Resumo
O objetivo do trabalho foi avaliar as alterações morfológicas nos segmentos do sistema genital e na glândula mamária de cadelas naturalmente infectadas por Leishmania infantum e associar os achados com a imunomarcação da carga parasitária e das células inflamatórias, bem como, com a fase do ciclo estral nesses animais. Para tanto, foram utilizadas 20 cadelas adultas naturalmente infectadas por Leishmania infantum, não castradas, não gestantes e livres de tumores no sistema genital e no tecido mamário. As cadelas foram divididas em dois grupos, sendo G1 (n=9, fase alta de progesterona,) e G2 (n=11, fase baixa de progesterona). A carga parasitária e o imunofenótipo dos leucócitos infiltrados na mama (CD3, CD4, CD8 e MCA874) foram avaliados por meio da imunohistoquímica. No sistema genital a principal alteração histológica foi infiltrado inflamatório mononuclear com distribuição predominantemente ao redor de anexos da pele, a imunomarcação da carga parasitária e de leucócitos infiltrados foi maior na vulva em relação aos outros segmentos do sistema genital. A presença de parasitas nos segmentos da genitália interna ocorreu mais os animais do grupo G1, com diferença entre os grupos para MCA 874 e linfócito T CD3 nos segmentos de corpo e corno uterino. Já no tecido mamário a principal alteração histológica observada foi inflamação crônica, mais evidente nos animais do grupo G1, porém sem diferença significativa entre os grupos. A carga parasitária e a densidade de células imunomarcadas para CD3, CD4, CD8 e MCA874 foi maior nos animais do grupo G1 (p<0,05). A correlação positiva significativa foi observada entre a carga parasitária e os macrófagos e todos os subtipos de linfócitos T. A influência dos hormônios ovarianos parece modular a resposta imune no microambiente uterino e mamário. Aparentemente o efeito imunossupressor/ imunorregulador da progesterona induzindo uma resposta imune do tipo Th2 tanto na mama quanto no trato reprodutivo, favorece uma resposta pró- parasita.
The aim of this study was to assess the morphological changes in the segments of the genital system and breast of bitches naturally infected by Leishmania infantum and correlate with parasite load and inflammatory cell, as well as with estrous phase in these animals. Therefore, 20 adults, non-spayed and nonpregnant bitches, were used, they must not have any genital system and breast neoplasm, which were naturally infected by Leishmania infantum. They were divided in to groups: G1 (n=9, high progesterone phase) and G2 (n=11, low progesterone phase). The parasite charge and immunophenotype of white cell in the breast (CD3, CD4, CD8 e MCA874) were assessed by immunochemistry. In the genital system, the main histological changes on was mononuclear inflammatory infiltrate with distribution predominantly around skin attachments, the immunostaining of the parasitic load and of infiltrated leukocytes was greater in the vulva in relation to the other segments of the genital system. The presence of amastigotes in the segments of the internal genitalia was high in the G1 group animals. there was a difference between the groups for MCA 874 and CD3 T lymphocyte in the uterine horn and body segments, the other analyzes did not show any difference. Already in breast tissue the histological main change observed was chronic inflammation, more evident in the G1 animals, although there was no statistical difference between the groups. The parasite load and positive cells for CD3, CD4, CD8 e MCA874 were higher in G1 in all variations. A significant positive correlation was observed between parasite load and macrophages and subtypes of T lymphocytes. The hormonal influence seems to modulate the immune answer in the uterine and breast microenvironment. Apparently the immunosuppressive / immunoregulatory effect of the progesterone inducing a Th2 immune answer in both the breast and the reproductive tract, favors a pro-parasite response.
Resumo
A onicogrifose é um dos principais achados clínicos em cães com Leishmaniose Visceral (LV), porém são escassas as pesquisas com enfoque na região ungueal de cães infectados. O objetivo do presente estudo foi avaliar a região ungueal de cães com LV que apresentaram ou não onicogrifose, por meio das análises histopatológica e imuno-histoquímica. O terceiro dígito dos membros torácico e pélvico foi colhido de 16 cães naturalmente infectados com Leishmania infantum, sem predileção por sexo, raça ou idade. Os animais foram divididos em dois grupos, cães com onicogrifose (GO; n=7) e sem onicogrifose (GSO; n=9). Os dígitos foram avaliados em quatro regiões (epiderme/derme dorsal, epiderme/derme ventral, matriz ungueal dorsal e matriz ungueal ventral). Todas as lesões observadas (infiltrado inflamatório mononuclear, degeneração vacuolar dos queratinócitos basais, separação dermo-epidérmica e incontinência pigmentar) estavam presentes em ambos os grupos, porém em maior intensidade nos dígitos de cães com onicrogrifose. A imunomarcação das formas amastigotas de Leishmania infantum foi observada nas diferentes áreas do dígito. Observou-se diferença estatística entre as áreas de epiderme/derme dorsal com a matriz dorsal e com a matriz ventral nos dígitos do membro pélvico e, entre a epiderme/derme dorsal com a matriz dorsal no membro torácico do grupo GO. Conclui-se que a principal alteração histopatológica da região ungueal de cães com LV é o infiltrado inflamatório mononuclear independente da presença de onicogrifose. Estes animais apresentaram a presença do parasita na região responsável pelo crescimento da unha. Esta onicopatia parece estar associada à presença do parasita e ao microambiente inflamatório local.
Onychogryphosis is among the main clinical findings in dogs with Visceral Leishmaniasis (VL). However, there are few researches focusing on the claw region of infected dogs. This aim of this study was to evaluate claw region of dogs with symptomatic CanL with and without onychogryphosis, through histopathological and immunohistochemical analyzes. The third digit of the right thoracic and pelvic limbs was collected from 16 dogs with CanL, without for sex, breed or age predilection. The dogs were divided into two groups, dogs with (GO; n = 7) and without onychogryphosis (GSO; n = 9). The digits were evaluated in four regions (dorsal epidermis / dermis, dorsal matrix / dermis, ventral matrix / dermis, ventral epidermis / dermis). All the lesions observed (mononuclear inflammatory infiltrate, basal keratinocyte vacuolation, dermoepidermal clefting and pigmentary incontinence) were presente in both groups, but more strongly in the digits of dogs with onychogryphosis. Immunohistochemistry revealed numerous amastigotes in the different areas of the digit. Statistical difference was observed between dorsal epidermis / dermis areas with dorsal matrix / dermis and ventral matrix / dermis in the digits of the pelvic limb, and between dorsal epidermis / dermis áreas with dorsal matrix / dermis of the thoracic limb in dogs with onychogryphosis. In conclusion, main histopathological alteration of the claw region of dogs with CanL was mononuclear inflammatory infiltrate in the dorsal epidermis / dermis area independently of onychogryphosis. The dogs presented high parasitic load in the region responsible for the growth of the nail. This onycopathy does not appear to be associated only with presence of the parasite, but also with local inflammatory microenvironment, which possibly contributes to onychogryphosis by release of inflammatory mediators at the site.