Resumo
Objetivou-se realizar um estudo etio-epidemiológico da mastite em vacas na bacia leiteira do estado Piauí e avaliar o perfil de resistência bacteriana a antimicrobianos e a atividade antimicrobiana e moduladora dos extratos etanólicos de Cnidoscolus urens (L.) Arthur. Inicialmente, realizou-se o teste do California Mastitis Test (CMT) em 321 amostras de leite provenientes de 170 vacas de 17 fazendas leiteiras. As amostras positivas nos escores com duas (++) ou três (+++) cruzes foram coletadas e cultivadas. Para a identificação das espécies bacterianas, empregou-se a técnica de Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF MS). A resistência aos antimicrobianos foi avaliada na técnica de disco-difusão seguida pela pesquisa dos genes blaZ, tetL, tetM, vanA e vanB para todos os isolados bacterianos e os genes mecA e mecC para Staphylococcus spp. por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Neste estudo, 57,63% das amostras positivas no CMT (185/321) também foram positivas no exame microbiológico com 59,45% (110/185) para o gênero Staphylococcus, 38,9% (72/185) para bactérias emergentes e 1,62% (3/185) para o gênero Corynebacterium. Staphylococcus aureus (68,1%; 75/110) foi a espécie mais prevalente entre os Staphylococcus spp. e Enterococcus faecalis (26,3%; 19/72) dentre bactérias emergentes. Quanto ao perfil de resistência fenotípico, a maior frequência foi de 75,2% (137/182) para os isolados resistentes à penicilina e menor frequência de 15,3% (28/182) para vancomicina. O gene blaZ foi detectado em 47,2% (86/182) dos isolados, seguido de 29,1% (53/182) para o gene tetM e 24,7% (45/182) para tetL, os genes mecA e vanB em 0,5% (1/182) cada. A atividade antimicrobiana e o teste de modulação dos extratos de Cnidoscolus urens foi realizado empregando a técnica de microdiluição em caldo. A concentração inibitória mínima para os extratos etanólicos das folhas, caules e raízes de Cnidoscolus urens obtidos na concentração inibitória mínima foi 1024 g/mL para todos os isolados. O extrato das folhas apresentou melhor efeito modulador para gentamicina com destaque na redução da concentração inibitória mínima para Escherichia coli (128 g/mL para 4 g/mL), Lactococcus garviae (128 g/mL para 4 g/mL) e Staphylococcus sciuri (128 g/mL para 4 g/mL) e eritromicina com redução de 64 g/mL para 2 g/mL nas cepas de Lactococcus garviae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Streptococcus agalactiae. Os resultados permitem concluir que bactérias multirresistentes e com potencial zoonótico, além de bactérias emergentes ocorrem na bacia leiteira do estado do Piauí, além desta ser a primeira ocorrência do gene vanB em um isolado bacteriano na mastite bovina no Brasil, sendo isto um alerta para saúde pública. Ainda, que o extrato etanólico das folhas de Cnidoscolus urens apresenta importante efeito modulador na resistência em bactérias multirresistentes da mastite bovina para a gentamicina e eritromicina.
This research aimed to perform an etho-epidemiological study of bovine mastitis in the dairy region of Piauí state, to evaluate the bacterial antimicrobial resistance profile, and the antimicrobial and modulating ability of the ethanolic extracts of Cnidoscolus urens (L.) Arthur. Initially the Californian Mastitis test was performed in 312 milk samples from 170 cows of 17 dairy farms. Positive samples with scores of two (++) or three (+++) crosses were collected and cultivated. Bacterium species were identified by employment of the Matrix Associated Laser Desorption-Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF MS) technique. Antimicrobial resistance was evaluated by disk-diffusion technique followed by the search of the blaZ, tetL, tetM, vanA, and vanB genes in all isolated bacteria, and the mecA and mecC genes in Staphylococcus spp. by Polymerase Chain Reaction (PCR). In this study 57.63% of the positive samples in CMT (185/321) were also positive in the microbiological examination, with 59.5% (110/185) for the Staphylococcus genus, 38.9% (72/185) of emerging bacteria, and 1.6% (3/185) for the Corynebacterium genus. Staphylococcus aureus was the most prevalent species among the Staphylococcus spp. (68.1%; 75/110), and Enterococcus faecalis the most prevalent among the emerging bacteria (26.3%; 19/72). Regarding the phenotypical resistance profile, the highest frequency observed was of 75.2% (137/182) for the penicillin resistant isolates and the lowest frequency of 15.3% (28/182) for vancomycin resistant isolates. The blaZ was detected in 47.2% (86/182) of the isolates, followed by 29.1% (53/182) for tetM gene, 24.7% (45/182) for the tetL gene, and 0.5% (1/182) for both the genes mecA and vanB. The antimicrobial activity and extract modulation testo of Cnidoscolus urens was performed by employment of the microdilution in broth. The minimal inhibitory concentration (MIC) for the ethanolic extracts of leaves, stalk and roots of Cnidoscolus urens obtained was >1024 g/mL for all isolates. The leaf extract presented better modulation effect for gentamicin, with highlights to its effect in reducing the minimal inhibitory concentration for Escherichia coli (128 g/mL to 4 g/mL), Lactococcus garviae (128 g/mL to 4 g/mL) and Staphylococcus sciuri (128 g/mL to 4 g/mL), and erythromycin with a reduticon of 64 g/mL to 2 g/mL in strains of Lactococcus garviae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, and Streptococcus agalactiae. These results allow to conclude that multi-resistant bacteria with zoonotic potential and emerging bacteria occur in the Dairy region of the Piauí state. This is the first occurrence of the vanB gene in a bacterial isolate from bovine mastitis in Brazil, this presenting an alarm for public health. Also the ethanolic extract of leaves from Cnidoscolus urens has an important modulating effect in resistance of multi-resistant bacteria from bovine mastitis in the antimicrobials gentamicin and erythromycin.