Allogenic mesenchymal stem cell intravenous infusion in reparation of mild intestinal ischemia/reperfusion injury in New Zealand rabbits / Infusão intravenosa de células tronco mesenquimais alógenas na reparação da lesão branda de isquemia/reperfusão intestinal em coelhos Nova Zelândia

The present study aimed to evaluate the efficacy of mesenchymal stem cell (MSC) infusion, derived from adipose tissue, on reduction of local and remote tissue damage caused by the event of experimental intestinal I/R in New Zealand breed rabbits. For obtaining, characterization, and cultivation of MSC derived from adipose tissue (MSC-Adp), 3 juvenile animals (four months old) were used. The cells were considered to be viable for therapy after the fourth passage (in vitro phase). For the in vivo stage, 24 young adult animals (six months old) were used, weighing approximately 3.5 kg, in which were randomly divided into two groups, called: IR treated with MSC (I2H/R5H MSC 3D; I2H/R5H MSC 7D); IR treated with PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). The animals were anesthetized and submitted to pre-retro-umbilical midline celiotomy. The extramural peri-intestinal marginal artery was located and clamped (predetermined and standardized region) with the aid of a vascular clip, promoting a 2 hour blood flow interruption. After this period, blood flow was reestablished, inhalatory anesthesia was suspended, and the animals awaken. After 5 hours of reperfusion, the treatments were performed by intravenous infusion according to the experimental groups. The animals were evaluated 72 hours and seven days after the treatment as for the macroscopic appearance (color and peristaltism) of the jejunal segment, and by histological evaluation of the ischemic segment for the presence or absence of destruction of the intestinal mucosa, edema, bleeding, dilation of lymph vessels, and presence of polymorphonuclear inflammatory cells, both in the mucosa and submucosa. The observed results revealed that the groups treated with MSC-Adp obtained smaller mucosal and submucosal lesions when compared to the groups treated with PBS. Also, MSC-Adp treated groups obtained controlled inflammatory response and higher mitotic rate, outcomes related to the therapeutic potential of MSC. Infusion of stem cells attenuated the lesions caused by intestinal I/R in both MSC groups when compared to the group treated with PBS.(AU)

O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a eficácia da infusão células tronco mesenquimais (CTM) derivada de tecido adiposo sobre diminuição das lesões teciduais locais e remotas, causadas pelo evento de I/R intestinal experimental, em coelhos da raça Nova Zelândia. Para obtenção, cultivo e caracterização das CTM provenientes de tecido adiposo (ADCTM) foram utilizados 3 animais jovens. As células foram consideradas viáveis para terapia a partir da quarta passagem (fase in vitro). Para etapa in vivo foram utilizados 24 animais, adulto-jovens, pesando aproximadamente 3,5kg, divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais, denominados IR Tratado com CTM (I2H/R5H CTM 3D; I2H/R5H CTM 7D); IR Tratado PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). Os animais foram anestesiados e submetidos à celiotomia mediana pré-retroumbilical. A artéria marginal peri-intestinal extramural foi localizada e clampeada (região predeterminada e padronizada) com auxílio de um clipe vascular, promovendo uma interrupção do fluxo sanguíneo durante 2 horas. Após esse período, o fluxo sanguíneo foi restabelecido, a anestesia inalatória suspendida e os animais despertados. Após 5 horas de reperfusão realizou-se os tratamentos por infusão endovenosa, conforme grupos experimentais. Os animais foram avaliados 72 horas e sete dias após o tratamento quanto ao aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e por meio de avaliação histológica do segmento isquemiado quanto à presença ou ausência de destruição de mucosa intestinal, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de células inflamatórias polimorfornucleares, tanto em mucosa quanto submucosa. Os resultados observados revelaram que os grupos tratados com ADCTM obtiveram menores lesões em mucosa e submucosa quando comprados aos grupos tratados com PBS. Ainda os grupos tratados com ADCTM obtiveram resposta inflamatória controlada e maior taxa mitótica, resultados relacionados ao potencial terapêutico das CTM.(AU)

Establishment of an experimental model of small intestinal ischemia and reperfusion injuries in New Zealand rabbits / Estabelecimento de modelo experimental de indução da lesão de isquemia e reperfusão de intestino delgado em coelhos Nova Zelândia

The present study aimed to establish a methodology capable to cause intestinal ischemia and reperfusion injuries, to perform clamping of the jejunal segment of the extramural peri-intestinal marginal artery branch. For this, 37, 10-week-old male New Zealand breed rabbits were used. One rabbit was used to establish the anatomic references for the procedure and was not part of the six experimental groups; the rest were allocated into six experimental groups: Sham group, negative control, subjected only to midline celiotomy; group I1H undergoing vascular occlusion for an hour; group I2H submitted to vascular occlusion for two hours; group I1H/R2H undergoing vascular occlusion for one hour followed by two hours of reperfusion; group I2H/R1H undergoing vascular occlusion for two hours, followed by reperfusion for one hour, and group I2H/R5H undergoing vascular occlusion for two hours followed by reperfusion for five hours. The rabbits were evaluated for the macroscopic aspects (color and peristalsis) of the jejunal segment, as well as the histological aspect, checking for presence or absence of mucosal destruction, edema, hemorrhaging, lymphatic vessel dilatation, and the presence of polymorphonuclear cells. It was observed that the macroscopic and histopathological lesions accentuated in larger employed ischemia and reperfusion times. Rabbits subjected to ischemia for two hours followed by reperfusion for five hours (I2H/R5H) made up the experimental group which was easily reproducible and showed moderate intestinal injury, different from the other groups.(AU)

O presente estudo objetivou estabelecer uma metodologia capaz de causar lesões de isquemia e reperfusão intestinal, realizando clipagem de um ramo de artéria marginal peri-intestinal extramural em segmento jejunal. Para tal foram utilizados 37 coelhos da raça Nova Zelândia, machos, de 10 semanas de idade, alocados em seis grupos experimentais: grupo Sham, controle negativo, submetido apenas a celiotomia mediana; grupo I1H submetido à oclusão vascular por uma hora; grupo I2H submetido a oclusão vascular por duas horas; grupo I1H/R2H submetido a oclusão vascular por uma hora, seguida de reperfusão por duas horas; grupo I2H/R1H submetido a oclusão vascular por duas horas, seguida de reperfusão por uma hora e grupo I2H/R5H submetido a oclusão vascular por duas horas seguida de reperfusão por cincos horas. Os animais foram avaliados quanto o aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e quanto ao aspecto histopatológico, verificando presença ou ausência de destruição de mucosa, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de polimorfonucleares. Observou-se que as lesões macroscópicas e histopatológicas se acentuaram nos maiores tempos de isquemia e reperfusão empregados. Os animais submetidos à isquemia durante duas horas, seguida de reperfusão por cinco horas (I2H/R5H) compuseram o grupo experimental de fácil reprodução e foram os que apresentaram uma lesão intestinal moderada, diferentes dos demais grupos.(AU)

Allogenic mesenchymal stem cell intravenous infusion in reparation of mild intestinal ischemia/reperfusion injury in New Zealand rabbits / Infusão intravenosa de células tronco mesenquimais alógenas na reparação da lesão branda de isquemia/reperfusão intestinal em coelhos Nova Zelândia

The present study aimed to evaluate the efficacy of mesenchymal stem cell (MSC) infusion, derived from adipose tissue, on reduction of local and remote tissue damage caused by the event of experimental intestinal I/R in New Zealand breed rabbits. For obtaining, characterization, and cultivation of MSC derived from adipose tissue (MSC-Adp), 3 juvenile animals (four months old) were used. The cells were considered to be viable for therapy after the fourth passage (in vitro phase). For the in vivo stage, 24 young adult animals (six months old) were used, weighing approximately 3.5 kg, in which were randomly divided into two groups, called: IR treated with MSC (I2H/R5H MSC 3D; I2H/R5H MSC 7D); IR treated with PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). The animals were anesthetized and submitted to pre-retro-umbilical midline celiotomy. The extramural peri-intestinal marginal artery was located and clamped (predetermined and standardized region) with the aid of a vascular clip, promoting a 2 hour blood flow interruption. After this period, blood flow was reestablished, inhalatory anesthesia was suspended, and the animals awaken. After 5 hours of reperfusion, the treatments were performed by intravenous infusion according to the experimental groups. The animals were evaluated 72 hours and seven days after the treatment as for the macroscopic appearance (color and peristaltism) of the jejunal segment, and by histological evaluation of the ischemic segment for the presence or absence of destruction of the intestinal mucosa, edema, bleeding, dilation of lymph vessels, and presence of polymorphonuclear inflammatory cells, both in the mucosa and submucosa. The observed results revealed that the groups treated with MSC-Adp obtained smaller mucosal and submucosal lesions when compared to the groups treated with PBS...(AU)

O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a eficácia da infusão células tronco mesenquimais (CTM) derivada de tecido adiposo sobre diminuição das lesões teciduais locais e remotas, causadas pelo evento de I/R intestinal experimental, em coelhos da raça Nova Zelândia. Para obtenção, cultivo e caracterização das CTM provenientes de tecido adiposo (ADCTM) foram utilizados 3 animais jovens. As células foram consideradas viáveis para terapia a partir da quarta passagem (fase in vitro). Para etapa in vivo foram utilizados 24 animais, adulto-jovens, pesando aproximadamente 3,5kg, divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais, denominados IR Tratado com CTM (I2H/R5H CTM 3D; I2H/R5H CTM 7D); IR Tratado PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). Os animais foram anestesiados e submetidos à celiotomia mediana pré-retroumbilical. A artéria marginal peri-intestinal extramural foi localizada e clampeada (região predeterminada e padronizada) com auxílio de um clipe vascular, promovendo uma interrupção do fluxo sanguíneo durante 2 horas. Após esse período, o fluxo sanguíneo foi restabelecido, a anestesia inalatória suspendida e os animais despertados. Após 5 horas de reperfusão realizou-se os tratamentos por infusão endovenosa, conforme grupos experimentais. Os animais foram avaliados 72 horas e sete dias após o tratamento quanto ao aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e por meio de avaliação histológica do segmento isquemiado quanto à presença ou ausência de destruição de mucosa intestinal, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de células inflamatórias polimorfornucleares, tanto em mucosa quanto submucosa. Os resultados observados revelaram que os grupos tratados com ADCTM obtiveram menores lesões em mucosa e submucosa quando comprados aos grupos tratados com PBS...(AU)

Establishment of an experimental model of small intestinal ischemia and reperfusion injuries in New Zealand rabbits / Estabelecimento de modelo experimental de indução da lesão de isquemia e reperfusão de intestino delgado em coelhos Nova Zelândia

The present study aimed to establish a methodology capable to cause intestinal ischemia and reperfusion injuries, to perform clamping of the jejunal segment of the extramural peri-intestinal marginal artery branch. For this, 37, 10-week-old male New Zealand breed rabbits were used. One rabbit was used to establish the anatomic references for the procedure and was not part of the six experimental groups; the rest were allocated into six experimental groups: Sham group, negative control, subjected only to midline celiotomy; group I1H undergoing vascular occlusion for an hour; group I2H submitted to vascular occlusion for two hours; group I1H/R2H undergoing vascular occlusion for one hour followed by two hours of reperfusion; group I2H/R1H undergoing vascular occlusion for two hours, followed by reperfusion for one hour, and group I2H/R5H undergoing vascular occlusion for two hours followed by reperfusion for five hours. The rabbits were evaluated for the macroscopic aspects (color and peristalsis) of the jejunal segment, as well as the histological aspect, checking for presence or absence of mucosal destruction, edema, hemorrhaging, lymphatic vessel dilatation, and the presence of polymorphonuclear cells. It was observed that the macroscopic and histopathological lesions accentuated in larger employed ischemia and reperfusion times. Rabbits subjected to ischemia for two hours followed by reperfusion for five hours (I2H/R5H) made up the experimental group which was easily reproducible and showed moderate intestinal injury, different from the other groups.(AU)

O presente estudo objetivou estabelecer uma metodologia capaz de causar lesões de isquemia e reperfusão intestinal, realizando clipagem de um ramo de artéria marginal peri-intestinal extramural em segmento jejunal. Para tal foram utilizados 37 coelhos da raça Nova Zelândia, machos, de 10 semanas de idade, alocados em seis grupos experimentais: grupo Sham, controle negativo, submetido apenas a celiotomia mediana; grupo I1H submetido à oclusão vascular por uma hora; grupo I2H submetido a oclusão vascular por duas horas; grupo I1H/R2H submetido a oclusão vascular por uma hora, seguida de reperfusão por duas horas; grupo I2H/R1H submetido a oclusão vascular por duas horas, seguida de reperfusão por uma hora e grupo I2H/R5H submetido a oclusão vascular por duas horas seguida de reperfusão por cincos horas. Os animais foram avaliados quanto o aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e quanto ao aspecto histopatológico, verificando presença ou ausência de destruição de mucosa, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de polimorfonucleares. Observou-se que as lesões macroscópicas e histopatológicas se acentuaram nos maiores tempos de isquemia e reperfusão empregados. Os animais submetidos à isquemia durante duas horas, seguida de reperfusão por cinco horas (I2H/R5H) compuseram o grupo experimental de fácil reprodução e foram os que apresentaram uma lesão intestinal moderada, diferentes dos demais grupos.(AU)

Allogenic mesenchymal stem cell intravenous infusion in reparation of mild intestinal ischemia/reperfusion injury in New Zealand rabbits

ABSTRACT: The present study aimed to evaluate the efficacy of mesenchymal stem cell (MSC) infusion, derived from adipose tissue, on reduction of local and remote tissue damage caused by the event of experimental intestinal I/R in New Zealand breed rabbits. For obtaining, characterization, and cultivation of MSC derived from adipose tissue (MSC-Adp), 3 juvenile animals (four months old) were used. The cells were considered to be viable for therapy after the fourth passage (in vitro phase). For the in vivo stage, 24 young adult animals (six months old) were used, weighing approximately 3.5 kg, in which were randomly divided into two groups, called: IR treated with MSC (I2H/R5H MSC 3D; I2H/R5H MSC 7D); IR treated with PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). The animals were anesthetized and submitted to pre-retro-umbilical midline celiotomy. The extramural peri-intestinal marginal artery was located and clamped (predetermined and standardized region) with the aid of a vascular clip, promoting a 2 hour blood flow interruption. After this period, blood flow was reestablished, inhalatory anesthesia was suspended, and the animals awaken. After 5 hours of reperfusion, the treatments were performed by intravenous infusion according to the experimental groups. The animals were evaluated 72 hours and seven days after the treatment as for the macroscopic appearance (color and peristaltism) of the jejunal segment, and by histological evaluation of the ischemic segment for the presence or absence of destruction of the intestinal mucosa, edema, bleeding, dilation of lymph vessels, and presence of polymorphonuclear inflammatory cells, both in the mucosa and submucosa. The observed results revealed that the groups treated with MSC-Adp obtained smaller mucosal and submucosal lesions when compared to the groups treated with PBS. Also, MSC-Adp treated groups obtained controlled inflammatory response and higher mitotic rate, outcomes related to the therapeutic potential of MSC. Infusion of stem cells attenuated the lesions caused by intestinal I/R in both MSC groups when compared to the group treated with PBS.

RESUMO: O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a eficácia da infusão células tronco mesenquimais (CTM) derivada de tecido adiposo sobre diminuição das lesões teciduais locais e remotas, causadas pelo evento de I/R intestinal experimental, em coelhos da raça Nova Zelândia. Para obtenção, cultivo e caracterização das CTM provenientes de tecido adiposo (ADCTM) foram utilizados 3 animais jovens. As células foram consideradas viáveis para terapia a partir da quarta passagem (fase in vitro). Para etapa in vivo foram utilizados 24 animais, adulto-jovens, pesando aproximadamente 3,5kg, divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais, denominados IR Tratado com CTM (I2H/R5H CTM 3D; I2H/R5H CTM 7D); IR Tratado PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). Os animais foram anestesiados e submetidos à celiotomia mediana pré-retroumbilical. A artéria marginal peri-intestinal extramural foi localizada e clampeada (região predeterminada e padronizada) com auxílio de um clipe vascular, promovendo uma interrupção do fluxo sanguíneo durante 2 horas. Após esse período, o fluxo sanguíneo foi restabelecido, a anestesia inalatória suspendida e os animais despertados. Após 5 horas de reperfusão realizou-se os tratamentos por infusão endovenosa, conforme grupos experimentais. Os animais foram avaliados 72 horas e sete dias após o tratamento quanto ao aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e por meio de avaliação histológica do segmento isquemiado quanto à presença ou ausência de destruição de mucosa intestinal, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de células inflamatórias polimorfornucleares, tanto em mucosa quanto submucosa. Os resultados observados revelaram que os grupos tratados com ADCTM obtiveram menores lesões em mucosa e submucosa quando comprados aos grupos tratados com PBS. Ainda os grupos tratados com ADCTM obtiveram resposta inflamatória controlada e maior taxa mitótica, resultados relacionados ao potencial terapêutico das CTM.

Relação espacial entre a falange distal e o estojo córneo em éguas Campolinas jovens com e sem sinais de obesidade / Spatial relationship between the distal phalanx and the hoof capsule in young Campolina mares with and without obesity

Estudos prévios têm demonstrado alterações radiográficas em cascos de equinos obesos. Os objetivos foram estudar, com avaliação radiográfica, a relação espacial entre estojo córneo e falange distal de éguas jovens da raça Campolina com e sem obesidade. Foram utilizadas 22 éguas entre três e cinco anos de idade, sendo analisadas varáveis de adiposidade e medidas radiográficas dos cascos dos membros torácicos de éguas com escore corporal de 5 a 7/9 (Grupo Controle) e de 8 a 9 (Grupo Obeso). Foram feitas comparações entre os grupos e correlacionaram-se as variáveis de adiposidade entre si, variáveis adiposidade com variáveis casco e variáveis de casco entre si. Utilizou-se o teste t de Student para variáveis paramétricas e o teste Mann-Whitney para as não-paramétricas, para as medidas de correlação, utilizou o teste de Pearson para duas amostras paramétricas e o teste de Spearman para comparações que envolvam pelo menos uma variável não paramétrica (P<0,05). Os resultados demonstraram que éguas Campolinas obesas, ainda jovens, já apresentam indícios de alteração na relação espacial entre estojo córneo e falange distal.(AU)

Previous studies have demonstrated radiographic changes in the hoof of obese horses. The objective was to study through radiographic evaluation the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx of Campolina mares with and without obesity. Twenty-two Campolina mares 3 to 5 years old were used. We analyzed adiposity variables and radiographic measurements of the hoof of both forelimbs of mares with body condition score from 5 to 7/9 (Control group) and from 8 to 9 (Obese group). Comparisons were made between groups using the Student t test for parametric variables and the Mann-Whitney test for the nonparametric ones. Pearson or Spearman tests were used to evaluate the correlation among parametric and nonparametric variables respectively (P<0.05). Evidences of changes in the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx were observed in obese Campolina young mares.(AU)

Relação espacial entre a falange distal e o estojo córneo em éguas Campolinas jovens com e sem sinais de obesidade / Spatial relationship between the distal phalanx and the hoof capsule in young Campolina mares with and without obesity

Estudos prévios têm demonstrado alterações radiográficas em cascos de equinos obesos. Os objetivos foram estudar, com avaliação radiográfica, a relação espacial entre estojo córneo e falange distal de éguas jovens da raça Campolina com e sem obesidade. Foram utilizadas 22 éguas entre três e cinco anos de idade, sendo analisadas varáveis de adiposidade e medidas radiográficas dos cascos dos membros torácicos de éguas com escore corporal de 5 a 7/9 (Grupo Controle) e de 8 a 9 (Grupo Obeso). Foram feitas comparações entre os grupos e correlacionaram-se as variáveis de adiposidade entre si, variáveis adiposidade com variáveis casco e variáveis de casco entre si. Utilizou-se o teste t de Student para variáveis paramétricas e o teste Mann-Whitney para as não-paramétricas, para as medidas de correlação, utilizou o teste de Pearson para duas amostras paramétricas e o teste de Spearman para comparações que envolvam pelo menos uma variável não paramétrica (P<0,05). Os resultados demonstraram que éguas Campolinas obesas, ainda jovens, já apresentam indícios de alteração na relação espacial entre estojo córneo e falange distal.(AU)

Previous studies have demonstrated radiographic changes in the hoof of obese horses. The objective was to study through radiographic evaluation the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx of Campolina mares with and without obesity. Twenty-two Campolina mares 3 to 5 years old were used. We analyzed adiposity variables and radiographic measurements of the hoof of both forelimbs of mares with body condition score from 5 to 7/9 (Control group) and from 8 to 9 (Obese group). Comparisons were made between groups using the Student t test for parametric variables and the Mann-Whitney test for the nonparametric ones. Pearson or Spearman tests were used to evaluate the correlation among parametric and nonparametric variables respectively (P<0.05). Evidences of changes in the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx were observed in obese Campolina young mares.(AU)

Relação espacial entre a falange distal e o estojo córneo em éguas Campolinas jovens com e sem sinais de obesidade

ABSTRACT: Previous studies have demonstrated radiographic changes in the hoof of obese horses. The objective was to study through radiographic evaluation the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx of Campolina mares with and without obesity. Twenty-two Campolina mares 3 to 5 years old were used. We analyzed adiposity variables and radiographic measurements of the hoof of both forelimbs of mares with body condition score from 5 to 7/9 (Control group) and from 8 to 9 (Obese group). Comparisons were made between groups using the Student t test for parametric variables and the Mann-Whitney test for the nonparametric ones. Pearson or Spearman tests were used to evaluate the correlation among parametric and nonparametric variables respectively (P 0.05). Evidences of changes in the spatial relationship between the hoof capsule and the distal phalanx were observed in obese Campolina young mares.

RESUMO: Estudos prévios têm demonstrado alterações radiográficas em cascos de equinos obesos. Os objetivos foram estudar, com avaliação radiográfica, a relação espacial entre estojo córneo e falange distal de éguas jovens da raça Campolina com e sem obesidade. Foram utilizadas 22 éguas entre três e cinco anos de idade, sendo analisadas varáveis de adiposidade e medidas radiográficas dos cascos dos membros torácicos de éguas com escore corporal de 5 a 7/9 (Grupo Controle) e de 8 a 9 (Grupo Obeso). Foram feitas comparações entre os grupos e correlacionaram-se as variáveis de adiposidade entre si, variáveis adiposidade com variáveis casco e variáveis de casco entre si. Utilizou-se o teste t de Student para variáveis paramétricas e o teste Mann-Whitney para as não-paramétricas, para as medidas de correlação, utilizou o teste de Pearson para duas amostras paramétricas e o teste de Spearman para comparações que envolvam pelo menos uma variável não paramétrica (P 0,05). Os resultados demonstraram que éguas Campolinas obesas, ainda jovens, já apresentam indícios de alteração na relação espacial entre estojo córneo e falange distal.