Resumo
O presente estudo teve como objetivo descrever o perfil proteico do embrião equino e do fluido uterino durante a fase inicial do reconhecimento materno da gestação. Foram utilizadas 10 éguas, sem anormalidades uterinas, de 5 a 8 anos de idade. O acompanhamento folicular diário foi realizado até a detecção de um folículo (35 mm) para indução da ovulação, o dia seguinte realizava a inseminação artificial e posteriormente o D0 sendo o dia da ovulação da égua. O líquido uterino foi colhido, usando tampão vaginal comercial de humanos nos dias 7 (D7), 10 (D10) e 12 (D12) de gestação. Nos mesmos períodos, após a retirada do tampão vaginal, os embriões foram colhidos por fluxo retrógrado utilizando-se tampão fosfato-salina pH 7,2. O processamento do líquido uterino foi de centrifugação e dos embriões foram sonicação e centrifugação para proteômica. A concentração de proteína total foi determinada e uma alíquota (50 µg) foi digerida in solution com tripsina, seguida da análise por espectrometria de massas. Após a análise estatística multivariada, foram identificadas 171 proteínas, sendo 29 no embrião e 142 no líquido uterino. Foram encontradas 15 proteínas mais abundantes nos embriões, sendo 10 no D10 e 5 no D12. Já no líquido uterino, 6 proteínas foram mais abundantes no D7, 3 no D10 e 6 no D12. As principais funções moleculares foram atividade catalítica e de ligação e os processos biológicos mais significativos foram o processo celular e metabólico. Este estudo descreveu proteínas que foram abundantes no fluído do endométrio e no embrião equino, fornecendo indicações sobre a nutrição e metabolismo embrionários e fatores pré-implantação no período de reconhecimento materno da gestação.
The aim of this study was to describe the protein profile of the equine embryo and uterine fluid, during the maternal recognition of pregnancy. Ten mares from 5 to 8 years of age, without uterine abnormalities were used. Daily follicular monitoring was performed until the detection of the preovulatory follicle (35 mm) to induce ovulation, the next day performed artificial insemination and then D0 was the mare's ovulation day. The uterine fluid was collected using commercial human vaginal tampon at 7 (D7), 10 (D10) and 12 (D12) of the gestation. In the same moments, after withdraw vaginal tampon, the embryos were collected by retrograde flushing using phosphate-saline buffer pH 7.2. The processing of the uterine fluid was centrifugation and the embryos were sonicated and centrifuged for proteomics. The total protein concentration was determined and an aliquot (50 µg) was digested in solution with trypsin, followed by analysis by mass spectrometry. After data analysis by multivariate statistical, 171 proteins were identified, 29 in the embryo and 142 in the uterine fluid. Fifteen abudant proteins were found in the embryos, 10 proteins in the D10 and 5 in the D12. In the uterine fluid, 6 proteins were more abundant in the D7, 3 in the D10 and 6 in the D12. The main molecular functions were catalytic and binding activity and the most significant biological processes were the cellular and metabolic processes. This study described proteins that were abundants in the uterine fluid and the equine embryo, providing indications about the embryonary nutrition, metabolism, and pre-implantation factors in the period of maternal recognition of pregnancy.
Resumo
Os fatores de crescimento fibroblásticos (FGFs) participam da diferenciação celular, da angiogênese e do desenvolvimento do corpo lúteo (CL). O FGF atua em conjunto com a glicoproteína sulfato de heparina (HSPG) para ativar seu receptor (FGFR) e induzir diversas respostas celulares. O presente estudo teve por objetivo descrever a expressão gênica de FGF 2 e 7 no tecido luteínico durante o diestro de éguas, e investigar o efeito do tratamento com diferentes doses de prostaglandina (PGF 2) sobre sua expressão. Para este estudo, foram utilizadas 18 éguas. O estudo foi dividido em dois grupos experimentais conforme a fase de desenvolvimento luteínica, D2 para a fase de luteogênese e D8 fase de manutenção do CL. As éguas foram distribuídas em três grupos tratamentos (n=3 éguas/grupo) de acordo com o tratamento a ser realizado: grupo controle (solução salina), grupo PGF 1 (aplicação de 1 mg de dinoprost trometamina) e grupo PGF 10 (aplicação de 10 mg de dinoprost trometamina). Seis horas após a aplicação de PGF 2, foram coletados fragmentos teciduais de CL por biópsia guiada por ultrassonografia transvaginal, para a quantificação gênica de FGF por RT-qPCR. Não foi encontrada diferença estatística na expressão dos fatores após o tratamento com PGF 2, contudo, os níveis de expressão de FGF 2 foi significativamente maior no grupo tratamento controle D2 em relação ao grupo controle do D8 (P=0,01), sugerindo que são ativados na angiogênese, mas que na fase de manutenção estes níveis diminuem para ação de outros fatores. Conclui-se que o RNAm de FGF 2 e 7 foram expressos no tecido luteínico na fase de luteogênese e de manutenção participando na sinalização celular e formação CL.
The fibroblast growth factors (FGFs) has a participation on the cell differentiation, angiogenesis and corpus luteum (CL) development. The FGF acts in conjunction with the glycoprotein heparin sulfate (HSPG) to activate its receptor (FGFR) and induce various cellular responses. Thinking on it, this study aimed to describe the gene expression of FGF 2 and 7 in the luteal tissue during the mares diestrus, and investigate the effect of the treatment with different doses of prostaglandin (PGF 2a) on its expression. For this study, 18 mares were used. The study was divided into two stages according to the development of luteal phase: D2 to luteogenesis and D8 to CL maintenance phase. The mares were divided into three treatment groups (n= 3 mares/group) according to the treatment to be performed: control group (saline solution), group PGF 1 (1 mg of dinoprost tromethamine) and group PGF 10 (10 mg of dinoprost tromethamine). Six hours after PGF 2a injection, CL tissue samples were collected by biopsy guided by transvaginal ultrasound, for the quantitation of the FGF gene expression by RT-qPCR. There was no statistical difference in the expression of factors following the treatments with PGF 2a, however, FGF 2 expression levels was significantly higher in the control group at D2 when compared with the control group at D8 (p=0.01), suggesting that FGF 2 are activated in angiogenesis, but in the maintenance phase, decrease to other factors action. It was concluded that FGF 2 and 7 mRNA expressed on luteal tissue on luteogenisis phase and maintenance participate in cell signaling and CL formation.