O uso da coloração de azul de toluidina como método rápido, de baixo custo e eficiente para diagnóstico da fragmentação do DNA espermático em diversas espécies / The use of toluidine blue coloring as a quick, low cost and efficient method for diagnosis of spermal DNA fragmentation in various species / El uso de la coloración de azul de toluidina como método rápido, de bajo costo y eficiente para diagnóstico de la fragmentación del ADN espermático en diversas especies

O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica do azul de toluidina para a análise da fragmentação do DNA de espermatozoides de touro, carneiro e garanhão. Para tanto, utilizamos seis animais de cada espécie. O esperma foi coletado e as amostras foram divididas em duas alíquotas: uma amostra de espermatozoides foi mantida a 5°C (DNA de espermatozoide intacto), e as amostras remanescentes foram submetidas à indução da fragmentação do DNA. As amostras foram então misturadas para obter proporções conhecidas e progressivas de espermatozoides com DNA fragmentado (0, 25, 50, 75 e 100%). Os esfregaços de sêmen foram realizados e submetidos à coloração com TB. Observamos altos coeficientes de regressão linear entre a proporção esperada de DNA danificado e os resultados de TB para amostras de carneiro, touro e garanhão. Em conclusão, a coloração de TB foi considerada uma técnica rápida e eficaz para o estudo do DNA dos espermatozoides.(AU)

The aim of this study was to standardize the toluidine blue stain technique for the analysis of DNA fragmentation of bull, ram and stallion spermatozoa. For this purpose, we used six animals of each specie. Sperm was collected and samples were splited into two aliquots: a sperm sample was kept at 5°C (intact sperm DNA), and the remaining samples were submitted to the induction of DNA fragmentation. Samples were then mixed to obtain known and progressive proportions of sperm with fragmented DNA (0, 25, 50, 75 and 100%). Semen smears were performed and subjected to staining with TB. We observed high linear regression coefficients between the expected proportion of damaged DNA and the results of TB for ram, bull and stallion samples. In conclusion, TB stain was considered a fast and effective technique for the study of spermatozoa DNA.

El objetivo de este estudio fue estandarizar la técnica del azul de toluidina para el análisis de la fragmentación del ADN de espermatozoides de toro, carnero y semental. Para ello, utilizamos seis animales de cada especie. El esperma fue recogido y las muestras se dividieron en dos alícuotas: una muestra de espermatozoides se mantuvo a 5 ° C (ADN de espermatozoides intacto), y las muestras restantes se sometieron a la inducción de la fragmentación del ADN. Las muestras se mezclaron para obtener proporciones conocidas y progresivas de espermatozoides con ADN fragmentado (0, 25, 50, 75 y 100%). Los frotis de semen fueron realizados y sometidos a la coloración con TB. Se observaron altos coeficientes de regresión lineal entre la proporción esperada de ADN dañado y los resultados de TB para muestras de carnero, toro y semental. En conclusión, la tinción de TB fue considerada una técnica rápida y eficaz para el estudio del ADN de los espermatozoides.(AU)

O uso da coloração de azul de toluidina como método rápido, de baixo custo e eficiente para diagnóstico da fragmentação do DNA espermático em diversas espécies / The use of toluidine blue coloring as a quick, low cost and efficient method for diagnosis of spermal DNA fragmentation in various species / El uso de la coloración de azul de toluidina como método rápido, de bajo costo y eficiente para diagnóstico de la fragmentación del ADN espermático en diversas especies

O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica do azul de toluidina para a análise da fragmentação do DNA de espermatozoides de touro, carneiro e garanhão. Para tanto, utilizamos seis animais de cada espécie. O esperma foi coletado e as amostras foram divididas em duas alíquotas: uma amostra de espermatozoides foi mantida a 5°C (DNA de espermatozoide intacto), e as amostras remanescentes foram submetidas à indução da fragmentação do DNA. As amostras foram então misturadas para obter proporções conhecidas e progressivas de espermatozoides com DNA fragmentado (0, 25, 50, 75 e 100%). Os esfregaços de sêmen foram realizados e submetidos à coloração com TB. Observamos altos coeficientes de regressão linear entre a proporção esperada de DNA danificado e os resultados de TB para amostras de carneiro, touro e garanhão. Em conclusão, a coloração de TB foi considerada uma técnica rápida e eficaz para o estudo do DNA dos espermatozoides.

The aim of this study was to standardize the toluidine blue stain technique for the analysis of DNA fragmentation of bull, ram and stallion spermatozoa. For this purpose, we used six animals of each specie. Sperm was collected and samples were splited into two aliquots: a sperm sample was kept at 5°C (intact sperm DNA), and the remaining samples were submitted to the induction of DNA fragmentation. Samples were then mixed to obtain known and progressive proportions of sperm with fragmented DNA (0, 25, 50, 75 and 100%). Semen smears were performed and subjected to staining with TB. We observed high linear regression coefficients between the expected proportion of damaged DNA and the results of TB for ram, bull and stallion samples. In conclusion, TB stain was considered a fast and effective technique for the study of spermatozoa DNA.

El objetivo de este estudio fue estandarizar la técnica del azul de toluidina para el análisis de la fragmentación del ADN de espermatozoides de toro, carnero y semental. Para ello, utilizamos seis animales de cada especie. El esperma fue recogido y las muestras se dividieron en dos alícuotas: una muestra de espermatozoides se mantuvo a 5 ° C (ADN de espermatozoides intacto), y las muestras restantes se sometieron a la inducción de la fragmentación del ADN. Las muestras se mezclaron para obtener proporciones conocidas y progresivas de espermatozoides con ADN fragmentado (0, 25, 50, 75 y 100%). Los frotis de semen fueron realizados y sometidos a la coloración con TB. Se observaron altos coeficientes de regresión lineal entre la proporción esperada de ADN dañado y los resultados de TB para muestras de carnero, toro y semental. En conclusión, la tinción de TB fue considerada una técnica rápida y eficaz para el estudio del ADN de los espermatozoides.