Resumo
Neospora caninum, a cause of abortion and stillbirth in cattle, was studied by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR, using primers from the Nc5 region of the genomic DNA (PCR PLUS) and primers from the ITS1 region of the ribosomal DNA (PCR JB). A total of 105 fetal samples sent to the Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico from January 2006 to May 2008 were examined for evidence of N. caninum. Histological examination revealed 71.4% with non-suppurative inflammation in the heart, lung, liver, kidney, placenta, and brain. Immunohistochemistry detected infections in 8.6% of the samples, mainly in the brain, placenta, and heart. Nested-PCR JB revealed 6.7% with infections, while nested-PCR PLUS returned 20.9% positive results, mainly in brain and placenta, and in the pooled liver and heart. Kappa statistics demonstrated little agreement among the three techniques. The three methods are complementary, since they have distinct diagnostic characteristics and were combined to give a positivity rate of 24.8%.
Pesquisou-se Neospora caninum como causador de abortamento e natimortalidade em bovinos, por meio de exame histopatológico (hematoxilina-eosina), imunoistoquímica (IHQ) e nested-PCR, utilizando primers da região Nc5 do DNA genômico (PCR PLUS) e primers da região ITS1 do DNA ribossomal (PCR JB). Foram avaliadas 105 amostras de abortamento bovino entre janeiro de 2006 a maio de 2008, encaminhadas ao Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico para diagnóstico diferencial de causas infecciosas. Observou-se em 71,4% das amostras lesões histológicas (HE) caracterizadas pela presença de células inflamatórias mononucleares no coração, pulmão, fígado, rim, placenta e cérebro. A IHQ detectou 8,57% de positividade, sendo maior no cérebro, placenta e coração. A nested-PCR JB revelou 6,66% de casos positivos, enquanto que a nested-PCR PLUS apresentou maior taxa de positividade (20,95%), principalmente no cérebro, placenta e no pool fígado/coração. Houve baixo grau de concordância entre as três técnicas pelo índice kappa. A taxa de positividade para qualquer uma das técnicas (IHQ, nested-PCR PLUS e nested-PCR JB) foi de 24,8%, devendo ser consideradas conjuntamente pelo fato de possuírem características distintas e serem, portanto, complementares no diagnóstico definitivo da neosporose.
Resumo
To produce an epidemiological map of neosporosis in Brazil and identify the types of transmission of this disease, the present study evaluated the occurrence of Neospora caninum in Nelore cattle (Bos indicus) in Presidente Prudent, west region of Sao Paulo state; its vertical transmission; and the early stage in which fetuses are infected. To achieve this, serum samples from 518 slaughtered pregnant heifers and their fetuses were tested by ELISA technique and fetal brain tissues subjected to PCR. One hundred and three heifers (19.88%) had antibodies to N. caninum, as well as 38 (36.8%) of fetuses from 4 months of gestation. The conventional PCR failed to detect N. caninum DNA. These findings show that neosporosis occurs in the area studied and that it may be transmitted the transplacental route, althought N. caninum had not detected in brain tissue from non-aborted fetuses. The use of nested PCR it would be applied to increase the sensitivy of test.
Para produzir um mapa epidemiológico da neosporose no Brasil e identificar os tipos de transmissão dessa doença, o presente estudo avaliou a ocorrência de Neospora caninum em fêmea Nelore (Bos Indicus) em Presidente Prudente, região oeste do Estado de São Paulo e o risco de infecção fetal nos estágios iniciais da gestação. Para a realização deste estudo, amostras de soro de 518 novilhas prenhas abatidas e seus fetos foram testadas pela técnica de ELISA e para avaliação de transmissão vertical, tecido cerebral fetal foi submetido à reação da polimerase em cadeia (PCR). Dessas novilhas, 103 (19,88%) tinham anticorpos para N. caninum dos quais 38 (36,8%) estavam no 4 mês de gestação. Esses achados mostram que a Neosporose ocorre na área estudada e que pode ser transmitido pela via placentária, embora o N. caninum não tenha sido detectado em tecido cerebral de fetos não abortado. O uso de nested PCR poderia ser aplicado como forma de aumentar a sensibilidade do teste.
Resumo
To produce an epidemiological map of neosporosis in Brazil and identify the types of transmission of this disease, the present study evaluated the occurrence of Neospora caninum in Nelore cattle (Bos indicus) in Presidente Prudent, west region of Sao Paulo state; its vertical transmission; and the early stage in which fetuses are infected. To achieve this, serum samples from 518 slaughtered pregnant heifers and their fetuses were tested by ELISA technique and fetal brain tissues subjected to PCR. One hundred and three heifers (19.88%) had antibodies to N. caninum, as well as 38 (36.8%) of fetuses from 4 months of gestation. The conventional PCR failed to detect N. caninum DNA. These findings show that neosporosis occurs in the area studied and that it may be transmitted the transplacental route, althought N. caninum had not detected in brain tissue from non-aborted fetuses. The use of nested PCR it would be applied to increase the sensitivy of test.
Para produzir um mapa epidemiológico da neosporose no Brasil e identificar os tipos de transmissão dessa doença, o presente estudo avaliou a ocorrência de Neospora caninum em fêmea Nelore (Bos Indicus) em Presidente Prudente, região oeste do Estado de São Paulo e o risco de infecção fetal nos estágios iniciais da gestação. Para a realização deste estudo, amostras de soro de 518 novilhas prenhas abatidas e seus fetos foram testadas pela técnica de ELISA e para avaliação de transmissão vertical, tecido cerebral fetal foi submetido à reação da polimerase em cadeia (PCR). Dessas novilhas, 103 (19,88%) tinham anticorpos para N. caninum dos quais 38 (36,8%) estavam no 4 mês de gestação. Esses achados mostram que a Neosporose ocorre na área estudada e que pode ser transmitido pela via placentária, embora o N. caninum não tenha sido detectado em tecido cerebral de fetos não abortado. O uso de nested PCR poderia ser aplicado como forma de aumentar a sensibilidade do teste.