Resumo
O objetivo do presente estudo foi realizar um estudo morfométrico e ultrassonográfico das estruturas corpóreas de equinos da raça Brasileiro de Hipismo. Foram utilizados 15 animais adultos da raça Brasileiro de Hipismo, os mesmos foram avaliados em repouso e todos praticavam a modalidade salto. Para a avaliação morfométrica, foram fixados marcadores reflexivos com 2 cm de diâmetro em 20 regiões anatômicas no equino mantido em posição quadrupedal e estática na face lateral esquerda do equino. Os cavalos foram posicionados em solo de área plana, com os membros torácicos e pélvicos mantidos perpendiculares em local coberto protegido da luz solar, porém com boa luminosidade para que pudesse observar com maior precisão os marcadores reflexivos. Após o posicionamento dos animais, as imagens foram capturadas por meio de câmera fotográfica digital do celular iPhone 7 plus, posicionado em tripé apropriado para a câmera, a 18 metros de distância dos animais. As imagens foram avaliadas e mensuradas por meio de software específico Image J versão 1.47. Todas as imagens capturadas foram analisadas pelo mesmo avaliador. Os mesmos cavalos submetidos a avaliação morfométrica, foram encaminhados para a avaliação ultrassonográfica dos tendões flexores digital superficial e profundo. As imagens foram realizadas com uma distância de 4, 8, 12, 16, 20, 24 e 28 cm distal ao ponto distal do carpo acessório e posteriormente avaliadas. A caracterização dos indivíduos e das variáveis foram feitas utilizando-se a técnica exploratória multivariada de análise de componentes principais (ACP) e análise de agrupamento duplo pelo método não hierárquico, após padronização das variáveis (média nula e variância unitária). Preconizou-se nível de significância de p<0,05. Para tal, utilizou-se programa computacional StatSoft STATISTICA 7 (data analysis software system, TIBCO Software, Palo Alto, CA, USA). As medidas ultrassonográficas foram avaliadas e descritos pelo método de análise descritiva.
The aim of the present study was to carry out a morphometric and ultrasonographic study of the body structures of horses of the Brazilian Equestrian breed. Fifteen adult animals of the Brazilian Equestrian breed were used, they were returned at rest and all practiced the jumping modality. For the morphometric evaluation, reflective markers 2 cm in diameter were fixed in 20 non-equine anatomical regions kept in a quadruped and static position on the left lateral face of the horse. The horses were positioned on a flat ground, with perpendicularly colored thoracic and pelvic limbs in a covered place protected from sunlight, but with good light so that you can observe the reflective markers with greater precision. After positioning the animals, the images were captured using a digital camera on the iPhone 7 plus cell phone, positioned on a tripod suitable for the camera, 18 meters away from the animals. Images were evaluated and measured using specific Image J software - version 1.47. All captured images were analyzed by the same evaluator. The same horses were submitted to a morphometric assessment, and were referred for ultrasonographic assessment of the superficial and deep digital flexor tendons. The images were taken at a distance of 4, 8, 12, 16, 20, 24 and 28 cm distal to the distal point of the accessory carpus and subsequently evaluated. The characterization of requirements and dasvariables were performed using a multivariate exploratory technique of principal component analysis (PCA) and double cluster analysis by the non-hierarchical method, after standardizing the variables (null mean and unit variance). A significance level of p <0.05 was recommended. To do so, it uses the computer program StatSoft STATISTICA 7 (data analysis software system, TIBCO Software, Palo Alto, CA, USA). Ultrasonographic measurements were evaluated and approved using the descriptive analysis method.
Resumo
Devido ao interesse por parte dos criadores de cavalos no desenvolvimento de novas biotecnologias voltadas à reprodução equina, estudos estão sendo realizados em fêmeas afim de avaliar os folículos ovarianos pré-antrais por meio da biotécnica de MIOFOPA. Com o objetivo de avaliar o efeito das diferentes concentrações de GDF-9 no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais na espécie equina, foram utilizados ovários de éguas provenientes de abatedouro local (n=5) em anestro estacional. Os tecidos ovarianos foram seccionados sob condições assépticas em nove fragmentos de cada dos cinco animais (total= 45 fragmentos) sendo cada um deles fixados imediatamente em Bouin para controle não cultivado do experimento. Os outros fragmentos foram destinados ao cultivo in vitro em duas placas de 24 poços contendo meio base (MEM) mais a adição de diferentes concentrações de GDF-9 (50 ng/ml, 100 ng/ml e 200 ng/ml) em estufa a 39ºC em atmosfera a 5% de CO2 em ar por um período de dois e seis dias. Após o cultivo os fragmentos foram fixados em bouin por 24 horas e mantidos em álcool 70% até o processamento histológico. A avaliação morfológica dos folículos pré-antrais foi realizada por meio de histologia clássica. Dos 445 folículos classificados, 49% (220/445) eram folículos primordiais, 51% (225/445) encontravam-se em desenvolvimento e 60% (266/445) apresentavam-se morfologicamente normais (p<0,05). Os folículos cultivados in vitro na concentração de 200 ng/ml foi superior (63%) quando comparado as outras concentrações de GDF-9 após dois dias de cultivo (p<0,05) e os folículos que estavam em desenvolvimento cultivados até seis dias nas diferentes concentrações de GDF-9 50, 100 e 200 ng/ml (63,6%, 77,3% e 87,5% respectivamente), apresentaram desenvolvimento similar ao grupo controle MEM D6 (81,6%) (p>0,05). Em conclusão, o GDF-9 na concentração de 200 ng/ml por um período de dois dias de cultivo promove o desenvolvimento folicular, podendo ser utilizado no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais na espécie equina por até dois dias de cultivo, mas não obteve bons resultados com 6 dias de cultivo.
Due to the interest of horse breeders at developing new biotechnologies aiming the equine reproduction, studies are being conducted on females in order to assess the pre-antral follicles by biotech MIOFOPA. Aiming to evaluate the effect of different concentrations of GDF-9 in vitro pre-antral follicles culture in the equine specie, seasonal anoestrus mares ovaries from a local slaughterhouse were used (n = 5). Ovarian tissues were cut under aseptic conditions into nine fragments of five animals each (total = 45 fragments) each one being immediately fixed in Bouin, as not cultivated experiment control. Other fragments were used to in vitro culture in two 24-well plates containing basal medium (MEM) plus the addition of different concentrations of GDF-9 (50 ng / ml, 100 ng / ml and 200 ng / mL) in an oven at atmosphere of 39 ° C in 5% CO2 air for a period of two to six days. After the cultivation the fragments were fixed in Bouin solution for 24 hours and kept in 70% alcohol until histological processing. Morphological assessment of pre-antral follicles was performed by histology. Of 445 follicles classified 49% (220/445) were primordial follicles, 51% (225/445) were in development and 60% (266/445) seem to be morphologically normal (p <0.05). The follicles cultured in vitro at a concentration of 200 ng / ml were higher (63%) when compared to other concentrations of GDF-9 after two days of cultivation (p <0.05) and follicles that were in development culture up to six days in different concentrations of GDF-9 50, 100 and 200 ng / ml (63.6%, 77.3% and 87.5% respectively), presented similar development to the control group MEM D6 (81.6%) (P> 0.05). In conclusion, the GDF-9 at 200 ng / mL concentration for a period of two days of cultivation promotes promoting follicular development, and presenting high chance of being used in vitro cultivation of preantral follicles in the equine specie for up to two days of culture, but did not presented good results with at the six days cultivation.