How can we improve embryo production and pregnancy outcomes of Holstein embryos produced in vitro? (12 years of practical results at a California dairy farm)

Genomic evaluations have revolutionized dairy cattle breeding, and the demand for embryos produced from very young heifers with high genetic merit has increased over time. The combination of low oocyte recovery, young age of donors, and milk production status can make the in vitro embryo production (IVP) of Holstein cattle incredibly challenging. Several factors need to be coordinated to obtain a live calf from an IVP embryo, but the quality of the oocyte at the start of the process is one of the key factors. Aspects related to oocyte quality, laboratory quality control, embryo quality and recipient selection are addressed here, based on the measures that the RuAnn Genetics Laboratory (Riverdale, California, USA) adopted in the last 12 years, with the goal of improving production of live, healthy calves from Holstein embryos. Follicular wave synchronization and stimulation with follicular stimulating hormone (FSH) is necessary to improve oocyte quality and consequently embryo production. Laboratory quality control and the use of high-quality supplies are essential to reduce variability in production and facilitate identification of other factors that might interfere with embryo production. High pregnancy rates can be achieved with good quality embryos selected at optimal time and stage of development, transferred by an experienced embryo transfer (ET) technician, to well managed recipients 7 or 8 days after estrus. Attention to detail at every step of the process is crucial to success.

How can we improve embryo production and pregnancy outcomes of Holstein embryos produced in vitro? (12 years of practical results at a California dairy farm)

Genomic evaluations have revolutionized dairy cattle breeding, and the demand for embryos produced from very young heifers with high genetic merit has increased over time. The combination of low oocyte recovery, young age of donors, and milk production status can make the in vitro embryo production (IVP) of Holstein cattle incredibly challenging. Several factors need to be coordinated to obtain a live calf from an IVP embryo, but the quality of the oocyte at the start of the process is one of the key factors. Aspects related to oocyte quality, laboratory quality control, embryo quality and recipient selection are addressed here, based on the measures that the RuAnn Genetics Laboratory (Riverdale, California, USA) adopted in the last 12 years, with the goal of improving production of live, healthy calves from Holstein embryos. Follicular wave synchronization and stimulation with follicular stimulating hormone (FSH) is necessary to improve oocyte quality and consequently embryo production. Laboratory quality control and the use of high-quality supplies are essential to reduce variability in production and facilitate identification of other factors that might interfere with embryo production. High pregnancy rates can be achieved with good quality embryos selected at optimal time and stage of development, transferred by an experienced embryo transfer (ET) technician, to well managed recipients 7 or 8 days after estrus. Attention to detail at every step of the process is crucial to success.(AU)

The role of Kisspeptin in bovine in vitro embryo production / Efeito da Kisspeptina na produção in vitro de embriões bovinos

The aim of this study was to investigate the effect of Kisspeptin (Kp) on the medium used in different stages of in vitro production of bovine embryo (IVEP), evaluating cleavage (CR) and blastocyst (BR) rates. The study was divided into three experiments that analyzed, respectively, the action of Kp on in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of bovine embryos. In experiment 1, the oocytes were matured in IVM medium and distributed into the following treatments: maturation (IVM Control, n = 102), maturation with addition of 10-7 M Kp (Kp 10-7 IVM, n = 90), and hormone-free maturation luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) with the addition of 10-7M Kp (No hormones + Kp 10-7, n = 84), following maturation to normal stages of IVEP. In experiment 2, the oocytes were fertilized in IVF medium, in the following treatments: TALP-FERT without Kp (Control IVF, n = 103) and TALP-FERT with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7 IVF, n = 119), usually following the other steps. Finally, in the third experiment, the oocytes passed through all phases and were divided into IVC in two treatments: SOF medium without Kp (Control IVC, n = 109) and SOF medium with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7, N = 106). The data were analyzed by PROC GLIMMIX of the SAS program. In experiment 1, the means of CR and BR were similar (P > 0.05) between treatments (IVM Control76.47% and 37.25%, Kp 10-7 MIV80% and 33.33%, and No hormones + Kp 10-770.24% and 30.95%, respectively). In experiment 2, the means of CR were similar for the IVF Control and Kp 10-7 IVF groups (P > 0.05), 76.70% and 86.55% respectively. But, the mean of the BR of the group Kp 10-7 IVF was 38.66%, which was higher (P 0.05) were similar between the IVC Control and Kp 10-7 IVC groups (CR 83.50% and 78.30%, and BR 26.60% and 23.60%, respectively)...

Objetivou-se com esse estudoinvestigar o efeito da Kisspeptina (Kp) nos meios base utilizados nas etapas da Produção in vitro de Embriões (PIVE) bovinos, avaliando as taxas de clivagem (TC) e blastocistos (TB). O estudo foi dividido em três experimentos, sendo respectivamente analisado em cada um a ação da Kp na maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. No experimento 1 os oócitos foram maturados em meio base MIV, distribuídos nos seguintes tratamentos: maturação (Controle MIV, n=102), maturação com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 MIV, n=90) e maturação sem hormônios LH e FSH com adição de 10-7M de Kp-10 (Sem hormônios + Kp 10-7, n=84), seguindo após a maturação para as etapas normais da PIVE. No experimento 2 os oócitos foram fecundados em meio base da FIV, nos seguintes tratamentos:TALP-FERT sem Kp (Controle FIV, n = 103) e TALP-FERT com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 FIV, n = 119), seguindo normalmente pelas outras etapas. Finalmente, no terceiro experimento os oócitos passaram por todas as fases e foram divididos no CIV em 2 tratamentos: meio SOF sem Kp (Controle CIV, n = 109) e meio SOF com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 3, n = 106). Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS. No experimento 1 as médias das TC e TB foram semelhantes (P > 0,05) entre os tratamentos Controle MIV 76,47% e 37,25%, Kp 10-7 MIV 80% e 33,33% e Sem hormônios + Kp 10- 7 70,24% e 30,95%, respectivamente. No experimento 2 as médias das TC foram semelhantes para os grupos Controle FIV e Kp 10-7 FIV (P > 0,05), sendo 76,70% e 86,55%, respectivamente. Porém, a média da TB do grupo Kp 10-7 FIV 38,66%, foi superior (P 0,05) também foram similares entre os tratamentos Controle CIV e Kp 10-7 CIV...

The role of Kisspeptin in bovine in vitro embryo production / Efeito da Kisspeptina na produção in vitro de embriões bovinos

The aim of this study was to investigate the effect of Kisspeptin (Kp) on the medium used in different stages of in vitro production of bovine embryo (IVEP), evaluating cleavage (CR) and blastocyst (BR) rates. The study was divided into three experiments that analyzed, respectively, the action of Kp on in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of bovine embryos. In experiment 1, the oocytes were matured in IVM medium and distributed into the following treatments: maturation (IVM Control, n = 102), maturation with addition of 10-7 M Kp (Kp 10-7 IVM, n = 90), and hormone-free maturation luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) with the addition of 10-7M Kp (No hormones + Kp 10-7, n = 84), following maturation to normal stages of IVEP. In experiment 2, the oocytes were fertilized in IVF medium, in the following treatments: TALP-FERT without Kp (Control IVF, n = 103) and TALP-FERT with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7 IVF, n = 119), usually following the other steps. Finally, in the third experiment, the oocytes passed through all phases and were divided into IVC in two treatments: SOF medium without Kp (Control IVC, n = 109) and SOF medium with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7, N = 106). The data were analyzed by PROC GLIMMIX of the SAS program. In experiment 1, the means of CR and BR were similar (P > 0.05) between treatments (IVM Control76.47% and 37.25%, Kp 10-7 MIV80% and 33.33%, and No hormones + Kp 10-770.24% and 30.95%, respectively). In experiment 2, the means of CR were similar for the IVF Control and Kp 10-7 IVF groups (P > 0.05), 76.70% and 86.55% respectively. But, the mean of the BR of the group Kp 10-7 IVF was 38.66%, which was higher (P < 0.05) than that of the FIV Control group, which was 31.07%. In the third experiment, the means of CR and BR (P > 0.05) were similar between the IVC Control and Kp 10-7 IVC groups (CR 83.50% and 78.30%, and BR 26.60% and 23.60%, respectively)...(AU)

Objetivou-se com esse estudoinvestigar o efeito da Kisspeptina (Kp) nos meios base utilizados nas etapas da Produção in vitro de Embriões (PIVE) bovinos, avaliando as taxas de clivagem (TC) e blastocistos (TB). O estudo foi dividido em três experimentos, sendo respectivamente analisado em cada um a ação da Kp na maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. No experimento 1 os oócitos foram maturados em meio base MIV, distribuídos nos seguintes tratamentos: maturação (Controle MIV, n=102), maturação com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 MIV, n=90) e maturação sem hormônios LH e FSH com adição de 10-7M de Kp-10 (Sem hormônios + Kp 10-7, n=84), seguindo após a maturação para as etapas normais da PIVE. No experimento 2 os oócitos foram fecundados em meio base da FIV, nos seguintes tratamentos:TALP-FERT sem Kp (Controle FIV, n = 103) e TALP-FERT com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 FIV, n = 119), seguindo normalmente pelas outras etapas. Finalmente, no terceiro experimento os oócitos passaram por todas as fases e foram divididos no CIV em 2 tratamentos: meio SOF sem Kp (Controle CIV, n = 109) e meio SOF com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 3, n = 106). Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS. No experimento 1 as médias das TC e TB foram semelhantes (P > 0,05) entre os tratamentos Controle MIV 76,47% e 37,25%, Kp 10-7 MIV 80% e 33,33% e Sem hormônios + Kp 10- 7 70,24% e 30,95%, respectivamente. No experimento 2 as médias das TC foram semelhantes para os grupos Controle FIV e Kp 10-7 FIV (P > 0,05), sendo 76,70% e 86,55%, respectivamente. Porém, a média da TB do grupo Kp 10-7 FIV 38,66%, foi superior (P < 0,05) ao grupo controle FIV 31,07%. No terceiro experimento as médias das TC e TB (P > 0,05) também foram similares entre os tratamentos Controle CIV e Kp 10-7 CIV...(AU)

Interception of Candidatus Phytoplasma solani in Brazil in apple tree propagative material imported from France / Interceptação de ‘Candidatus Phytoplasma solani’ no Brasil em material propagativo de macieira importado da França

Apple plants from France introduced in Brazil for research purposes were subjected to a phytosanitary analysis at the Plant Quarantine Laboratory of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology (Cenargen). After grafting onto healthy apple rootstock, some plants showed phytoplasma-infection symptoms. Polymerase Chain Reaction (PCR) tests yielded DNA fragments of the expected size for phytoplasmas. DNA sequencing revealed an identity of the 16S rDNA nucleotide sequence of 98-99% with Candidatus Phytoplasma solani. This phytoplasma species is responsible for losses in European apple orchards and has not been reported in Brazil. According to the Federal Legislation on Plant Protection, the plants were incinerated to avoid the introduction of this exotic pest in Brazil.

Plantas de macieira originárias da França introduzidas no Brasil para fins de pesquisa foram submetidas à análise no Laboratório de Quarentena Vegetal da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (Cenargen). Após realizar a enxertia em porta-enxertos sadios, algumas plantas apresentaram sintomas típicos de infecção por fitoplasmas. Os testes por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) obtiveram fragmentos de DNA do tamanho esperado para fitoplasmas. O sequenciamento de DNA revelou uma identidade de 98-99% da região 16 rDNA dos fitoplasmas encontrados com o fitoplasma Candidatus Phytoplasma solani. Essa espécie de fitoplasma é responsável por perdas em pomares de maçã europeus e não foi relatada no Brasil. De acordo com a Legislação Federal de Proteção de Plantas, as plantas de macieira foram incineradas para evitar a entrada dessa praga exótica no Brasil.

Interception of 'Candidatus Phytoplasma solani' in Brazil in apple tree propagative material imported from France / Interceptação de 'Candidatus Phytoplasma solani' no Brasil em material propagativo de macieira importado da França

Apple plants from France introduced in Brazil for research purposes were subjected to a phytosanitary analysis at the Plant Quarantine Laboratory of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology (Cenargen). After grafting onto healthy apple rootstock, some plants showed phytoplasma-infection symptoms. Polymerase Chain Reaction (PCR) tests yielded DNA fragments of the expected size for phytoplasmas. DNA sequencing revealed an identity of the 16S rDNA nucleotide sequence of 98-99% with 'Candidatus Phytoplasma solani'. This phytoplasma species is responsible for losses in European apple orchards and has not been reported in Brazil. According to the Federal Legislation on Plant Protection, the plants were incinerated to avoid the introduction of this exotic pest in Brazil.(AU)

Plantas de macieira originárias da França introduzidas no Brasil para fins de pesquisa foram submetidas à análise no Laboratório de Quarentena Vegetal da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (Cenargen). Após realizar a enxertia em porta-enxertos sadios, algumas plantas apresentaram sintomas típicos de infecção por fitoplasmas. Os testes por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) obtiveram fragmentos de DNA do tamanho esperado para fitoplasmas. O sequenciamento de DNA revelou uma identidade de 98-99% da região 16 rDNA dos fitoplasmas encontrados com o fitoplasma 'Candidatus Phytoplasma solani'. Essa espécie de fitoplasma é responsável por perdas em pomares de maçã europeus e não foi relatada no Brasil. De acordo com a Legislação Federal de Proteção de Plantas, as plantas de macieira foram incineradas para evitar a entrada dessa praga exótica no Brasil.(AU)

Interception of Candidatus Phytoplasma solani in Brazil in apple tree propagative material imported from France / Interceptação de ‘Candidatus Phytoplasma solani no Brasil em material propagativo de macieira importado da França

Apple plants from France introduced in Brazil for research purposes were subjected to a phytosanitary analysis at the Plant Quarantine Laboratory of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology (Cenargen). After grafting onto healthy apple rootstock, some plants showed phytoplasma-infection symptoms. Polymerase Chain Reaction (PCR) tests yielded DNA fragments of the expected size for phytoplasmas. DNA sequencing revealed an identity of the 16S rDNA nucleotide sequence of 98-99% with Candidatus Phytoplasma solani. This phytoplasma species is responsible for losses in European apple orchards and has not been reported in Brazil. According to the Federal Legislation on Plant Protection, the plants were incinerated to avoid the introduction of this exotic pest in Brazil.(AU)

Plantas de macieira originárias da França introduzidas no Brasil para fins de pesquisa foram submetidas à análise no Laboratório de Quarentena Vegetal da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (Cenargen). Após realizar a enxertia em porta-enxertos sadios, algumas plantas apresentaram sintomas típicos de infecção por fitoplasmas. Os testes por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) obtiveram fragmentos de DNA do tamanho esperado para fitoplasmas. O sequenciamento de DNA revelou uma identidade de 98-99% da região 16 rDNA dos fitoplasmas encontrados com o fitoplasma Candidatus Phytoplasma solani. Essa espécie de fitoplasma é responsável por perdas em pomares de maçã europeus e não foi relatada no Brasil. De acordo com a Legislação Federal de Proteção de Plantas, as plantas de macieira foram incineradas para evitar a entrada dessa praga exótica no Brasil.(AU)

Gonadorelin at the outset and/or end of an ovulation synchronization progesterone estradiol benzoate-based protocol in Nellore females / Gonadorelina no início e/ou no final do protocolo de sincronização da ovulação a base de progesterona e benzoato de estradiol em fêmeas Nelore

This study aimed to evaluate the effects of gonadorelin (GnRH), used both at the outset of a timed artificial insemination (TAI) protocol to synchronize follicular wave recruitment and at the end to synchronize ovulation, on the conception rate (CR) in Nellore cows. The experiment was conducted on two beef cattle farms in the Vale do Araguaia, MT. The body condition score (BCS) evaluation and ultrasound examination to determine ovarian status [follicle diameter < 10 mm, ≥ 10 mm or presence of corpus luteum (CL)] were performed at the beginning (Day 0) of the TAI protocol. Multiparous cows (n = 494) were subjected to the following protocol: Day 0 insertion of intravaginal progesterone device (P4 DIB®, MSD) previously used for 8 or 16 days and IM administration of 2.0 mg of estradiol benzoate (EB, Gonadiol®, MSD); Day 8 P4 device withdrawal, IM injection of 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG, Folligon®, MSD), 1.0 mg of estradiol cypionate (ECP®, Zoetis) and 0.265 mg of Sodium cloprostenol (PGF2α, Ciosin®, MSD); Day 10 TAI, performed by a single inseminator. Animals were randomly assigned to one of four groups: control (n = 126), GnRH D0 (n = 123), GnRH D10 (n = 123) and GnRH D0 + D10 (n = 122). Animals treated with GnRH received 50 mcg of gonadorelin (GnRH, Cystorelin®, Merial). Pregnancy was diagnosed by ultrasound 39 ± 10 days after TAI. Data were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS program (P < 0.05). The overall CR was 42.71%. Effect of treatment was not detected (P = 0.2482) on CR, which was 36.89% ± 0.19 (47/126) for the control group, 46.08% ± 0.19 (56/123) for GnRH D0, 48.30% ± 0.18 (61/123) for GnRH D10 and 38.48% ± 0.19 (47/122) for GnRH D0 + D10. An effect of farm was detected; the CR was 47.32% ± 0.13 at Farm A and was 38.24% ± 0.13 at Farm B (P = 0.0249). No effects of the interaction between farm and treatment were observed (P = 0.7662), nor of those among ovarian condition and treatment (P = 0.1225) on CR.[...](AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos da gonadorelina (GnRH) utilizada para sincronização da emergência da onda de crescimento folicular e para indução da ovulação sincronizada ou em ambos sobre a taxa de concepção (TC) de vacas da raça Nelore. O experimento foi realizado em duas fazendas no Vale do Araguaia, MT. A avaliação do escore de condição corporal (ECC) e a ultrassonografia para determinação da condição dos ovários [folículo com diâmetro < 10 mm, ≥ 10 mm ou presença de corpo lúteo (CL)] foram realizadas no início (Dia 0) do protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Vacas multíparas (n = 494) foram submetidas ao protocolo: Dia 0 inserção do dispositivo intravaginal de progesterona (P4, DIB®, MSD) utilizado previamente por oito ou 16 dias e aplicação IM de 2,0 mg de Benzoato de Estradiol (BE, Gonadiol®, MSD); Dia 8 remoção do dispositivo, aplicação IM de 300 UI de Gonadotrofina Coriônica Equina (eCG, Folligon®, MSD), de 1,0 mg de Cipionato de Estradiol (ECP®, Zoetis) e de 0,265 mg de Cloprostenol Sódico (PGF2α, Ciosin®, MSD); Dia 10 IATF, realizada por um único inseminador. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: controle (n = 126), GnRH D0 (n = 123), GnRH D10 (n = 123) e GnRH D0 + D10 (n = 122), sendo que os animais tratados com GnRH receberam 50 mcg de gonadorelina (GnRH, Cystorelin®, Merial). O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia 39 ± 10 dias após a IATF. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do programa SAS (P < 0,05). Verificou-se uma TC geral de 42,71%. Não foi detectado efeito dos tratamentos sobre a TC (P = 0,2482), que foi de 36,89% ± 0,19 (47/126) para o grupo controle, 46,08% ± 0,19 (56/123) para GnRH D0, 48,30% ± 0,18 (61/123) para GnRH D10 e de 38,48% ± 0,19 (47/122) para GnRH D0 + D10. Observou-se efeito da variável fazenda, sendo que na Fazenda A a TC foi de 47,32% ± 0,13 e na Fazenda B de 38,24% ± 0,13 (P = 0,0249).[...](AU)

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...

Cryopreservation of Prochilodus brevis semen: freezing media and thawing rates / Criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis: meios de congelação e taxas de descongelação

Prochilodus brevis is a migratory fish, an important component of its river ecosystem and an appreciated animal in northeastern cuisine. However, human activities have threatened its survival. Thus, researchers have become interested in developing genetic material storage protocols, such as seminal cryopreservation. Therefore, determination of the appropriate freezing media and thawing rate is a fundamental step toward the use of this biotechnology in the production of common curimatã and for reducing risks to the species survival. As such, the aim of the current study was to evaluate the effect of different freezing media and thawing rates on the quality of cryopreserved semen from P. brevis. For this study, males received a single dose of pituitary extract of carp 18 hours before semen collection. The semen samples were diluted in 5% glucose + 10% methyl glycol (MG), 5% glucose + 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.9% NaCl + 10% methyl glycol, and 0.9% NaCl + 10% dimethyl sulfoxide, loaded into 0.25-mL straws and frozen in liquid nitrogen vapor. The semen from each treatment was thawed at three different thawing rates: 25 C for 30 sec, 30 C for 16 sec and 40 C for 12 sec. Motility, vitality and morphology analyses were performed by computer-assisted sperm analysis (CASA). The characteristics of the fresh sperm mostly resembled those found in the literature. For the parameter...(AU)

O Prochilodus brevis é um peixe reofílico, importante componente do ecossistema fluvial e apreciado na culinária nordestina. No entanto, ações antrópicas têm ameaçado sua sobrevivência. Desta forma, surge, nos pesquisadores, o interesse no desenvolvimento de protocolos de conservação do material genético, como a criopreservação seminal. Logo, a determinação do meio de congelação e da taxa de descongelação adequados, são passos fundamentais que possibilitarão a utilização dessa biotecnologia na produção de curimatã comum, reduzindo os riscos à sua sobrevivência. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes meios de congelação e taxas de descongelação sobre a qualidade do sêmen criopreservado de P. brevis. Para isso, 18 horas antes da coleta de sêmen, os machos receberam dose única de extrato hipofisário de carpa. Cada animal foi sedado com solução à base de eugenol e o sêmen foi coletado. As amostras foram diluídas em quatro meios de congelação (5% Glicose + Metilglicol 10%; 5% Glicose + DMSO 10%; 0,9% NaCl + Metilglicol 10%; 0,9% NaCl + DMSO 10%) envasadas em palhetas de 0,25 mL e congeladas em vapor de nitrogênio líquido. O sêmen foi descongelado após sete dias em três taxas de descongelação: 25 C 30 s-1; 30 C 16 s-1; 40 C 12 s-1. Foram feitas as análises de motilidade, vitalidade e morfologia com auxílio de sistema automatizado de análise seminal...(AU)

Cryopreservation of tambaqui semen using a dry shipper and a programmed freezing machine / Criopreservação do sêmen de tambaqui utilizando dry shipper e máquina de congelação programada

Tambaqui (Colossoma macropomum) is a native freshwater fish that is of great importance for Brazilian aquaculture. Because of this importance, several techniques have been developed to improve the reproduction of this species in captivity. One of these techniques is the cryopreservation of sperm. In an effort to increase the efficiency of cryopreservation protocols, researchers have tried to determine suitable diluting solutions and freezing methods, which will provide a better post-thaw sperm quality. Thus, this study aimed to evaluate the efficiency of different diluents and freezing methods for the cryopreservation of tambaqui (C. macropomum) sperm. Samples of fresh semen were diluted in different treatments (Glucose 5% + 10% Dimethyl sulfoxide DMSO, Glucose 5% + 10% Methyl glycol MG, BTS + 10% DMSO and BTS + 10% MG) at a 1:9 dilution rate and frozen in a programmed freezing machine and a dry shipper. The semen samples were thawed and evaluated for vitality, sperm morphology and kinetics. Cryopreserved semen with DMSO and using the programmed freezing machine provided a greater percentage of motile sperm (15.44 ± 1.04%) after thawing compared to the dry shipper (3.99 ± 0.55%), regardless of the diluent. Additionally, DMSO showed better sperm velocities than MG regardless of the freezing method and the extender employed. A higher percentage of living spermatozoa was obser

O tambaqui (Colossoma macropomum) é uma espécie nativa de peixe de água doce de grande importância para aquicultura brasileira. Devido a isso, diversas técnicas têm sido desenvolvidas para aperfeiçoar a reprodução desta espécie em cativeiro, dentre elas a criopreservação de sêmen de peixe. Como uma forma de melhorar os protocolos de criopreservação, tem-se buscado utilizar soluções diluidoras e métodos de congelação adequados, proporcionando uma boa qualidade seminal pós-descongelação. Dessa forma, este estudo objetivou avaliar a eficiência de diferentes diluidores e métodos de congelação na criopreservação do sêmen de tambaqui (C. macropomum). As amostras de sêmen fresco foram diluídas em diferentes tratamentos (Glicose 5% + 10% Dimetilsufóxido DMSO; Glicose 5% + 10% Metil glicol MG; Beltsville Thawing Solution BTS + 10% DMSO e BTS + 10% MG) na proporção 1:9 e congeladas em máquina de congelação programada e em Dry shipper. As amostras seminais foram descongeladas e avaliadas para vitalidade, morfologia e cinética espermáticas. O sêmen criopreservado com DMSO utilizando a máquina de congelação programada proporcionou maiores percentuais de espermatozoides móveis (15,44 ± 1,04%) após a descongelação em relação ao Dry shipper (3,99 ± 0,55%), independente do diluente utilizado. Além disso, DMSO proporcionou as melhores velocidades espermáticas em relação ao MG, independente

Sincronização da ovulação: como mimetizar ainda mais a fisiologia da reprodução para obter melhores resultados? / Synchronization of ovulation: how to mimic the reproductive physiology for best outcomes?

Na última década, um grande número de terapias tem sido desenvolvidas para manipular o crescimento e ovulação do folículo ovariano e aumentar a taxa de concepção em inseminação artificial (IA) em bovinos. Várias estratégias têm sido propostas para melhorar a resposta a biotecnologias reprodutivas. Quando se obtém 50% de concepção em uma IA em tempo fixo (IATF), automaticamente se pergunta onde estão os outros 50%. Da mesma forma, a variação de resultados em função das raças, categorias, condição corporal, medicamentos e manejos fazem surgir mais perguntas que respostas. Este artigo discute fatores chave na manipulação do crescimento folicular ovariano e ovulação para melhorar a taxa de concepção em bovinos.

Over the last decade, a number of therapies have been developed to manipulate ovarian follicle growth and ovulation to improve conception rates for artificial insemination (AI) in cattle. Various strategies have been proposed to improve the responses to reproductive biotechnologies. When timed AI (TAI) results in 50% of conception, automatically a question is made about where are the other 50%. Variations in results depending on breed, category, body condition and drugs make rise more questions than answers. This article discusses some key points related to the manipulation of ovarian follicular growth and ovulation to improve conception rates following TAI in cattle.

Sincronização da ovulação: como mimetizar ainda mais a fisiologia da reprodução para obter melhores resultados? / Synchronization of ovulation: how to mimic the reproductive physiology for best outcomes?

Na última década, um grande número de terapias tem sido desenvolvidas para manipular o crescimento e ovulação do folículo ovariano e aumentar a taxa de concepção em inseminação artificial (IA) em bovinos. Várias estratégias têm sido propostas para melhorar a resposta a biotecnologias reprodutivas. Quando se obtém 50% de concepção em uma IA em tempo fixo (IATF), automaticamente se pergunta onde estão os outros 50%. Da mesma forma, a variação de resultados em função das raças, categorias, condição corporal, medicamentos e manejos fazem surgir mais perguntas que respostas. Este artigo discute fatores chave na manipulação do crescimento folicular ovariano e ovulação para melhorar a taxa de concepção em bovinos.(AU)

Over the last decade, a number of therapies have been developed to manipulate ovarian follicle growth and ovulation to improve conception rates for artificial insemination (AI) in cattle. Various strategies have been proposed to improve the responses to reproductive biotechnologies. When timed AI (TAI) results in 50% of conception, automatically a question is made about where are the other 50%. Variations in results depending on breed, category, body condition and drugs make rise more questions than answers. This article discusses some key points related to the manipulation of ovarian follicular growth and ovulation to improve conception rates following TAI in cattle.(AU)

Ovarian condition of Holstein dairy cows between 30 and 90 days postpartum in the microregion of Uberlândia, MG / Condição ovariana de vacas leiteiras Holandesas entre 30 e 90 dias pós-parto na microrregião de Uberaba, MG

Anestrous postpartum is a state of complete sexual inactivity without estrous manifestations and the return of ovarian activity in postpartum may be negatively affected by several factors, such as negative energy balance (NEB), loss of body condition score (BCS), season in which the calving occurs, nutritional deficiencies, dystocic calving, retained placenta, uterine infections and metabolic diseases. This study aimed to evaluate the effects of BCS and number of days in milk (DIM) on ovarian cyclicity of Holstein dairy cows. Ovarian conditions of 168 cows between 30 to 90 days in milk (DIM) were evaluated twice by ultrasonography with seven days of interval and cows were classified in four categories: ovaries with presence of small follicles (Category 1: up to 10 mm); ovaries with medium follicles (Category 2: 10 to 18 mm); ovaries with large follicles (Category 3: over 20 mm) and ovaries with presence of corpus luteum (CL) (Category 4). The cows classified in categories 1, 2 and 3 were considered in anestrous. Data were analyzed by logistic regression at Minitab (P0.05) of DIM in the percentage of cycling cows, however there was a tendency (P=0.074) that cows with greater BCS (≥ 2.75) had a higher cyclicity rate (74.44% vs. 61.54%) than cows with lower BCS. Days in milk effect was not detected in cyclicity rate in cows between 30 and 90 DIM, but there was a tendency of Holstein cows with greater body condition score to had higher cyclicity rate.

O anestro é um estado de completa inatividade sexual, sem manifestações de cio e o retorno à atividade ovariana no pós-parto pode ser afetado negativamente por diversos fatores, como o balanço energético negativo (BEN), perda de escore de condição corporal (ECC), estação do ano na qual ocorre o parto, deficiências nutricionais, ocorrência de distocia, retenção de placenta, infecções uterinas e doenças metabólicas. Objetivou-se avaliar os efeitos do ECC e donúmero de dias em lactação (DEL) sobre a ciclicidade ovariana de vacas leiteiras Holandesas. A condição ovariana de 168 vacas entre 30 e 90 dias em lactação (DEL) foi avaliada em dois exames de ultrassonografia com intervalo de sete dias, e as vacas foram classificadas em quatro categorias: ovários com presença de pequenos folículos (Categoria 1: até 10 mm); ovários com médios folículos (Categoria 2: 10 a 18 mm); ovários com grandes folículos (Categoria 3: acima de 20 mm) e ovários com presença de corpo lúteo (CL) (Categoria 4). As vacas classificadas nas B. Indústr. Anim., Nova Odessa,v.71, n.1, p.34-38, 2014 categorias 1, 2 e 3 foram consideradas em anestro. Os dados foram analisados por regressão logística usando o programa Minitab (P0,05) de DEL sobre a porcentagem de vacas ciclando (com CL), porém houve uma tendência (P=0,074) das vacas com maior ECC (≥ 2,75) apresentarem maiores taxas de ciclicidade (74,44% vs. 61,54%) do que vacas com baixo ECC. Conclui-se que os dias em lactação não afetam a taxa de ciclicidade de vacas Holandesas, porém há uma tendência das vacas com melhor condição corporal apresentarem maiores taxas de ciclicidade.

Sazonalidade da temperatura retal e da taxa de concepção de vacas Jersey leiteiras / Seasonality of rectal temperature and conception rate in Jersey dairy cows

Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o efeito da sazonalidade na temperatura retal (TR) e na taxa de concepção de vacas leiteiras mantidas em confinamento, bem como o efeito da temperatura retal (TR) sobre a taxa de concepção. Foram analisadas 333 inseminações de vacas em lactação, pertencentes a uma fazenda comercial localizada em Itaúna, MG. Os dados foram coletados de janeiro de 2008 a dezembro de 2009, considerando a data do parto, a temperatura retal no momento da inseminação artificial (IA) e o diagnóstico de gestação. O diagnóstico de gestação foi realizado 40 dias após a IA. O efeito da estação do ano na TR no momento da IA foi avaliado por análise de variância. Os efeitos da classe de TR (abaixo ou acima da média) no momento da IA e da estação do ano da IA na taxa de concepção foram analisados por regressão logística. A mé- dia de TR das vacas foi de 38,66°C. Vacas com TR acima de 38,66°C apresentaram menor taxa de concepção (32,52 vs 43,31%, P<0,05) do que as vacas com TR abaixo de 38,66°C. Não foi detectado efeito da sazonalidade sobre TR, mas houve tendência (P=0,09) da sazonalidade afetar a taxa de concepção (outono-inverno=39,91% vs. primavera-verão=30,83%). Vacas da raça Jersey com temperatura retal elevada apresentam menor taxa de concepçã.

The objective of the present study was to evaluate the effect of seasonality on the rectal temperature (RT) and conception rate (CR) of dairy cows kept in confinement, as well as the effect of rectal temperature (RT) on conception rate (CR). Three hundred thirty-three lactating cows, from a commercial farm located in Itaúna, MG, were inseminated. Data were collected from January 2008 to December 2009, based on calving date, rectal temperature at the time of artificial insemination (AI) and pregnancy diagnosis. The pregnancy diagnosis was performed 40 days after AI. The effect of season at the time of AI in the RT was evaluated by variance analysis. The effects of the RT class (RT below or above average) at the time of AI and the season of AI on conception rate were analyzed by logistic regression. The RT average for cows was 38.66°C. Cows with RT above 38.66°C showed a lower conception rate (32.52 vs. 43.31%, P<0.05) than the cows with RT below 38.66°C. There was no effect of seasonality on RT, but a tendency (P=0.09) of the seasonality affecting the conception rate (fall-winter = 39.91% vs. spring-summer = 30.83%) was detected. It was concluded that Jersey cows with high rectal temperature show lower conception rate.

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.(AU)

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.(AU)

Ovarian condition of Holstein dairy cows between 30 and 90 days postpartum in the microregion of Uberlândia, MG / Condição ovariana de vacas leiteiras Holandesas entre 30 e 90 dias pós-parto na microrregião de Uberaba, MG

Anestrous postpartum is a state of complete sexual inactivity without estrous manifestations and the return of ovarian activity in postpartum may be negatively affected by several factors, such as negative energy balance (NEB), loss of body condition score (BCS), season in which the calving occurs, nutritional deficiencies, dystocic calving, retained placenta, uterine infections and metabolic diseases. This study aimed to evaluate the effects of BCS and number of days in milk (DIM) on ovarian cyclicity of Holstein dairy cows. Ovarian conditions of 168 cows between 30 to 90 days in milk (DIM) were evaluated twice by ultrasonography with seven days of interval and cows were classified in four categories: ovaries with presence of small follicles (Category 1: up to 10 mm); ovaries with medium follicles (Category 2: 10 to 18 mm); ovaries with large follicles (Category 3: over 20 mm) and ovaries with presence of corpus luteum (CL) (Category 4). The cows classified in categories 1, 2 and 3 were considered in anestrous. Data were analyzed by logistic regression at Minitab (P<0.05). As a result 15 cows (8.93%) were in Category 1, 34 (20.24%) in Category 2, 4 (2.38%) in Category 3 and 115 (68.45%) in Category 4. There was no effect (P>0.05) of DIM in the percentage of cycling cows, however there was a tendency (P=0.074) that cows with greater BCS (≥ 2.75) had a higher cyclicity rate (74.44% vs. 61.54%) than cows with lower BCS. Days in milk effect was not detected in cyclicity rate in cows between 30 and 90 DIM, but there was a tendency of Holstein cows with greater body condition score to had higher cyclicity rate.(AU)

O anestro é um estado de completa inatividade sexual, sem manifestações de cio e o retorno à atividade ovariana no pós-parto pode ser afetado negativamente por diversos fatores, como o balanço energético negativo (BEN), perda de escore de condição corporal (ECC), estação do ano na qual ocorre o parto, deficiências nutricionais, ocorrência de distocia, retenção de placenta, infecções uterinas e doenças metabólicas. Objetivou-se avaliar os efeitos do ECC e donúmero de dias em lactação (DEL) sobre a ciclicidade ovariana de vacas leiteiras Holandesas. A condição ovariana de 168 vacas entre 30 e 90 dias em lactação (DEL) foi avaliada em dois exames de ultrassonografia com intervalo de sete dias, e as vacas foram classificadas em quatro categorias: ovários com presença de pequenos folículos (Categoria 1: até 10 mm); ovários com médios folículos (Categoria 2: 10 a 18 mm); ovários com grandes folículos (Categoria 3: acima de 20 mm) e ovários com presença de corpo lúteo (CL) (Categoria 4). As vacas classificadas nas B. Indústr. Anim., Nova Odessa,v.71, n.1, p.34-38, 2014 categorias 1, 2 e 3 foram consideradas em anestro. Os dados foram analisados por regressão logística usando o programa Minitab (P<0,05). Como resultado 15 vacas (8,93%) foram classificadas na Categoria 1, 34 (20,24%) na Categoria 2, 4 (2,38%) na Categoria 3 e 115 (68,45%) na Categoria 4. Não foi detectado efeito (P>0,05) de DEL sobre a porcentagem de vacas ciclando (com CL), porém houve uma tendência (P=0,074) das vacas com maior ECC (≥ 2,75) apresentarem maiores taxas de ciclicidade (74,44% vs. 61,54%) do que vacas com baixo ECC. Conclui-se que os dias em lactação não afetam a taxa de ciclicidade de vacas Holandesas, porém há uma tendência das vacas com melhor condição corporal apresentarem maiores taxas de ciclicidade.(AU)

Sazonalidade da temperatura retal e da taxa de concepção de vacas Jersey leiteiras / Seasonality of rectal temperature and conception rate in Jersey dairy cows

Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o efeito da sazonalidade na temperatura retal (TR) e na taxa de concepção de vacas leiteiras mantidas em confinamento, bem como o efeito da temperatura retal (TR) sobre a taxa de concepção. Foram analisadas 333 inseminações de vacas em lactação, pertencentes a uma fazenda comercial localizada em Itaúna, MG. Os dados foram coletados de janeiro de 2008 a dezembro de 2009, considerando a data do parto, a temperatura retal no momento da inseminação artificial (IA) e o diagnóstico de gestação. O diagnóstico de gestação foi realizado 40 dias após a IA. O efeito da estação do ano na TR no momento da IA foi avaliado por análise de variância. Os efeitos da classe de TR (abaixo ou acima da média) no momento da IA e da estação do ano da IA na taxa de concepção foram analisados por regressão logística. A mé- dia de TR das vacas foi de 38,66°C. Vacas com TR acima de 38,66°C apresentaram menor taxa de concepção (32,52 vs 43,31%, P<0,05) do que as vacas com TR abaixo de 38,66°C. Não foi detectado efeito da sazonalidade sobre TR, mas houve tendência (P=0,09) da sazonalidade afetar a taxa de concepção (outono-inverno=39,91% vs. primavera-verão=30,83%). Vacas da raça Jersey com temperatura retal elevada apresentam menor taxa de concepçã.(AU)

The objective of the present study was to evaluate the effect of seasonality on the rectal temperature (RT) and conception rate (CR) of dairy cows kept in confinement, as well as the effect of rectal temperature (RT) on conception rate (CR). Three hundred thirty-three lactating cows, from a commercial farm located in Itaúna, MG, were inseminated. Data were collected from January 2008 to December 2009, based on calving date, rectal temperature at the time of artificial insemination (AI) and pregnancy diagnosis. The pregnancy diagnosis was performed 40 days after AI. The effect of season at the time of AI in the RT was evaluated by variance analysis. The effects of the RT class (RT below or above average) at the time of AI and the season of AI on conception rate were analyzed by logistic regression. The RT average for cows was 38.66°C. Cows with RT above 38.66°C showed a lower conception rate (32.52 vs. 43.31%, P<0.05) than the cows with RT below 38.66°C. There was no effect of seasonality on RT, but a tendency (P=0.09) of the seasonality affecting the conception rate (fall-winter = 39.91% vs. spring-summer = 30.83%) was detected. It was concluded that Jersey cows with high rectal temperature show lower conception rate.(AU)

Método de avaliação da qualidade do sêmen criopreservado de characiformes brasileiros / Methods for evaluating the quality of cryopreserved sperm from brasilian Characiforms

A criopreservação de gametas traz inúmeras vantagens para a produção e a reprodução de diversas espécies, porém esta técnica promove danos estruturais às células que prejudicam os resultados de fertilização. Vários métodos são empregados para avaliar a conservação seminal entre elas motilidade, morfopatologias, morfometria e fertilização. O primeiro método é mais comumente utilizado, pois é uma técnica rápida de avaliar a qualidade seminal, o segundo e o terceiro permitem avaliar os danos morfológicos causados pelo processo de criopreservação, porém o último é a técnica mais segura para garantir que a metodologia de conservação gamética foi satisfatória.

The cryopreservation of gametes brings many advantages for the production and reproduction of many species, but this technique promotes structural damage to the cells that affect the results of fertilization. Various methods are employed to assess the conservation seminal including motility, morfophatology, mophorlogy and fertilization. The first method is more, commonly used because it is a rapid technique to assess sperm quality, the second and third to assess morphological damage caused by the cryopreservation process, but the latter is the safest technique to ensure that the methodology of conservation gametic was satisfactory.