Resumo
A cicatrização de feridas cutâneas é um processo complexo que visa restaurar a integridade do tecido. Atualmente na rotina clínica veterinária existem diversos tratamentos que auxiliam nesse processo estimulando a cicatrização. Nesse sentido, as plantas medicinais já utilizadas para o tratamento de enfermidades, são uma alternativa crescente no ramo da veterinária para o tratamento de lesões cutâneas. Contudo, para o desenvolvimento de um produto comercial, se faz necessário a comprovação de usa ação e segurança. Neste trabalho objetivou-se avaliar a aplicabilidade de fórmulas contendo ativos de extratos vegetais no tratamento de lesões cutâneas, em experimentos ex vivo e in vivo. Inicialmente obteve-se os extratos e confeccionou-se duas fórmulas farmacêuticas distintas, a primeira chamda de LCFT 2001 e a segunda chamada de LCFT 2002. Nos estudos in vivo determinou-se parâmetros metodológicos de temperatura, tempo de exposição e região corporal para a confecção de lesões térmicas de segundo grau. Avaliou-se o efeito terapêutico das formulações com a indução de lesões térmicas em animais experimentais, dividindoos em quatro grupos de tratamento diário: LCFT 2001, LCFT 2002, produto comercial com ativo colagenase (CP) e ausência de tratamento (CN). Aos dois, cinco, oito, 14 e 25 dias de tratamento avaliou-se as lesões quanto a parâmetros clínicos, de retração cicatricial e histopatológicos, e aos 25 dias quanto a tensiometria. Também investigouse o efeito anti-inflamatório com a indução de orelhas de ratos com óleo de cróton a 10%, e após uma hora receberam os seguintes tratamentos: LCFT 2001, LCFT 2002, produto comercial contendo dexametasona (CP), solução fisiológica NaCl 0,9% (CN). Após seis horas de indução, amostras de orelhas foram analisadas clínica e histopatologicamente. No estudo de toxicidade, utilizou-se bulbos oculares provenientes de frangos, os quais receberam 500µL ou 0,5g dos tratamentos propostos: LCFT 2001, LCFT 2002, ácido acético 10% (CP) e solução fisiológica NaCl 0,9% (CN). Após a instilação dos produtos e aos 30, 75, 120, 180 e 240 minutos seguintes, avaliou-se os olhos quanto a parâmetros de retenção de fluoresceína, opacidade e edema de córnea. Constatatou-se que temperaturas entre 90° e 100°, por 15 ou 20, na região torácica reproduz lesão térmica de segundo grau. Observouse o efeito cicatrizante das fórmulas farmacêuticas semelhante a colagenase, com exacerbação da inflamação removendo a necrose e proliferando a granulação nos primeiros dias de tratamento, além da estimulação do desenvolvimento de colágeno e a reepitelização aos 14 e 25 dias de tratamento, formando uma cicatriz resistente. Também constatou-se que as fórmulas expressaram ação pró-inflamatória atingindo efeito semelhante da dexametasona. Além disso, as fórmulas não apresentaram opacidade e edema de córnea significativo, classificando-as como não irritantes ao olho. Assim, conclui-se que as fórmulas contendo ativos de extrato vegetais possuem propriedades cicatrizantes, anti-inflamatória e são seguras quanto a irritação ocular, o que possibilitou a solicitação de registro de patente realizado em setembro de 2018.
Healing of skin wounds is a complex process that aims to restore tissue integrity. Currently in the veterinary clinical routine there are several treatments that help in this process stimulating healing. In this sense, medicinal plants already used for the treatment of diseases, are a growing alternative in the veterinary branch for the treatment of cutaneous lesions. However, for the development of a commercial product, it is necessary to prove use of action and safety. The objective of this study was to evaluate the applicability of formulas containing plant extracts in the treatment of cutaneous lesions in ex vivo and in vivo experiments. Initially the extracts were obtained and two different pharmaceutical formulas were made, the first call of LCFT 2001 and the second call of LCFT 2002. In the in vivo studies were determined methodological parameters of temperature, time of exposure and body region for the confection of second-degree thermal lesions. It was evaluated the therapeutic effect of the formulations with the induction of thermal lesions in experimental animals, dividing them into four daily treatment groups: LCFT 2001, LCFT 2002, commercial product with active collagenase (CP) and absence of treatment (CN). At two, five, eight, 14 and 25 days of treatment the lesions were evaluated for clinical parameters, cicatrization and histopathological retraction, and at 25 days for tensiometry. The anti-inflammatory effect was also investigated with the induction of rat ears with 10% chroton oil, and after one hour they received the following treatments: LCFT 2001, LCFT 2002, commercial product containing dexamethasone (CP), physiological solution NaCl 0.9% (CN). After six hours of induction, ear samples were analyzed clinically and histopathologically. In the toxicity study, ocular bulbs from chickens were used, which received 500L or 0.5g of the proposed treatments: LCFT 2001, LCFT 2002, 10% acetic acid (CP) and physiological solution NaCl 0.9% (CN). After instillation of the products and at 30, 75, 120, 180 and 240 minutes, the eyes were evaluated for fluorescein retention, opacity and corneal edema parameters. It has been found that temperatures between 90 ° and 100 °, by 15 ° or 20 °, in the thoracic region reproduce thermal lesion of second degree. The healing effect of the collagenase-like pharmaceutical formulas was observed, with exacerbation of inflammation removing necrosis and proliferating granulation in the first days of treatment, as well as stimulation of collagen development and reepithelialization at 14 and 25 days of treatment, forming a resistant scar. It was also found that the formulas expressed proinflammatory action reaching a similar effect of dexamethasone. In addition, the formulas did not present significant opacity and corneal edema, classifying them as non-irritating to the eye. Thus, it is concluded that the formulas containing plant extract actives have healing properties, anti-inflammatory properties and are safe for ocular irritation, which made possible the application of a patent registration made in September 2018.
Resumo
A cicatrização de feridas cutâneas é um processo complexo que envolve diversas vias biológicas as quais buscam restaurar a integridade do tecido. Atualmente existem diversos tratamentos que visam auxiliar nesse processo estimulando a cicatrização. Nesse sentido, as plantas medicinais já utilizadas na medicina popular para o tratamento de diversas enfermidades são uma alternativa de baixo custo e fácil acesso para o tratamento de lesões cutâneas. Objetivou-se avaliar a ação do extrato oleoso de Bixa orellana L. na cicatrização de feridas abertas em modelo experimental. Inicialmente, foi realizado a identificação dos compostos oleosos através de cromatografia gasosa e teste de citotoxicidade com o óleo da semente de urucum determinando as doses de 0,1% e 0,01% para o ensaio in vivo. Para o experimento in vivo foram confeccionadas cirurgicamente duas lesões no dorso de ratos wistar que foram tratadas diariamente até 21 dias com: Extrato oleoso de urucum 0,1% (U 0,1%), extrato oleoso de urucum 0,01% (U 0,01%), vaselina (V) e solução fisiológica (SF). As avaliações ocorreram nos períodos de quatro, sete, 14 e 21 dias e ao final de cada período os animais foram eutanásiados para realização de análises e coleta de fígado, rins e pele. Foram analisadas a presença/ausência de exsudato, crosta e epitelização. Além disso, foi realizado registro fotográfico para determinar as áreas das lesões observando a retração da ferida. As amostras de tecido foram processadas e avaliadas microscopicamente, fígado e rins quanto à presença de alterações morfológicas e a pele quanto à fase da cicatrização e a quantidade de fibrina. Aos 21 dias de tratamento as peles foram analisadas tensiometricamente. Os ácidos graxos identificados foram: ácido linoleico, geranil linalool, ácido palmítico, ácido oleico, ácido esteárico, escaleno e geranil-terpinene. Nos aspectos clínicos todas as amostras apresentaram evolução cicatricial considerada fisiológica, não diferindo nos parâmetros de exsudato e crostas. Quanto à epitelização os grupos tratados com urucum apresentaram maior presença aos sete dias e maior retração cicatricial aos quatro dias quando comparado aos demais grupos. Na análise tensiométrica os grupos tratados com urucum apresentaram menor tensão que os grupos tratados com vaselina e solução fisiológica. Na histopatologia dos rins e fígado, não foram observadas alterações significativas. Na histologia aos setes dias os grupos tratados com urucum apresentavam-se na fase inflamatória enquanto os demais grupos caracterizavamse na fase proliferativa. Quanto à quantidade de fibrina, as lesões tratadas com urucum apresentaram exuberante rede de fibrina nos dois primeiros momentos de avaliação enquanto as lesões tratadas com vaselina e solução fisiológica apresentaram quantidades menores nestes momentos. Assim conclui-se que o extrato oleoso de urucum nas doses de 0,1% e 0,01% acelera a cicatrização nos primeiros dias de tratamento, porém proporciona a formação de uma cicatriz menos resistente.
Skin wound healing is a complex process that involves several biological signaling routs in order to restore tissue integrity. Diverse treatment options are available, and they will aid the healing process. Alternatively, medicinal plants are also used, and represent a low cost, easy access option. This study assessed the oil extract of Bixa orellana L. as a healing agent in the rat model of open wound healing. Initially, the oil was obtained and characterized through gas chromatography. Furthermore, the cytotoxic potential of the oil was assessed, in culture. For the in vivo assays, 0.1% and 0.01% oil doses were used. Wounds were surgically produced in Wistar rats, these were treated with the oil extract at 0.1% (U 0.1%), 0.01% (U 0.01%), petrol jelly (V) and saline (SF). The animals were assessed at four, seven, 14 and 21 days of treatment. The animals were euthanized at each evaluation date and skin, liver, and kidney samples were harvested. Clinically, the wounds were assessed regarding the presence of crust, exudate, and epithelialization. Photographic records were used to assess the wound area at each date. Tissue samples were processed and evaluated microscopically regarding morphological alterations (kidney and liver), and the healing phase and fibrin collection (skin). At 21 days, the skins were also assessed regarding the tension strength of the healed tissues. Major components of the oil were: ácido linoleico, geranil linalool, ácido palmítico, ácido oleico, ácido esteárico, escaleno e geranil--terpinene. Thein vivo essays revealed similar clinical evolution of the wounds, throughout the treatment groups, especially regarding crust and exudate. An earlier onset of epithelialization was observed in the oil treated wounds, when compared to the controls. Likewise, these wound had a faster shrinkage rate by day four. Tension resistance of the oil treated wounds was, however, inferior to that of the controls. Histopathologicaly, no alterations were observed in kidney and liver tissues. The skin samples of oil treated wounds at seven day had more lesions in the inflammatory stage, when compared to the controls, which were majorly in the proliferatory phase. Oil treated wounds also had more fibrin in the first two assessment dates, when compared to the controls. B. orellana L oil, at 0.1% and 0.01%, seems to have hurried the healing process in the first days of treatment, though promoting a final wound capable of resisting lower tension strengths.