Antioxidantes associados à pressão hidrostática sobre a viabilidade embrionária pós-desvitrificação / Association between antioxidant and hidrostatic pressure on the embryonic viability after

Avaliou-se o efeito de dois antioxidantes no cultivo de embriões pós-desvitrificação, associados ounão à pressão hidrostática (PH) em três experimentos. O primeiro avaliou a interação entre PH e antioxidante(β-mercaptoetanol - BME, cisteamina - CYST e BME + CYST). O segundo, similar ao primeiro, vitrificou osembriões uma hora após passarem ou não pela PH. Os parâmetros foram taxas de eclosão e degeneração com24 e 48 h após passar pela PH (experimento 1) e 12, 24, 48 e 72 h pós-desvitrificação (experimento 2). Oexperimento 3 avaliou a taxa de prenhez de embriões cultivados por 12 h com/sem BME. O primeiroexperimento não demonstrou interação entre os tratamentos. No segundo, os resultados foram similares para BX.O tratamento BME + CYST obteve melhor taxa de eclosão dos BL com 48 e 72 h (76,04%). O mesmo fatoocorreu para a taxa de degeneração às 24 h (BME + CYST = 7,29%; 32,29% controle). Ao transferir os embriões(n = 55), percebeu-se uma similaridade em todos os grupos (38,9% CONT; 16,7% VITRIF e 31,6% BME). Opresente trabalho mostrou que o uso da pressão hidrostática e de BME e CYST não influencia as taxas deeclosão, degeneração e de prenhez de embriões vitrificados.(AU)

This study aimed to evaluate different antioxidants in embryo culture after vitrification, with or withoutthe previous use of hydrostatic pressure (PH). Three experiments were designed to evaluate the interactionbetween PH and antioxidants (β-mercaptoethanol - BME, cysteamine - CYST and BME + CYST) in fresh andvitrified in vitro produced embryos. In experiment 1 hatching and degeneration rates were evaluated at 24 and48 h after passing through the PH and in experiment 2 the same parameters were evaluated at 12, 24, 48 and72 h after heating. The last step of the study evaluated the pregnancy rate of vitrified embryos, cultured for 12 hwith / without BME. The first experiment showed no difference between treatments. The second found similarresults for all parameters evaluated in BX embryos. Note that the BME + CYST treatment obtained a betterhatching rate in BL with 48 and 72 h (76.04%) than the control group (45.83%). The same behavior wasobserved in degeneration 24 h, where the BME + CYST group was 7.29% against 32.29% in the control.However, the pregnancy rates (55 embryo transfers) were not different between control fresh, control vitrifiedand BME groups (38.9%, 16.7% and 31.6%, respectively). This study showed that the use of hydrostaticpressure and antioxidant had no effect on the evaluated parameters.(AU)

Antioxidantes associados à pressão hidrostática sobre a viabilidade embrionária pós-desvitrificação / Association between antioxidant and hidrostatic pressure on the embryonic viability after

Avaliou-se o efeito de dois antioxidantes no cultivo de embriões pós-desvitrificação, associados ounão à pressão hidrostática (PH) em três experimentos. O primeiro avaliou a interação entre PH e antioxidante(β-mercaptoetanol - BME, cisteamina - CYST e BME + CYST). O segundo, similar ao primeiro, vitrificou osembriões uma hora após passarem ou não pela PH. Os parâmetros foram taxas de eclosão e degeneração com24 e 48 h após passar pela PH (experimento 1) e 12, 24, 48 e 72 h pós-desvitrificação (experimento 2). Oexperimento 3 avaliou a taxa de prenhez de embriões cultivados por 12 h com/sem BME. O primeiroexperimento não demonstrou interação entre os tratamentos. No segundo, os resultados foram similares para BX.O tratamento BME + CYST obteve melhor taxa de eclosão dos BL com 48 e 72 h (76,04%). O mesmo fatoocorreu para a taxa de degeneração às 24 h (BME + CYST = 7,29%; 32,29% controle). Ao transferir os embriões(n = 55), percebeu-se uma similaridade em todos os grupos (38,9% CONT; 16,7% VITRIF e 31,6% BME). Opresente trabalho mostrou que o uso da pressão hidrostática e de BME e CYST não influencia as taxas deeclosão, degeneração e de prenhez de embriões vitrificados.

This study aimed to evaluate different antioxidants in embryo culture after vitrification, with or withoutthe previous use of hydrostatic pressure (PH). Three experiments were designed to evaluate the interactionbetween PH and antioxidants (β-mercaptoethanol - BME, cysteamine - CYST and BME + CYST) in fresh andvitrified in vitro produced embryos. In experiment 1 hatching and degeneration rates were evaluated at 24 and48 h after passing through the PH and in experiment 2 the same parameters were evaluated at 12, 24, 48 and72 h after heating. The last step of the study evaluated the pregnancy rate of vitrified embryos, cultured for 12 hwith / without BME. The first experiment showed no difference between treatments. The second found similarresults for all parameters evaluated in BX embryos. Note that the BME + CYST treatment obtained a betterhatching rate in BL with 48 and 72 h (76.04%) than the control group (45.83%). The same behavior wasobserved in degeneration 24 h, where the BME + CYST group was 7.29% against 32.29% in the control.However, the pregnancy rates (55 embryo transfers) were not different between control fresh, control vitrifiedand BME groups (38.9%, 16.7% and 31.6%, respectively). This study showed that the use of hydrostaticpressure and antioxidant had no effect on the evaluated parameters.

Aumento da qualidade de ovócitos recuperados por punção folicular de vacas submetidas previamente à superovulação / Increasing of oocytes quality retrieved by ovum pick-up from cows previously superovulated

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade de ovócitos obtidos por meio de punção folicular de vacas doadoras submetidas à superovulação após a coleta de embriões. Foram utilizadas 22 vacas mestiças (Bos taurus x Bos indicus), que foram divididas em dois grupos: 1) grupo-controle (GC; n = 11), composto por vacas em fase aleatória do ciclo estral, pois não sofreram nenhum tratamento hormonal, e 2) grupo corpos lúteos (GCL; n = 11), vacas que haviam sido utilizadas em um programa de superovulação e coleta de embriões. Todas as vacas foram submetidas à punção folicular ovariana a cada sete dias após a coleta de embriões do GCL, totalizando cinco seções de punção por grupo. Houve uma maior taxa de recuperação de ovócitos de qualidade I e II no GCL do que no GC (28,6 e 6,4%, respectivamente; P < 0,001). Os resultados indicam que ovócitos recuperados após um programa de superovulação e coleta de embriões apresentam melhor qualidade do que ovócitos coletados em fase aleatória do ciclo estral.

The aim of this study was to evaluate the oocyte quality retrieved by ovum pick-up (OPU) after the embryo collection in cows subjected to superovulation procedure. Twenty two crossbred cows were separated into two groups; 1) Control Group (CG; n = 11), cows in random stage of the estrous cycle that did not received any hormonal treatment and 2) Corpus Luteum Group (CLG; n = 11), cows that had been used in a superovulation protocol and embryo collection. All cows were subjected to OPU procedure every 7 days after embryo collection of the CLG. The CLG had higher rate of oocytes quality I and II retrieved than the CG (28.6 e 6.4%, respectively; P < 0.001). The results indicate that oocytes retrieved from cows subjected to protocols of superovulation and embryo collection are of better quality than oocytes collected in random stage of the estrous cycle.

Effect of circulating progesterone on in vitro developmental competence of bovine oocytes

This study evaluated the effects of systemic progesterone concentration on oocyte quality and in vitro embryo production. Oocytes were retrieved from 15 crossbred cows (Bos taurus x Bos indicus). These cows were randomly allocated into three groups to provide low; high, or very low (LP4, HP4 and VLP4, respectively) plasma progesterone concentrations and received either a previously used CIDR, two new CIDR devices, or no progesterone treatment (Day 0). The CIDR devices were replaced every 8 days along with 150 µg of D-cloprostenol injections. The ovum pick-up (OPU) procedure was performed every 4 days from Day 4 to 24. Simultaneous to OPU procedure, plasma was collected to measure progesterone and on Day 18, serial blood samples were collected to assess the pattern of LH release. Hormone concentrations were analyzed by ANOVA and the binomial variables were analyzed by Chi-square. Plasma progesterone concentration was higher in the HP4, intermediate in the LP4, and lower in the VLP4 group (3.6, 1.6, and 0.5 ng/ml; P < 0.05). Plasma LH was higher in the LP4, intermediary in the VLP4, and lower in the HP4 group (1.6, 1.0, and 0.8 ng/ml). A greater percentage of viable oocytes (grades I to III) was retrieved from LP4 (79.4%; 131/165) than from the HP4 (68.4%; 119/174) group (P = 0.07); the VLP4 group did not differ from the others (72.3%; 60/83). Furthermore, the blastocyst production and blastocyst rate was higher in LP4 (1.3 ± 0.4; 28.2%), than in HP4 (0.8 ± 0.4; 16.0%) or the VLP4 (0.4 ± 0.4; 15.0%) group (P = 0.06 and 0.03 for blastocyst production and rate, respectively). In conclusion, intermediate plasma P4 concentration that results in higher circulating LH in cows may improve in vitro embryo production.(AU)

Effect of circulating progesterone on in vitro developmental competence of bovine oocytes

This study evaluated the effects of systemic progesterone concentration on oocyte quality and in vitro embryo production. Oocytes were retrieved from 15 crossbred cows (Bos taurus x Bos indicus). These cows were randomly allocated into three groups to provide low; high, or very low (LP4, HP4 and VLP4, respectively) plasma progesterone concentrations and received either a previously used CIDR, two new CIDR devices, or no progesterone treatment (Day 0). The CIDR devices were replaced every 8 days along with 150 µg of D-cloprostenol injections. The ovum pick-up (OPU) procedure was performed every 4 days from Day 4 to 24. Simultaneous to OPU procedure, plasma was collected to measure progesterone and on Day 18, serial blood samples were collected to assess the pattern of LH release. Hormone concentrations were analyzed by ANOVA and the binomial variables were analyzed by Chi-square. Plasma progesterone concentration was higher in the HP4, intermediate in the LP4, and lower in the VLP4 group (3.6, 1.6, and 0.5 ng/ml; P < 0.05). Plasma LH was higher in the LP4, intermediary in the VLP4, and lower in the HP4 group (1.6, 1.0, and 0.8 ng/ml). A greater percentage of viable oocytes (grades I to III) was retrieved from LP4 (79.4%; 131/165) than from the HP4 (68.4%; 119/174) group (P = 0.07); the VLP4 group did not differ from the others (72.3%; 60/83). Furthermore, the blastocyst production and blastocyst rate was higher in LP4 (1.3 ± 0.4; 28.2%), than in HP4 (0.8 ± 0.4; 16.0%) or the VLP4 (0.4 ± 0.4; 15.0%) group (P = 0.06 and 0.03 for blastocyst production and rate, respectively). In conclusion, intermediate plasma P4 concentration that results in higher circulating LH in cows may improve in vitro embryo production.

Influência da vitrificação na incidência de ovócitos bovinos aneuplóides maturados in vitro.

O presente estudo objetivou verificar a incidência de aneuploidias em ovócitos bovinos vitrificados em diferentes períodos de maturação. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro e divididos em cinco grupos: controle (ovócitos não vitrificados); grupos 0-h (vitrificados antes do começo da maturação); e grupos 8, 12 e 22-h (vitrificados respectivamente 8, 12 e 22 h após o começo da maturação). Os ovócitos permaneceram vitrificados por 24 h e então foram descongelados e completaram 24 horas de maturação. Em seguida os ovócitos foram desnudados, fixados em lâmina e corados com orceína-acética. Nenhuma diferença foi encontrado (P > 0,05) entre o grupo controle (6,2%, 1/16 ) e grupos 0, (22,0, 2/9) 8 h (22,0, 2/9), 12 (25,0%, 3/12), 22 h (23,5%, 4/17). Os resultados sugerem que a vitrificação em diferentes períodos de maturação não influencia na taxa de aneuploidia.

Influência da vitrificação na incidência de ovócitos bovinos aneuplóides maturados in vitro.

O presente estudo objetivou verificar a incidência de aneuploidias em ovócitos bovinos vitrificados em diferentes períodos de maturação. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro e divididos em cinco grupos: controle (ovócitos não vitrificados); grupos 0-h (vitrificados antes do começo da maturação); e grupos 8, 12 e 22-h (vitrificados respectivamente 8, 12 e 22 h após o começo da maturação). Os ovócitos permaneceram vitrificados por 24 h e então foram descongelados e completaram 24 horas de maturação. Em seguida os ovócitos foram desnudados, fixados em lâmina e corados com orceína-acética. Nenhuma diferença foi encontrado (P > 0,05) entre o grupo controle (6,2%, 1/16 ) e grupos 0, (22,0, 2/9) 8 h (22,0, 2/9), 12 (25,0%, 3/12), 22 h (23,5%, 4/17). Os resultados sugerem que a vitrificação em diferentes períodos de maturação não influencia na taxa de aneuploidia.

Índice de recuperação e qualidade de ovócitos de bezerras Nelore, superovuladas e não superovuladas, de dois a três meses de idade

Nelore heifers two to three months of age were evaluated for the recovery index and quality of their oocytes. For follicular aspiration and oocyte harvest were constituted the groups control (CG, n=9) and treated (TG, n=9), with the superovulation done with 140mg of FSH three days before surgery and 1.6 mg of LH intravenous 18 hours before surgery. The oocytes were classified as: QI-several layers of cumulus cells and homogeneous cytoplasm, QII-more than three cumulus cells layers and cytoplasm with some granulation, QIII-expanded cumulus cells, QIV-few cumulus cells or denuded, and QV-degenerated. No difference between the average index of oocyte for CG (24.5 oocytes/animal) and TG (25.2 oocytes/animal) was found. The TG showed higher percentage of QIII oocytes (24.7) than the CG (5). It can be concluded that Nelore heifers two to three months of age are fit to be oocyte donors without superovulation.

Avaliaram-se o índice de recuperação e a qualidade de ovócitos aspirados de ovários de bezerras Nelore de dois a três meses de idade. Foram utilizadas 18 bezerras para aspiração folicular e colheita de ovócitos, divididas em dois grupos, controle (GC, n=9) e superovulado (GT, n=9), com a superovulação feita com 140mg de FSH três dias antes da cirurgia e 1,6mg de LH endovenoso 18 horas antes da aspiração folicular. Os ovócitos foram classificados em QI, com várias camadas de células do cumulus e citoplasma homogêneo, QII, com aproximadamente três camadas de células do cumulus e citoplasma apresentando alguma granulação, QIII, com células do cumulus expandidas, QIV, com poucas células do cumulus ou desnudos e QV, degenerados. O índice médio de ovócitos obtidos do GC foi de 24,5 ovócitos/animal e do GT de 25,22 (P>0,05). O GT apresentou maior percentual de ovócitos QIII em relação ao GC, 24,7 e 5%, respectivamente. Bezerras Nelore de dois a três meses de idade possuem potencial para serem doadoras de ovócitos sem necessidade de superovulação.