Establishing an anesthetic protocol for refinement of intracerebral inoculation procedure

Mouse inoculation test (MIT) is a technique widely used for rabies diagnosis and must be liable to refinement due to animal welfare. The present study aims to compare five different anesthetic associations to stablish a protocol to improve the MIT procedure suitable for animal welfare and safe for a routine of viral isolation in newly weaned mice (3 weeks of age). 80 Swiss-Webster mice (Mus musculus) - 40 females and 40 males, 3-week-old, weight ranging from 11 to 14 grams ­ were used to conduct all procedures. Five anesthetic associations were tested: KX (Ketamine 100 mg/kg and Xylazine 10 mg/kg), KXA (Ketamine 80 mg/kg, Xylazine 5 mg/kg, and Acepromazine 1 mg/kg), KXT (Ketamine 80 mg/kg, Xylazine 5 mg/kg, and Tramadol 5 mg/kg), KXAT (Ketamine 100 mg/kg, Xylazine 10 mg/kg, Acepromazine 2 mg/kg and Tramadol 5 mg/kg) and ATI (Acepromazine 1 mg/kg + Tramadol 5 mg/kg + Isoflurane 5% - 0.5 L/min for induction and 2.5% - 0.5L/min for maintenance). Injectable anesthesia was administered intraperitoneally. We monitored the respiratory rate and body temperature. Response to anesthesia was evaluated according to the induction, surgical anesthesia, and recovery periods. The KXAT and ATI protocols induced surgical anesthesia, with the ATI protocol being the most appropriate and safe to perform the MIT procedure with 100% efficiency, absence of mortality, and rapid recovery of respiratory rate and temperature in the period after the procedure.

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento (AU)

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate (AU)