,05) que no touro B, enquanto o C mostrou-se semelhante tanto ao A quanto ao B. O tempo de incubação, a concentração espermática e a interação das variáveis influenciaram as taxas de penetração e poliespermia, sem interferir na taxa de fecundação monoespermática e na produção de blastocistos.(AU)

The effects of sperm concentration, incubation period and their interaction on in vitro fertilization (IVF) using sperm of Guzera bulls were evaluated. In vitro matured oocytes (n=1146) were allotted to IVF treatments in a factorial scheme 3×2×2 - three bulls (A, B and C), two sperm concentrations (2 and 4×106 spermatozoa/ml) and two incubation periods (12 and 18h). Viable spermatozoa were obtained by swim-up. The IVF was performed using in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5% CO2 and 95% humidity, at 38.5ºC. After the incubation, 50% of oocytes were fixed and stained to determine penetration, monospermic fecundation and polyspermy rates. The remainder was co-cultured with granulosa cells in CR2 medium for eight days to evaluate cleavage and embryo production rates. The penetration rate was higher (P<0.05) for sperm concentration of 4×106 spermatozoa/ml incubated for 18 hours (64%), and no differences (P>0.05) among remainder treatments were observed. The polyspermic rate (P<0.05) was higher for higher sperm concentration and incubation period. Bull A showed the lowest (P<0.05) polyspermy rate. Bulls A and C showed higher (P<0.05) cleavage than bull B. Incubation period, sperm concentration, and interaction of these two factors influenced penetration and polyspermy rates, without any effect on monospermic fecundation rates and embryos production.(AU)

ENDOMETRITIS DIAGNOSIS IN REPEAT BREEDER COWS FROM EMBRYO TRANSFER PROGRAMS / Diagnóstico de endometrite em vacas repetidoras de estro provenientes de programas de transferência de embriões.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a técnica de lavagem uterina como método para colheita de material biológico destinado a pesquisa bacteriológica, para o diagnóstico de endometrite bacteriana; e estimar se a mesma representa uma causa significativa de falha reprodutiva em animais submetidos à colheita de embriões. Para tanto, foram selecionadas 20 fêmeas repetidoras de estro oriundas de programas de transferência de embriões, na ausência de sintomatologia clínica de afecções reprodutivas. As amostras dos lavados uterinos foram semeadas em sistemas de cultivo aeróbio e anaeróbio, e o sistema API Index® de classificação bioquímica foi utilizado para a identificação das bactérias. A técnica apresentou-se satisfatória, permitindo a recuperação de bactérias da flora uterina em 80% dos animais. Apesar de a prevalência de gêneros bacterianos grau III não relacionados a endometrites (55%) ter sido superior (p<0.05) à presença de bactérias patogênicas grau I (20%), o isolamento de bacté